新的神经分化因子1基因突变导致的青少年起病的成人型糖尿病6型1例

报道1例由神经分化因子1(NEUROD1)基因突变引起青少年起病的成人型糖尿病6型(MODY6)患者的诊疗经过。患者为17岁男性,12岁起病,多次并发糖尿病酮症酸中毒,并发早期糖尿病肾脏病,合并低骨量,起病后依赖胰岛素治疗。基因检测结果显示,患者NEUROD1基因第二外显子区域发生移码突变c.681delC(p.Ser228fs),Sanger测序验证患者父亲具有相同位点突变,遗传软件预测该突变具有致病性。MODY6易并发糖尿病酮症酸中毒,合并糖尿病肾脏病、低骨量,通过对该患者的报道,以期为今后对MODY6病例临床特点的研究提供一定的经验和依据。

新的神经分化因子1基因突变导致青少年的成人起病型糖尿病6型的临床及分子遗传研究

目的通过对1例青少年的成人起病型糖尿病(MODY)6型患者的临床特征及分子遗传学资料总结,阐释该病的临床特点及分子遗传机制。方法本研究收集了临床上1例可疑MODY患者的临床资料及辅助检查结果,对该患者进行外周血DNA提取,进行特殊类型糖尿病检测包的二代测序后进行Sanger一代测序验证,将基因检测结果与遗传学数据库比对,遗传学软件进行功能预测及蛋白质结构预测。此外,通过检索文献回顾了国内外已报道的MODY6的临床特点。结果本研究发现了一个导致MODY6的新的神经分化因子1(NEUROD1)基因突变(p.R103L),该基因突变位点位于NEUROD1中的碱性螺旋-袢-螺旋结构域(bHLH),该结构域为NEUROD1与DNA进行结合的部位,其突变影响了NEUROD1对胰岛素基因的调节。回顾文献,我们发现NEUROD1基因杂合突变外显不完全,发病年龄以及临床异质性强。此外,妊娠期可能是诊断MODY6的重要窗口。既往文献报道的两个中国人NEUROD1突变的家系中,NEUROD1基因突变被认为是2型糖尿病的致病基因。而本研究发现的这例NEUROD1突变患者符合典型的MODY特点:起病年龄<25岁,无胰岛素抵抗及自身免疫证据,家族中有连续三代糖尿病家族史。结论本研究发现了新的NEUROD1基因突变并阐述了其可能的致病机制,这也是中国人群中首例符合典型MODY特点的MODY6病例。

神经分化因子1 （Ala45Thr）基因多态性与2型糖尿病易感性关系的meta分析

目的 通过meta分析评估神经分化因子1（Neuro1D1）Ala45Thr基因多态性与2型糖尿病的关联性.方法 通过系统检索PubMed、EMBASE、CNKI、万方数据库、维普数据库等中英文数据库,在Kavvoura等已发表1999年至2004年NeuroD1 （Ala45Thr）基因多态性与2型糖尿病关联性的meta分析基础上,纳入2004年至2012年有关NeuroD1 （Ala45Thr）基因多态性与2型糖尿病相关性的研究,以2型糖尿病组和正常对照组基因分布的OR值为统计量,应用Rev Man 5.0软件对研究结果进行异质性检验和相关数据的合并,最终纳入13篇病例对照试验文献.结果 共入选2型糖尿病患者3 896例,对照组3 186名.Meta分析结果显示,黄种人2型糖尿病与对照组Thr45Thr45/（Ala45Thr＋Ala45Ala45） OR值为3.16（95％CI0.99 ～10.11）,白种人OR值为1.09（95％ CI0.90～ 1.32）,差异均无统计学意义（P＞0.05） 而2型糖尿病组和对照组G/A等位基因频率OR值为0.85（95％ CI0.72 ～0.99）/1.18（95％ CI.07 ～ 1.38）,差异有统计学意义（Z=2.02,P=0.04）.结论 NeuroD1 （Ala45Thr）位点A等位基因可能是2型糖尿病的危险因素.

