靳三针疗法对窒息脑瘫幼鼠神经干细胞增殖与分化的实验研究

【目的】观察靳三针疗法对脑瘫大鼠神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响。【方法】选用SD新生大鼠,随机分为假手术组、模型组、靳三针疗法治疗组(治疗组,针刺百会、颞Ⅰ针、曲池、内关、足三里、涌泉),模型组与治疗组均采用结扎单侧颈总动脉法复制脑瘫大鼠模型,其中治疗组于手术后24 h开始针刺,共14 d。各组于造模后15 d处死大鼠制备脑组织提取液。另取健康SD新生大鼠,取大脑海马部位,分离、扩增NSCs,采用免疫细胞化学法检测NSCs特征性标记Nestin与B rdu表达,以鉴定培养的细胞及体外分化能力。培养细胞分为正常对照组,低、高浓度组(分别加入100、300μL/mL的治疗组脑组织提取液),培养1、3、5 d后,采用免疫细胞化学法和免疫荧光法检测各组神经元样细胞和星形胶质样细胞的特征性标志物神经丝蛋白(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,观察各组NSCs分化情况。采用流式细胞术检测各组NF、GFAP阳性细胞数,观察脑组织提取液促进NF、GFAP表达的时效和量效关系。【结果】扩增后的细胞球Nestin与B rdu均呈阳性,证实体外培养的细胞为NSCs,并处于分裂增殖旺盛期。细胞培养1、3、5 d后,NF、GFAP染色均呈阳性,且正常对照组阳性细胞少,低、高浓度组明显增多,呈浓度依赖性,表明NSCs已分化为神经元细胞和星形胶质细胞。同一时间段内低、高浓度组NF、GFAP阳性细胞数均较正常对照组显著增高(P<0.05或P<0.01),高浓度组在培养1、3、5 d后,NF、GFAP阳性细胞数也显著增高(P<0.05或P<0.01),表明治疗组脑组织提取液可促进NF、GFAP表达,且呈一定的量效和时效关系。【结论】靳三针疗法治疗脑瘫可能是通过促进NSCs的增殖和定向分化,从而达到修复脑损伤的目的。

龟板提取物诱导神经干细胞向神经元分化过程中相关microRNA表达变化

【目的】观察龟板提取物诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元细胞定向分化过程中相关micro RNA表达的变化。【方法】分离培养孕14 d SD胎鼠原代神经干细胞,经免疫荧光染色鉴定神经干细胞的特异抗原及其多向分化能力。神经干细胞随机设空白对照组、龟板提取物低浓度组(3μg/m L)、龟板提取物高浓度组(30μg/m L)。诱导分化7 d,提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测不同组别mi R-124和mi R-9的变化。【结果】与空白对照组比较,龟板提取物低浓度组mi R-124和mi R-9表达均无显著变化,龟板提取物高浓度组均显著升高(P<0.05)。【结论】龟板提取物可能通过调控mi R-124、mi R-9表达在NSCs向神经元细胞定向分化过程中起重要作用。