不同年龄脑出血大鼠海马齿状回神经干细胞增殖与分化差异的比较

背景:脑出血后,海马齿状回的神经干细胞会被激活,导致其增殖分化能力的不断增强。通过内源性神经干细胞的不断分化和增殖,可以逐渐对老化、受损的神经元予以取代,进而发挥出保护脑结构等作用。目的:对比分析不同年龄脑出血大鼠的海马齿状回神经干细胞增殖分化差异情况。方法:成年和老年SD大鼠各96只,随机各自分为正常组(18只)、假手术组(18只)、脑出血模型组(60只)。其中,脑出血模型组制备脑出血模型,并进行BrdU标记,出血6 h、出血24 h、出血48 h、出血72 h、出血7 d,获得大鼠脑组织标本,计算脑含水量。术后3,7,14,21,28 d,进行BrdU/Neu N、Brd U/GFAP双标染色,计算双标阳性细胞数。结果与结论:(1)成年与老年大鼠脑出血组不同时间的脑含水量均显著高于正常组和假手术组(均P<0.05)。老年组正常组和假手术组的脑含水量均显著低于成年组(均P<0.05);(2)脑出血组不同时间的两侧BrdU阳性细胞数均显著高于正常组和假手术组(均P<0.05),且出血组不同时间的出血侧Brd U阳性细胞数均显著高于对侧(均P<0.05);(3)成年大鼠脑出血后海马齿状回神经干细胞免疫组织化学双标Brd U/Neu N和Brd U/GFAP结果显著高于正常组(均P<0.05);(4)成年大鼠3组脑出血后出血侧海马齿状回BrdU阳性细胞数均显著高于相应的老年组大鼠(均P<0.05);(5)结果表明,正常大鼠海马齿状回存在少量神经干细胞增殖现象,且老年大鼠的细胞增殖能力弱于成年大鼠。在发生脑出血后,大鼠的海马齿状回神经干细胞会出现增殖增强的情况,且老年大鼠的细胞增殖能力弱于成年大鼠。

条件培养基对神经干细胞增殖与分化作用的影响

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)条件培养基对体外培养神经干细胞(NSCs)增殖与分化作用的影响。方法用BMSCs条件培养基分别在增殖与分化条件下培养NSCs,观察NSCs形态变化。用MTT法及NSCs球数目和直径的统计分析了解NSCs增殖情况,同时行免疫荧光及Western blot法鉴定其分化情况。结果原代培养获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球,并能分化为神经元细胞、星形胶质细胞及少突胶质细胞。BMSCs条件培养基组能够促进NSCs球的吸附贴壁,但与对照组相比光密度(OD)值差异无统计学意义,NSCs球数目和直径差异亦无统计学意义。另外,BMSCs条件培养基组少突胶质细胞特异性蛋白MBP表达量高于对照组(P<0.05),星形胶质细胞特异性蛋白GFAP表达量低于对照组(P<0.05),而神经元特异性蛋白MAP-2表达量未见明显异常。结论大鼠BMSCs条件培养基促进NSCs向少突胶质细胞方向分化,但不抑制其增殖作用。

中医药促进神经干细胞增殖与分化用于抗脑缺血损伤的研究进展

长期以来,运用传统中医药方法治疗脑缺血及其后遗症有着独特优势,在临床也取得了较好疗效,但具体作用机制和作用靶点还需进一步研究证明。神经干细胞可永久自我更新,具有多向分化潜能。中医药可通过多种途径促进神经干细胞的增殖与分化,从而有效治疗神经组织的缺血性损伤,为神经再生的治疗开辟了新方向,已成为抗脑缺血损伤研究的焦点。

施万细胞对共培养的神经干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨施万细胞诱导神经干细胞增殖与分化的影响因素。方法:大鼠胚胎神经干细胞单独培养及与新生SD大鼠施万细胞共培养,观察神经干细胞的形态变化,并分别检测特异性标志蛋白S-100、NF和GFAP的表达。结果:相差显微镜下可见共培养组大部分神经干细胞伸出多个细长突起;与单独培养组相比,免疫荧光染色显示共培养组NF表达阳性细胞数多;GFAP表达阳性细胞数少。结论:施万细胞可促进共培养的神经干细胞增殖,并可诱导神经干细胞向神经元方向分化。