神经源性分化因子在新生大鼠短暂脑缺氧中的表达

目的观察新生大鼠短暂性缺氧后脑神经源性分化因子(NeuroD)表达的变化。方法新生10～24h的SD大鼠短暂置于100%氮气环境中,建立缺氧窒息模型。33只新生大鼠随机分为对照组、缺氧10min组、缺氧20min组,采用免疫荧光法和Western blotting检测NeuroD表达的变化。结果在大脑皮质区和海马齿状回可见NeuroD免疫荧光染色阳性细胞;Western blotting分析显示,随缺氧时间的延长,NeuroD的表达量明显增加,缺氧10min组与对照组、缺氧20min组与缺氧10min组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论短暂缺氧可引起NeuroD表达量的增加,表达部位主要在大脑皮质、海马等神经干细胞/神经前体细胞聚集区。

RT-PCR法检测神经源性分化因子mRNA在大鼠脑发育过程中的表达

目的观察大鼠不同发育时期脑内神经源性分化因子(NeuroD)mRNA表达量的变化,探讨其对神经细胞的分化和成熟发挥的作用。方法提取不同发育阶段大鼠不同脑组织中的mRNA,RT-PCR法反转录扩增NeuroD和β-actin,利用凝胶成像系统检测其相对表达量。结果 NeuroD在受孕7.5d(E7.5)时出现表达,在E10.5和E21.5时分别达到两次高峰,平均吸光度值为20437.88±598.28和14482.23±1134.49,表达水平显著高于其他各组(P<0.01),NeuroD/β-actin比值在E12.5、E18.5和E21.5分别为1.59±0.09、1.61±0.07和1.70±0.11,显著高于其他时间段(P<0.01)。结论在大鼠脑发育过程中,NeuroD mRNA的表达呈明显时间特异性,在E10.5左右大鼠各原始脑泡的形成过程中,NeuroD mRNA明显增高;在胚胎发育的晚期,脑组织形态进一步完善和成熟的过程中NeuroD达到第二次表达高峰,与鼠脑的发育过程相符。推测NeuroD对鼠脑的早期神经细胞分化以及晚期细胞的成熟均起一定作用。

围产期短暂性缺氧对神经源性分化因子mRNA表达的影响

观察短暂性缺氧后鼠脑神经源性分化因子（NeuroD）表达量的变化，探讨其在神经系统再生中的可能作用。方法：通过延迟剖宫产术建立胎鼠宫内窘迫模型，原位杂交技术检测不同时间海马结构NeuroD mRNA表达量的变化。结果：原位杂交结果显示，模型组无论在齿状回颗粒下层（SGZ）还是CAl区，NeuroD在P13、P20、P27d的表达量与对照组相比均增高。结论：短暂性缺氧后诱导NeuroD mRNA增高，可能参与了神经系统的再生。

短暂性缺氧后海马神经元神经源性分化因子表达增高

目的观察短暂性缺氧后神经源性分化因子(NeuroD)表达量的变化,探讨其在神经系统再生中的可能作用。方法体外培养海马神经元,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学方法、尼氏体染色法鉴定。将培养5d的神经元置于三气培养箱(37℃、94%N2、5%CO2、1%O2)内缺氧培养。RT-PCR检测缺氧3h和6h后神经元NeuroD mRNA表达水平,电镜观察神经元形态学变化。将缺氧3h的神经元置于37℃、5%CO2培养箱中继续培养96h,固定前48h加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)(终浓度为10μmol/L),免疫组织化学检测有无细胞增殖。结果 RT-PCR显示,缺氧3h后NeuroD表达量明显增高(P<0.01),而缺氧6h后NeuroD表达量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。电镜结果显示,缺氧3h后细胞内细胞器未见明显变化,缺氧6h后细胞内出现空泡样变化,线粒体肿胀明显。免疫组织化学检测到BrdU阳性细胞。结论短暂性缺氧后NeuroD表达量增高,可能参与了神经系统的再生过程。

