中脑神经干细胞分化的神经元体外表达突触素的动态分析

目的:观察中脑神经干细胞(NSCs)分化的神经元在不同条件下及不同时间内表达突触素的动态变化。方法:使用骨髓基质细胞(BMSCs)的条件液培养中脑NSCs,免疫细胞化学染色方法观察NSCs分化的神经元表达突触素的状态。结果:在NSCs分化后的12d,可观察到神经元能够表达突触素,但水平较低;18d,NSCs分化的神经元表达突触素的水平接近体外培养3d的海马神经元,并且也呈现典型的串珠样分布。结论:中脑NSCs分化而来的神经元在体外能够表达突触素,但与原代海马神经元相比,则需要更长的体外培养时间,提示NSCs分化的神经元发育成熟可能需要一定时间。

水杨酸钠对新生小鼠下丘核区神经干细胞分化的影响

目的 在体外培养新生小鼠下丘核区NSCs的基础上 ,研究水杨酸钠对NSCs分化的影响。方法 分离、收集新生昆明小鼠下丘核区脑组织 ,体外经EGF和bFGF刺激下培养 ;通过免疫细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向和水杨酸钠给药后分化为神经元的细胞的GABA和Glu蛋白表达。结果 培养的部分细胞在特定生长因子的作用下可分裂、增殖 ,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin ,并在撤除生长因子后向神经元和胶质细胞分化。干细胞分化的神经元中的GABA和Glu蛋白表达位于细胞质和细胞核。在无水杨酸钠组两类递质阳性着色细胞数没有明显差异 ;水杨酸钠给药后Glu阳性着色细胞数较GABA阳性着色细胞数明显增加 ,吸光度值比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 ①小鼠下丘核区存在着具有多向分化潜能的神经干细胞。②水杨酸钠具有促进NSCs分化为Glu阳性神经元的作用。

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的 :观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况 ,探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法 :无菌条件下行骨穿术 ,密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞 ,利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导 ,用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果 :骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团 ,进一步分化 ,部分细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论 :骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能 ,易于取材、体外培养和增殖 ,在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。

未成熟钠通道调控大鼠胚胎神经干细胞分化

钠通道在各类神经元上高表达,参与细胞多种生理功能的调节,是神经元实现功能活动的基本单位.未成熟神经元上钠/钙通道所诱发和自发的电位活动对后期的发育成熟至关重要.然而,发育中的钠通道是否参与神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的调控尚不清楚.本研究证明,未成熟的钠通道参与NSCs分化调控.Western印迹结果显示,在分化第1,3,5,7 d的NSCs上钠通道和胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达与分化时间正相关.免疫组化结果发现,与对照组比较,加入电压门控钠通道阻断剂TTX可明显下调Neu N、GFAP和Gal-c在NSCs中的表达(P<0.05),提示钠通道参与NSCs分化的调控.当采用veratridine激动钠通道后,激光共聚焦检测到细胞内Ca^(2+)浓度明显升高,免疫组化和Western印迹结果显示细胞内Ca^(2+)浓度明显升高,p-ERK表达量明显上调;相反,TTX可明显阻断Veratridine所引起的细胞内Ca^(2+)浓度上调,并使p-ERK峰值明显降低和延后(P<0.05).研究结果表明,未成熟钠通道可通过激活ERK信号途径促进NSCs的分化.钠通道的这种作用可能是由钙离子介导的,其详尽机制有待进一步研究.