骨髓间充质干细胞对海藻酸钙胶珠内神经干细胞增殖与分化的作用

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植治疗神经损伤被认为是具有潜在应用价值的手段,但其来源困难;骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)以其所具有的诸多优点,为神经损伤的治疗提供了一个新的思路。而BMSCs是否是通过作用于内源性的NSCs来促进神经修复,仍存在着争议。今采用海藻酸钙胶珠将NSCs包囊培养至一定大小的神经球后,再与BMSCs进行共培养,考察BMSCs对生长在海藻酸钙胶珠内的NSCs增殖与分化的作用,探讨BMSCs移植治疗神经疾病与损伤的作用机理。共培养过程中观察神经球结构的变化;共培养结束后计算NSCs的增殖倍数,对增殖条件下共培养的NSCs表型和多向分化潜能进行免疫荧光染色鉴定;对分化条件下共培养的NSCs向不同神经细胞分化的能力进行流式细胞仪检测。结果表明,BMSCs可使生长于支架内的NSCs迁出细胞球,对NSCs的增殖没有明显影响;但能够明显影响NSCs的分化,使其向少突胶质细胞分化的能力增加3倍,向星形胶质细胞分化的能力减弱1倍,而向神经元细胞分化的能力没有明显变化。BMSCs有可能是通过分泌某些因子增加了NSCs迁移及向少突胶质细胞分化的能力,从而促进神经损伤的修复。

己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨己烯雌酚对胎鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的促增殖、分化作用及其机制。方法:取孕16天SD胎鼠海马NSCs培养,分别设空白对照组,己烯雌酚1×10-7mol/L组、1×10-8mol/L组、1×10-9mol/L组,以及脑源性神经营养因子(BDNF)5×10-2mg/L组;免疫荧光化学方法检测Nestin、神经元特异烯醇化酶及神经胶质酸性蛋白的表达,RT-PCR检测BDNF mRNA的含量。结果:不同剂量己烯雌酚处理各组神经球面积、积分光密度值、平均突起长度与平均突起数均增加,其中10-8mol/L组海马NSC增殖与分化最明显,BDNF mRNA表达量亦最高(P<0.01)。结论:己烯雌酚对海马NSCs的增殖分化具有促进作用,且可能与上调BDNF的表达有关。

红细胞生成素(EPO)对脑源性神经干细胞增殖与分化的调控作用

目的探讨红细胞生成素(EPO)对大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外增殖和分化的影响。方法利用无血清培养、单细胞克隆技术,体外培养SD大鼠海马组织源NSCs,在NSCs增殖和分化过程中添加不同剂量EPO,以免疫细胞化学方法对NSCs及其分化后的细胞进行鉴定。结果与对照组相比,不同接种密度条件下的NSCs加入EPO后,增殖期表达Nestin的细胞增加2～4倍,分化期表达Nestin的细胞数明显减少;表达Tuj1和GFAP的细胞出现早,且Tuj1阳性细胞较对照组明显增加(P<0.05),加入antiEPO后Tuj1阳性细胞较对照组明显减少(P<0.01);相同细胞接种密度下,添加不同剂量EPO后Tuj1阳性细胞数呈剂量依赖性增加。结论EPO可促进大鼠海马源NSCs的增殖,并使其呈剂量依赖性的向神经元分化。

神经干细胞增殖与分化机制的研究进展

近年来神经干细胞的研究一直是神经科学领域的热点之一 ,神经干细胞的分离与培养渐趋成熟 ,神经干细胞移植于体内研究的报告也日渐增多。但已取得与受体靶组织部位相应细胞完全整合并具有相同功能的研究报告尚未见到 ,这一目标的实现难点就在于神经干细胞复杂的增殖与分化机制仍未阐明。研究者正在从体内到体外多方面大力研究 ,并取得了一些进展。

EGF和FGF-2促神经干细胞增殖与分化研究

目的 建立人胚胎大脑神经干细胞的分离培养方法并观察在不同诱导因子作用下细胞分化的生物学特性。方法 将经培养的人胚胎大脑神经干细胞分为4组,在不同培养液中培养、分化:(1)DMEM/F-12标准培养液组;(2)标准培养液+表皮生长因子(EGF)组;(3)标准培养液+碱性成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)组;(4)标准培养液+表皮生长因子+碱性成纤维细胞生长因子-组。用定量RT-PCR方法及免疫组织化学染色方法鉴定神经干细胞的原始特性、端粒酶活性以及不同诱导因子对神经干细胞分化特性的影响。结果 于培养第6d,标准培养液中的脑细胞死亡;而在加入EGF和FGF-2的培养液中则形成神经干细胞球体,而且增殖细胞核抗原染色和神经干细胞巢蛋白表达均呈阳性反应;其端粒酶活性为63％,低于瘤细胞而高于正常脑组织。神经干细胞分化后经胶质纤维酸性蛋白、神经微丝、突触素、微管相关蛋白-2及神经细胞核抗原染色显示,分化的神经元最高值达(18±2.5)％。不同诱导因子对不同传代的细胞球体内神经干细胞的促增殖作用差异有显著性意义(均P<0.05)。结论 EGF和EGF-2均具有促进神经干细胞存活、增殖和分化的作用。