短暂性缺氧对鼠脑神经源性分化因子表达的影响

目的观察短暂性缺氧后鼠脑神经源性分化因子(NeuroD)表达量的变化,初步探讨其在神经系统再生中的可能作用。方法"延迟剖宫产术"建立胎鼠宫内窘迫模型,通过RT-PCR检测窘迫不同时间后NeuroD mRNA表达量的变化,通过免疫荧光对NeuroD蛋白的表达进行定性分析。结果宫内窘迫5min,NeuroD mRNA表达量未见明显变化(P>0.05),窘迫10、15、20min后其表达量随窘迫时间的延长而不断增高。免疫荧光示在尾壳核区域NeuroD表达量明显增加。结论短暂性缺氧后NeuroD表达量增高,可能参与了神经系统的再生过程。

短暂缺氧致新生大鼠海马内β-连环素、神经源性分化因子1和胰岛素受体表达动态改变

目的探讨短暂缺氧对新生大鼠海马β-连环素(β-catenin)、神经源性分化因子1(NeuroD1)、胰岛素受体(insulin receptor)表达的影响。方法将3日龄SD大鼠置于8%O_(2)+92%N_(2)的混合气体中2h,采用尼氏染色及透射电镜观察海马结构病理变化;于缺氧后2h、4h、24h断头取脑,免疫荧光染色法、实时荧光定量PCR技术检测海马结构β-catenin、NeuroD1、insulin receptor表达的变化。结果缺氧后大鼠海马结构发生细胞排列松散、细胞间隙增宽、神经元轻度肿胀等超微结构以及细胞形态的改变。与对照组相比,免疫荧光染色显示:缺氧后2h,3种蛋白的免疫荧光强度无明显差别;缺氧后4h,3种蛋白免疫荧光强度出现增高;缺氧后24h,三种蛋白免疫荧光强度均增高。实时荧光定量PCR显示:与对照组相比,大鼠缺氧后2h,三组目的基因表达量无统计学差异;缺氧后4h,β-catenin基因表达量降低,NeuroD1和insulin receptor基因表达量增高;缺氧后24h,β-catenin和insulin receptor基因表达量无统计学差异,但NeuroD1基因表达量持续增高。结论采用3日龄SD大鼠置于8%O_(2)+92%N_(2)的混合气体中2h,可建立缺氧性脑损伤模型,缺氧可能通过上调通路关键因子激活Wnt/β-catenin/NeuroD1途径对大鼠海马β-catenin、NeuroD1和insulin receptor的表达产生影响。

神经胶质细胞分化调节因子样因子与心脏代谢性疾病关系的研究进展

神经胶质细胞分化调节因子样因子(Metrnl)是一种主要在白色脂肪组织中表达的分泌蛋白,已被确定为一种新的脂肪因子。研究表明,Metrnl与心脏代谢性疾病的发生发展相关,可能是一种可靠的生物标志物,并成为相关疾病潜在的治疗靶点。本文就Metrnl与心脏代谢性疾病的可能的相关机制及其临床研究进展作一综述。

神经调节因子Neuregulin-1及其受体ErbB2、ErbB4在恒河猴大脑、小脑的表达及分布

目的神经调节因子(Neuregulin-1,Nrg1)是类表皮样生长因子家族重要成员,本研究观察比较恒河猴大脑皮质、白质及小脑皮、白质Nrg1及其受体ErbB2、ErbB4表达及分布。方法使用苏木精-伊红(HE)染色观察恒河猴大脑及小脑皮质、白质基本结构形态。使用免疫荧光双标法检测恒河猴大脑及小脑皮质、白质中Nrg1及其受体ErbB2和ErbB4表达与分布。结果免疫荧光显示Nrg1可与其受体ErbB2或ErbB4共定位表达于恒河猴大脑皮质部分细胞中;而在大脑白质,仅Nrg1与ErbB4存在明显定位。在小脑皮质细胞以及白质中均可见Nrg1与ErbB2明显定位,而ErbB4荧光信号则不明显,且Nrg1与ErbB4无明显共定位。结论本研究提示Nrg1及其受体ErbB2、ErbB4在恒河猴大脑小脑皮质及白质中存在着差异性表达和共定位,以Nrg1/ErbB为基础的旁分泌或自分泌机制有可能参与高等动物脑功能活动。

