神经束蛋白155高表达少突胶质细胞模型的构建

目的构建神经束蛋白155(neurofascin155,NF155)高表达的少突胶质细胞模型。方法 RT-PCR法提取NF155 cDNA,经T-A克隆及双酶切将其与pUM-T simple重组,构建NF155慢病毒载体质粒,NheⅠ、AgeⅠ双酶切后,片段大小及基因测序均显示NF155慢病毒载体质粒构建成功。取对数生长期少突胶质细胞分为空白对照组、阴性慢病毒感染组、NF155慢病毒感染组,空白对照组不做任何处理,阴性慢病毒感染组予10 μL空载体慢病毒+100 μL培养基,NF155慢病毒感染组予10 μL慢病毒载体质粒+100 μL培养基。培养12 h采用荧光定量PCR法检测NF155 mRNA,采用Western blotting法检测NF155蛋白。结果 NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量分别为3.25±0.11、1.00±0.06、1.08±0.01,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155 mRNA相对表达量升高( P 均<0.05)。NF155慢病毒感染组、空白对照组、阴性慢病毒感染组NF155 蛋白相对表达量分别为1.57±0.08、0.51±0.12、0.50±0.06,与空白对照组、阴性慢病毒感染组比较,NF155慢病毒感染组NF155蛋白相对表达量升高( P 均<0.05)。结论 成功构建NF155高表达的少突胶质细胞瞬转细胞模型。