叔丁基对苯二酚激活蛋白酶体活性促进成年小鼠神经干细胞增殖与分化

目的:探讨叔丁基对苯二酚(tBHQ)对成年小鼠神经干细胞(aNSCs)增殖分化能力的影响,寻找维持aNSCs活力的有效手段。方法:成年BALB/c小鼠腹腔注射tBHQ(每日16.7 mg/kg)7 d,收集室管膜下区(SVZ)的脑组织,应用荧光酶标仪定量检测其蛋白酶体的活性;同时小鼠腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),Brd U免疫荧光染色检测SVZ内a NSCs的增殖能力。分离培养SVZ aNSCs,tBHQ(20μmol/L)作用7 d,分析比较tBHQ组与DMSO组a NSCs的蛋白酶体活性、BrdU阳性率以及形成神经球的数量和直径。应用1%的胎牛血清诱导a NSCs分化,早期神经元标记物β-Ⅲ微管蛋白(Tuj1)免疫荧光染色并比较tBHQ组与DMSO组a NSCs向神经元分化的能力。结果:小鼠腹腔注射tBHQ,其SVZ蛋白酶体活性较DMSO对照组上调12.9%±4.6%(P<0.05),并且BrdU标记实验显示tBHQ组阳性细胞数为31.3±6.3,与DMSO对照组(15.4±1.3)比较,aNSCs增殖能力显著提高(P<0.05)。体外实验结果也显示tBHQ组aNSCs蛋白酶体活性较DMSO对照组上升10.1%±0.8%(P<0.01)。tBHQ组Brd U阳性率(31.3%±3.2%)是DMSO对照组(20%±1.5%)的1.6倍(P<0.05)。tBHQ组神经球的数量和直径分别是DMSO对照组的1.7倍(P<0.05)和1.4倍(P<0.05),提示tBHQ促进aNSCs的自我更新。此外,tBHQ组Tuj1阳性率为26.5%±1.6%,较DMSO对照组18.6%±2.1%显著提高(P<0.05),提示tBHQ能够促进a NSCs向神经元方向分化。结论:tBHQ能够上调蛋白酶体活性,促进aNSCs的增殖与分化。

产前应激对脑海马神经干细胞增殖与分化的影响

目的:急、慢性应激能明显抑制本代大鼠脑海马神经干细胞的增殖分化,产前应激对子代神经干细胞会产生何种影响?了解神经干细胞在中枢神经系统内的分布特征及其分化,对脑海马神经干细胞在产前应激相关行为中的调节作用进行阐述。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2002-01与神经干细胞和应激相关的文章,检索词“Neuralstemcell,Stress”为检索词,从1990-01/2004-12网址为http://lib.tsinghua.edu.cn/数据库中检索与神经干细胞和应激相关的文章,限定文章语言种类为中文,检索词“神经干细胞,应激”。资料选择:对资料进行初审,选取包括处理组和对照组的文献,筛除明显不随机的研究,对剩余的文献开始查找全文。纳入标准为①随机对照研究。②实验或临床研究包含平行对照组。③前后对照试验研究。排除标准:重复性研究及综述类文章。资料提炼:共收集到415篇关于神经干细胞与脑海马应激损伤的随机和未随机的文章。26个实验或临床研究符合纳入标准。排除的389篇中301篇为未随机实验或重复性研究,88篇为综述类文章。资料综合:纳入的26个实验包括511例患者和625只实验动物。说明了脑海马齿状回是成年哺乳动物不断产生新神经元的脑区之一,这些新神经元具有修复脑海马损伤的作用,但成年动物神经干细胞持续增殖的生理作用并不清楚。脑海马齿状回神经干细胞的分化调控受多种内外环境因素的影响,产前应激可引起子代脑海马神经元及神经元超微结构的损伤,其损伤效应可能与产前应激引起的氧化物生成增加有关。结论:产前应激能调节脑海马神经干细胞的增殖与分化,提示神经干细胞可能参与脑功能调节和动物行为活动。将易培养的干细胞转入胎儿体内,通过一定的条件诱导其分化生成神经细胞修补脑海马损伤,对预防和治疗产前应激所致子代脑损伤具有重要的价值。