胰腺十二指肠同源盒基因-1/神经生成素3信号通路在胰岛β细胞分化中的作用机制研究进展

胰岛β细胞数量的绝对不足或相对减少可导致糖尿病的发生发展。胰腺十二指肠同源盒基因-1(Pdx-1)是胰腺发育和胰岛素基因转录的重要调控基因,在胰腺发育和胰腺各种细胞的分化中发挥重要作用。神经生成素3(Ngn3)是对胰岛发育有重要影响的转录因子,可始动内分泌祖细胞,促进胰内胚层细胞向内分泌细胞分化,同时维持成熟胰岛细胞的功能。Pdx-1/Ngn3信号通路可促进干细胞向胰岛β细胞的分化和增殖,Pdx-1是Ngn3的上游调控因子,对胰干细胞的作用在于激活Ngn3的表达,Ngn3可通过调控神经细胞分化因子1、胰岛素瘤相关蛋白1(Insm1)、胰岛素基因增强结合蛋白1及Insm2、桩蛋白6、Nkx2同源框2、NK6 Homeobox 1等直接靶基因,影响胰内分泌细胞的分化和形成。

异氟醚麻醉抑制海马齿状回神经干细胞的增殖及分化

背景:异氟醚由于起效快、苏醒迅速、无积蓄等优点在儿科手术也逐渐被推广使用,然而其安全性还需要进一步观察。目的:观察异氟醚麻醉对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化的影响。方法:将大鼠随机分为异氟醚组和对照组,分别予以异氟醚吸入麻醉和仅吸入空气。分别在给药前及停止给约后对动物予以5-溴脱氧球苷(Brd U)腹腔注射,第2次注射后24 h处死大鼠,获得脑组织,检测Brd U+和脑内神经源性分化因子表达情况。结果与结论:停止麻醉处理之后进行血糖以及动脉血气检测,发现异氟醚组大鼠Pa CO2出现轻度上升,p H值出现轻微下降,而Pa O2、BE、Sa O2以及血糖水平则均未出现改变。与对照组相比,异氟醚组经异氟醚麻醉之后,未出现明显的缺氧表现,包括紫绀和呼吸抑制等。大鼠海马齿状回神经干细胞大多分布在门区,异氟醚组的Brd U阳性细胞数少于对照组(P<0.05)。两组大鼠海马齿状回存在大量新生细胞表达Neuro D,门区Neuro D+/Brd U+阳性细胞数明显高于颗粒细胞下区,且异氟醚组显著高于对照组(P<0.05)。结果证实,异氟醚麻醉会对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化产生一定的影响,抑制其增殖,并促进其神经元分化。

短暂缺氧对新生鼠脑细胞凋亡和神经再生的影响

目的探讨短暂缺氧对新生鼠脑神经源性分化因子(NeuroD)表达以及细胞凋亡和神经再生的影响。方法新生10～24h的SD大鼠短暂置于100%氮气环境中,建立出生窒息模型。96只新生大鼠随机分为对照组、缺氧20min组,其中1个亚组分3个时间点(13、20、27d)取材,采用免疫荧光法检测NeuroD、免疫组织化学法检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)表达的变化。另一亚组分2个时间点(6、20d)取材,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果免疫荧光/免疫组织化学结果显示,缺氧20min组13、27d NeuroD和BrdU在海马CA1区/室下区的表达量均高于对照组(P<0.05),且在20d表达量最高(P<0.01)。TUNEL法检测出缺氧20min后6d在海马CA1区凋亡细胞阳性率明显高于对照组(P<0.01),而20d凋亡细胞阳性率与对照组比较差异无统计学意义。结论缺氧引起迟发性细胞凋亡,导致神经元缺失,可能诱导细胞增殖、分化,触发神经发生,对受损的脑组织进行代偿性修复和神经功能重建。