星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响实验研究

目的研究星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响。方法随机在我院动物实验中心选取3只大鼠为研究对象,将本次实验均分为普通星形胶质细胞的培养的对照组以及星形胶质细胞与神经干细胞互不接触状态下共同培养的实验组。对比两组星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响效果。结果实验组的纯化星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记为阳性,其细胞纯度高到96%,且在神经元特异性烯醇化酶阳性细胞与酪氨酸羟化酶阳性细胞均比对照组多。结论星形胶质细胞不仅可以加快神经干细胞向神经元细胞的分化以及向多巴胺神经元细胞的分化,而且可以延长神经元存活时间,降低神经元凋亡率。

组蛋白去乙酰化酶参与调控神经干细胞分化的研究进展

神经干细胞是一种多能干细胞，具有自我更新及多向分化潜能，在一定条件下能分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞。神经干细胞的分化不仅由细胞周围微环境决定，且受基因调控。神经干细胞的分化复杂，其中组蛋白去乙酰化酶[1]结合细胞内转录因子和信号通路可调节神经干细胞的分化，主要影响神经干细胞分化过程中的转录，从而影响细胞的发育。

细胞因子对神经干细胞增殖和分化的影响

目的 建立人胎大脑神经干细胞 (NSCs)分离培养的体外培养系统 ,鉴定其干细胞原始特征 ,观察上皮细胞生长因子(EGF)、碱性纤维母细胞生长因子 (FGF2 )和脑源神经生长因子 (BDNF)对NSCs分裂和分化的影响。方法 在含EGF和 (或 )FGF2的培养体系中分离培养NSCs。用定量RT PCR法检测干细胞巢蛋白表达丰度 ,用PCR ELISA法检测端粒酶活性 ,PC NA用免疫细胞化学染色检测干细胞增殖特征以及不同代数分裂的干细胞的比率。免疫细胞化学法证实NSCs分化后神经元和星形胶质细胞的比例趋势 (NF 2 0 0、MAP 2、synaptophysin、NeuN和GFAP染色 )。 结果 NSCs大量增殖呈球体状 ,PCNA阳性率高达 (71 6± 4 9) %、干细胞巢蛋白阳性、端粒酶活性为 6 3%。不同诱导因子对NSCs球体内细胞增殖数差异有显著性(P <0 0 5 )。证实EGF和 (或 )FGF2在培养基质存在下均能诱导NSCs分化 ,脑源神经生长因子 (BDNF)能维持神经元的存活和生长。分化后的神经元比例可达 (18 6± 2 5 ) %。结论 EGF和 (或 )FGF2可诱导NSCs分裂增殖并保持原始特性 ,在培养基质存在条件下 ,这些细胞因子可诱导NSCs分化。

bFGF、BMP-2、ATRA对神经干细胞分化及RARα mRNA表达的影响

目的探讨bFGF、ATRA、BMP-2对神经干细胞分化的诱导作用及对RARαmRNA表达的影响。方法采用分别含bFGF、ATRA、BMP-2及其不同组合配方的培养液培养神经干细胞,通过免疫荧光染色观测细胞分化情况,应用RT-PCR法检测其对RARαmRNA表达影响。结果bFGF无明显诱导神经干细胞分化作用,但能增加分化后细胞的存活能力;神经干细胞能被ATRA诱导成为神经元样细胞,被BMP-2诱导成为星形胶质细胞,且在不同组合配方培养液中,诱导效应不同;ATRA或BMP-2在bFGF存在的情况下,能促进神经干细胞RARαmRNA的表达。结论bFGF本身不诱导RARαmRNA的表达,但能增强神经干细胞分化后的存活并影响ATRA、BMP-2对RARαmRNA表达的诱导;ATRA、BMP-2对神经干细胞的分化具诱导功能,但二者可能具有负协同作用。

神经干细胞诱导分化过程中巢蛋白表达的时程变化(英文)