改良型生物硅胶膜对大鼠神经干细胞增殖与分化的影响

目的观察改良型生物硅胶膜对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响,为选择NSCs培养载体提供依据。方法选取孕16 d胎鼠的大脑皮质作为细胞来源,建立胚胎NSCs的体外培养体系并随机分为观察组和对照组,其中观察组接种于改良型生物硅胶膜上、对照组接种于普通培养皿中。普通倒置显微镜及电镜下观察细胞生长发育形态学变化,免疫荧光染色技术对NSCs及诱导分化细胞进行鉴定,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。结果培养2 d后,显微镜下两组均可见神经细胞球生成,贴壁良好,细胞球边缘有突起呈辐射状向外发出,神经球NSCs特异标志物神经巢蛋白均呈阳性;培养7 d后,观察组和对照组贴壁分化的神经元烯醇化酶阳性细胞率分别为25.14%±1.98%、24.67%±2.05%,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率分别为59.48%±2.07%、60.87%±1.08%,组间比较,P均>0.05;两组生长曲线亦无显著差异(P>0.05)。结论改良型生物硅胶膜对NSCs的生长、增殖及诱导分化无明显影响,但能促进细胞之间突起的增长,可作为培养载体用于研究力学因素对NSCs增殖、诱导分化的影响。

电磁刺激对脊髓神经干细胞增殖与分化作用研究

目的探讨电磁刺激对大鼠脊髓神经干细胞(NSCs)向功能性神经元增殖分化的作用及可能的机制。方法体外分离培养妊娠第14天(E14 d)的Wistar大鼠脊髓NSCs,无血清培养14 d后,分为对照组和电磁刺激组。电磁刺激组置于脉冲强磁场条件下用促增殖参数(0.1 Hz、4T、8次)进行干预,每次脉冲放电20 ms。对照组不做干预处理。干预后第1天,10%胎牛血清诱导贴壁分化;诱导贴壁后第7天,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测β-catenin蛋白表达情况;NCSs分化后第14天,免疫荧光染色检测神经元MAP2表达情况,红外可视膜片钳技术记录神经元自发放电情况。结果干预后,免疫荧光染色显示电磁刺激组MAP2阳性细胞数45.4%±3.1%,较对照组38.3%±6.0%明显增多(P<0.05)。Western Blot检测结果显示干预后第7天,电磁刺激组神经干细胞β-catenin蛋白量较对照组增高。膜片钳实验结果显示,诱导后第14天,可以记录到神经元自发放电,是有生理功能的。结论强电磁刺激能够促进大鼠脊髓神经干细胞增殖分化为功能性神经元。

神经干细胞增殖与分化过程中Bmi1与NSPc1的作用

多梳蛋白(PcG)家族是非常保守的表观遗传调节因子。近年来对其成员的功能研究发现,PcG家族对干细胞的自我更新及增殖与分化都有很重要的作用。哺乳动物PRC1成员Bmi1和NSPc1在神经系统发育早期高表达。最近的研究提示它们不仅在细胞增殖分化相关基因转录调控中发挥重要作用,而且在神经干细胞自我更新及分化过程中同样有重要作用。

音猬因子对神经干细胞增殖与分化的影响

目的探讨音猬因子（SHH）对神经干细胞（NSCs）增殖与分化的影响。方法从大鼠胚胎端脑皮质及海马分离培养的NSCs分为SHH组、RA组和PBS组。分别用SHH、维甲酸（RA）及PBS条件培养液处理后,通过免疫细胞化学等方法检测NSCs的增殖及分化情况。结果体外培养的NSCs能快速增殖并形成神经球,其中的细胞均表达NSCs特异性标志物nestin。BrdU作用于NSCs3h后,SHH组的BrdU阳性率明显高于RA组和PBS组,而RA组和PBS组之间无显著差异。当NSCs在分化条件培养液中培养7d后,SHH组和RA组中的βⅢ-tubulin阳性率及Rip阳性率显著高于PBS组,SHH组又显著高于RA组和PBS组。结论SHH可以促进NSCs增殖及其向神经元和少突胶质细胞的分化。