中枢神经系统内胰岛素的来源、生物作用及调控的研究进展

胰岛素（insulin）由51个氨基酸组成,其分子式为C257H383N65O77S6,相对分子质量5808。人类胰岛素基因位于第11号染色体,小鼠胰岛素基因位于第7号染色体。体内胰岛素有两种来源：一种是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、胰高血糖素等的刺激而分泌。另一种是由中枢内神经元表达,不仅能降低血糖,

神经源分化因子基因多态性与2型糖尿病的关联性研究

目的 探讨神经源分化因子 (neurogenic differentiation factor 1,Neuro D)基因多态性与 2型糖尿病发生的关联性。方法 运用错配聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性方法检测了中国湖北地区汉族 32 4例 2型糖尿病 (其中以发病年龄 40岁为界 ,分为早发及晚发两组 )及 12 4名正常对照者 ,Neuro D基因第 45位密码子碱基变异 (GCC→ ACC)。结果 Neuro D基因在所测人群中未发现有纯合变异者。在早发 2型糖尿病组 ,其 AT基因型频率为 2 6 .8% ,与正常对照组 (10 .5 % )及晚发 2型糖尿病组 (11.6 % )比较 ,差异有显著性 (分别为χ2 =7.85 ,P=0 .0 0 5 ;χ2 =8.81,P=0 .0 0 3) ;Thr45等位基因频率在早发 2型糖尿病组及正常对照组、晚发 2型糖尿病组分别为 13.4%、5 .2 %和 5 .8% ,差异亦有显著性 (χ2 =7.15 ,P=0 .0 0 8;χ2 =8.13,P=0 .0 0 4) ;晚发 2型糖尿病组与正常对照组比较 ,Ala45 Thr基因型频率 (11.6 % vs10 .5 % ,P>0 .0 5 )及等位基因频率 (5 .8% vs 5 .2 % ,P>0 .0 5 )差异不明显 ,Thr45等位基因与早发 2型糖尿病发生相关 (OR=2 .5 2 ,95 % CI:1.42～ 4.49) ;基因型为 AT型的 2型糖尿病患者其空腹血浆 C肽水平较 AA型患者低 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 Neuro D基因多态性与早发

神经源性分化因子对小鼠放射性肠损伤的治疗作用

目的 研究神经源性分化因子（NeuroD）对放射性肠损伤的治疗作用.方法 采用原核表达系统表达、纯化NeuroD与绿色荧光蛋白（EGFP）的融合蛋白（NeuroD-EGFP融合蛋白）,利用倒置荧光显微镜观察NeuroD-EGFP融合蛋白的体外进入细胞的效率.40只C57BL/6J小鼠采用随机数字表法分为正常对照组、磷酸盐缓冲液（PBS）组、EGFP组、NeuroD-EGFP融合蛋白组,每组10只.除正常对照组外,其余3组动物经9 Gy γ射线全身照射后,观察NeuroD-EGFP融合蛋白在小肠上皮细胞内的分布情况和NeuroD对放射性肠损伤的治疗作用.结果 纯化得到了NeuroD-EGFP融合蛋白.细胞上清中加入NeuroD-EGFP融合蛋白后,可见绿色荧光聚集在细胞内部,表明其可穿过细胞膜进入细胞内.小鼠腹腔注射NeuroD-EGFP融合蛋白5h后,小肠绒毛上皮细胞内部有绿色荧光聚集.小鼠照射后3.5d,NeuroD-EGFP组小鼠绒毛高度高于PBS及EGFP组（F =49.49,P＜0.01）,隐窝深度及隐窝数目大于PBS及EGFP组（F=16.72、10.32,P＜0.01）.结论 NeuroD蛋白可促进放射后肠道绒毛及隐窝的修复,对放射性肠损伤具有治疗作用.