背景:神经干细胞和前体细胞在分化成神经元和胶质细胞过程中巢蛋白表达的动态变化是神经生物学家研究的焦点之一。目的:探讨巢蛋白(nestin)在体外诱导神经干细胞分化过程中表达的变化规律。设计:重复测量设计。地点和对象:实验地点为北京市神经外科研究所;研究对象为Wistar大鼠,雌雄不限,体质量(180±20)g;血清诱导后第3天,1,2,3,4,5,6,7,8周分别固定细胞检测巢蛋白的表达,每个时间点4个培养皿,实验重复3次。干预:血清诱导后第3天～第8周相差显微镜连续观察细胞形态的变化,免疫荧光染色检测巢蛋白表达的变化。主要观察指标:在神经干细胞体外诱导分化的不同时间点检测巢蛋白表达的变化。结果:在神经干细胞分化早期,巢蛋白表达仍呈阳性。随着分化的神经细胞、星形胶质细胞或少突胶质细胞逐渐发育成熟,巢蛋白表达逐渐减弱,到第7周时巢蛋白表达完全消失。结论:巢蛋白表达不仅是神经干细胞的重要标志,同时也出现在神经干细胞分化的早期,而且随着细胞逐渐分化成熟,其表达显著下降。体外培养情况下至分化的第7周即完全消失。

酪氨酸激酶2与酪氨酸激酶3对神经干细胞分化及Ngn2、NeuroD基因表达的调控

既往研究表明，酪氨酸激酶（JAK）蛋白家族的JAK2、JAK3与螺旋一环一螺旋转录因子家族（bHLH）的Ngn2、NeuroD均参与调控神经干细胞（NSCs）的分化。我们采用AG490（JAK2阻滞剂）和WHI—P154（JAK3阻滞剂）分别阻滞NSCs中JAK2与JAK3信号通路，观察抑制JAK2与JAK3后对NSCs分化及Ngn2、NeuroD基因表达的影响。

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景:神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。目的:分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。结果与结论:海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5 d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元﹑少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。

神经干细胞增殖及分化的调控机制

笔者简述了近 10年来在神经干细胞的增殖和分化领域的研究进展。包括生长因子、细胞粘附因子、受体介导的信号转导途径、端粒在干细胞增殖方面的影响 ;细胞的死亡机制 ;以及时间因素、区域化因素、促进因素等对干细胞分化的影响等。

Jagged1蛋白抑制神经干细胞向神经元分化的实验

目的:研究Jagged1蛋白对神经干细胞分化的影响。方法:分离小鼠胚胎脑神经干细胞,用Jagged1蛋白、Jagged1蛋白+γ泌肽酶体外诱导神经干细胞分化,观察分化后神经元所占的比例。结果:分离的细胞能持续增殖,并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;在Jagged1蛋白的影响下,分化后神经元数量明显减少;γ泌肽酶抑制剂能阻断Jagged1蛋白的诱导作用。结论:培养的细胞为神经干细胞,并表达Notch受体;Jagged1蛋白能抑制干细胞向神经元分化,这种分化作用是通过Notch受体实现的。

Eph/ephrin信号通路与神经干细胞的增殖和分化

背景:研究表明,移植入宿主体内的神经干细胞可分化为神经元或神经胶质细胞。Eph/Ephrin信号通路与神经干细胞的增殖分化密切相关。通过调节Eph/Ephrin信号通路可控制神经干细胞的定向增殖分化。目的:对神经干细胞增殖、分化与Eph/Ephrin信号通路的关系进行综述。方法:应用计算机检索2000年1月至2018年11月Medline数据库、Ovid数据库、CNKI数据库、万方数据库,中文检索词为"Eph/ephrin信号通路,神经干细胞,分化,增殖",英文检索词为"Eph/ephrin signalingpathway,neural stem cells,differentiation,proliferation"。纳入与神经干细胞增殖、分化及Eph/Ephrin信号系统相关的文献,排除重复性研究,保留51篇文献进行综述。结果与结论:神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,能分化形成中枢神经系统几乎所有类型的细胞。Eph/Ephrin信号通路在神经干细胞的增殖分化中起重要作用。文章从神经干细胞、Eph/Ephrin信号通路、Eph/Ephrin信号通路与神经干细胞的增殖分化等方面分别进行了叙述。然而,Eph/Ephrin信号通路控制神经干细胞分化的具体机制还不是很清楚。