淀粉样前体蛋白调节神经干细胞增殖与分化的研究进展

阿尔茨海默病（AD）是一种常见的脑退行性疾病，是导致老年前期和老年期痴呆的主要原因，其表现是进行性的记忆减退、认知障碍和人格改变。AD的主要病理学特征是在大脑海马区域和大脑皮层形成大量的老年斑（SP）和神经元纤维缠结（NFT）以及出现弥漫性脑萎缩。

重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架对神经干细胞增殖与分化的影响

目的研究包含重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响。方法实验分组:FG-SHH组(将NSCs种植于重组SHH腺病毒-支架组)和对照组(controls)[以培养板、重组SHH腺病毒转染组(SHH)、纤维蛋白胶支架组(FG)为对照组];体外分离培养并鉴定NSCs,构建重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架,用免疫荧光和免疫印迹方法测定转染效率;MMT法检测细胞增殖活力;免疫荧光和免疫印迹法检测上述各组细胞表达神经细胞相关蛋白:β微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达状态。结果体外培养的NSCs高表达nestin;转染重组SHH腺病毒后NSCs可稳定表达SHH;FG-SHH支架促NSCs增殖能力较强,并且FG-SHH组β-tubulin Ⅲ及MBP阳性细胞率和蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05),FG-SHH组GFAP的阳性细胞率和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。结论重组SHH腺病毒纤维蛋白缓释支架可以促进NSCs的增殖及其向神经元和少突胶质细胞分化,并抑制星形胶质细胞分化。

miR-124抑制Notch通路促进神经干细胞增殖与分化

背景:如何在体外快速而高效的获得大量高纯度神经细胞是目前国内外细胞移植治疗领域所面临的一个巨大挑战和难题。目的:探讨miR-124是否通过调控Notch通路对神经干细胞增殖与分化产生影响。方法:分离胎鼠神经干细胞,利用免疫荧光法进行鉴定,采用RT-qP CR法检测神经干细胞分化1,2,4,7d后miR-124表达情况,利用瞬时转染法分别过表达和干扰miR-124后,采用MTT法和免疫印迹法检测ki-67蛋白表达水平观察细胞增殖情况,采用RT-qPCR法和免疫印迹法检测β-tubulinⅢ表达水平观察细胞分化情况,采用RT-qPCR法检测Notch通路相关蛋白HES1,HEY2和CCND1的mR NA表达。结果与结论:(1)神经干细胞在向神经细胞分化过程中,miR-124的表达水平显著升高;(2)过表达miR-124不仅能够促进细胞增殖与分化,同时对Notch通路相关蛋白起到了抑制作用;(3)抑制miR-124表达起到了与上述相反的作用;(4)以上结果提示miR-124可能通过抑制Notch通路促进神经干细胞的增殖与分化。

miR-145-3p对大鼠肠神经干细胞增殖与分化的影响

【目的】探讨微小核糖核酸145-3p(miR-145-3p)对SD大鼠肠神经干细胞(ENSCs)增殖及分化的影响。【方法】原代培养法提取孕18 d的SD大鼠肠神经干细胞(ENSCs),观察其细胞学特性,采用巢蛋白(Nestin)及神经胶质纤维蛋白(GFAP)免疫荧光进行鉴定。分别采用脂质体及慢病毒载体过表达ENSCs的miR-145-3p进行转染,采用荧光显微镜及实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测转染效果。Edu细胞增殖实验及诱导分化实验明确miR-145-3p对ENSCs增殖及分化的影响。【结果】原代培养ENSCs可见大量神经球样结构形成,免疫荧光证实细胞Nestin和GFAP均阳性,具有干细胞特性;在慢病毒转染组内,miR-145-3p过表达组的miR-145-3p相对表达量为3.52±0.24,显著高于阴性对照组的0.01±0.01,其差异具有统计学意义(P<0.05);miR-145-3p过表达组的Edu阳性率为(15.23±1.17)%,显著低于阴性对照组的(22.38±1.52)%;采用分化培养基处理后,miR-145-3p慢病毒载体转染组的GFAP阳性细胞比例为(21.47±1.98)%,显著低于阴性对照组的(33.86±2.52)%。【结论】对于ENSCs而言,慢病毒载体转染效率较高,miR-145-3p可抑制ENSCs的增殖与分化,其可能在肠神经系统发育过程中发挥重要作用。