微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响

目的观察微波辐射对人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖与分化的影响。方法采用10、30、50 mW/cm2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,0mW/cm2为对照组,锥虫蓝拒染法进行细胞计数并计算增殖率;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,在光学显微镜下观察细胞分化的形态并计算分化细胞率;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞神经纤丝重链亚基的蛋白表达。结果微波辐射后随辐射强度增加,细胞增殖率在各时间点上均出现不同程度的梯度抑制,与对照组(0mW/cm2)相比,10 mW/cm2辐射组在72 h时出现明显抑制;30 mW/cm2辐射组在48 h时出现明显抑制;50 mW/cm2辐射组在辐射12 h时就出现明显抑制;20μmol/L全反式维甲酸黑暗下诱导分化72 h后,30、50 mW/cm2微波辐射组细胞分化的数量少于对照组细胞,而且细胞轴突长度短于对照组细胞;随着辐射强度的增加,G0/G1期的SH-SY5Y细胞比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少,G2+M期细胞比例变化相对较小;微波辐射后,SH-SY5Y细胞总NF-H蛋白表达无明显变化,但磷酸化的NF-H蛋白表达随辐射强度的增加逐渐降低。结论微波辐射可同时抑制SH-SY5Y细胞增殖与分化并呈现明显的剂量依赖性抑制作用;细胞周期呈G0/G1期阻滞;对NF-H的表达无影响,但明显抑制了NF-H的磷酸化。

2,3-吲哚醌诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及周期阻滞

背景与目的:2,3-吲哚醌(isatin,ISA)是存在于哺乳动物体液及组织中的一种天然物质,已发现其对肿瘤细胞的生长有抑制作用,但具体作用机制尚不明。本研究以人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为靶细胞,观察ISA对SH-SY5Y细胞的作用及其机制。方法:采用荧光染色、流式细胞术(flow cytometry,FCM)及Western blot等方法检测不同浓度ISA(0、100、200、400μmol/L)诱导SH-SY5Y细胞凋亡及细胞周期阻滞的作用机制。结果:400μmol/L ISA作用48h后,在荧光显微镜下观察到SH-SY5Y细胞出现核固缩、DNA断裂等典型的凋亡形态学改变。Western blot结果显示,随ISA浓度的增加,Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达无明显改变,Bcl-2/Bax下降。100、200、400μmol/L ISA处理SH-SY5Y细胞48h,活化Caspase-3的表达率分别为19.28%、25.88%、33.43%,明显高于对照组(P<0.05)。Western blot进一步检测到其下游底物Caspase激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂(inhibitor of caspase-activated DNase,ICAD)被降解。细胞周期分析表明,经100、200、400μmol/L ISA处理48h后,G1期SH-SY5Y细胞数明显增加,呈明显的G1期阻滞;磷酸化的ERK蛋白及Cyclin D1(CDK1)蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:ISA能明显诱导SH-SY5Y细胞凋亡和细胞周期G1期阻滞,该作用可能与Bcl-2/Bax降低、Caspase-3激活,以及下调磷酸化ERK和细胞周期因子CDK1表达有关。

微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制

目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNAladder;台盼蓝拒染法检测细胞存活率;AnnexinV-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞相对活性;蛋白质印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:微波辐射后SH-SY5Y细胞形态即刻改变,胞核、胞质结构欠清,细胞皱缩甚至脱壁;细胞核内的染色质出现不规则凝集,碎裂成2～5个微核;细胞DNA出现明显的梯状条带;细胞存活率随微波辐射强度增大逐渐降低,10 mW.cm-2辐射组与假辐射组比较,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),但30、50 mW.cm-2辐射组细胞存活率明显低于假辐射组(P<0.05);微波辐射后6 h的细胞凋亡率随辐射强度的增加逐渐升高,各辐射组细胞凋亡率均明显高于假辐射组(P<0.05);微波辐射后24和48 h,细胞相对活力随辐射强度的增加明显降低,各辐射组的细胞相对活力均明显低于假辐射组(P<0.05)。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin表达水平逐渐下降,Bax、caspase-3和caspase-7表达水平逐渐升高,caspase-8和-9表达水平无明显变化。结论:微波辐射可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与survivin、Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调及caspase-3和caspase-7的作用有关,而与caspase-8和caspase-9介导的caspase-3活化这一作用无密切关系。

环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验

目的探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)转录活性的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或Cat D-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01μmol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ERα转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ERα转录活性的EC_(max)浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA(si RNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780(100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用。结果 BPAF能够剂量依赖性地(R^2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC_(50)值为(0.44±0.09)μmol/L,EC_(max)值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的si RNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97%和77.75%),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42%和86.76%)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87%和105.56%)。结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭。

谷氨酸对人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系超极化激活的阳离子通道的影响

目的观察谷氨酸(Glu)对交感神经细胞超极化激活的阳离子通道(Ih通道)活动的影响。方法采用人交感神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为交感神经细胞模型,用全细胞电压箝方式记录Ih通道电流。结果 SH-SY5Y细胞存在Ih通道电流;Glu(1mmol/L)可抑制SH-SY5Y细胞Ih电流的K+电流成分,但增强Ih电流的Ca2+电流和Na+电流成分,综合效应是使Ih电流增大。结论 Glu可增大SH-SY5Y细胞的Ih电流。这一效应提示,Glu可能通过诱发交感神经元去极化并促进其传出冲动增加。

多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用

目的探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用。方法阳性对照组SH-SY5Y细胞以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1. 25 mg·L^(-1)的多柔比星+10-7、10-5、10-3mol·mL^(-1)Met-ENK处理,阴性对照组细胞以等量生理盐水处理。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,流式细胞术和Hoeschest 33258细胞核染色检测各组SH-SY5Y细胞凋亡情况,Western Blot法检测各组SH-SY5Y细胞p-Tau蛋白表达情况。结果与阴性对照组比较,干预24、48、72 h后,阳性对照组和各实验组细胞存活率降低,且实验组低于阳性对照组,实验组细胞存活率随着Met-ENK浓度的增大逐渐降低(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05);阳性对照组和各实验组S期细胞比例显著降低,中、高剂量实验组低于阳性对照组(P <0. 05)。与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞p-Tau蛋白相对表达量明显升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P <0. 05)。结论多柔比星联合Met-ENK可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长,并促进其凋亡,这可能与上调Tau蛋白磷酸化水平有关。

反义P38cDNA抑制胆红素诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡

目的 :观察P3 8激酶特异性抑制剂SB2 0 3 580及反义P3 8激酶cDNA对胆红素诱导人神经母细胞瘤SH -SY 5Y细胞凋亡的影响 ,探讨P3 8激酶信号转导通路在胆红素诱导SH -SY5Y细胞凋亡中的作用及高胆红素血症损伤中枢神经细胞的分子机制及在听神经病发病中的作用。方法 :分别经SB2 0 3 580和二甲基亚砜预处理的SH -SY5Y细胞在胆红素作用 3h和 5h后 ,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况 ;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。采用脂质体法将含人反义P3 8cDNA的真核表达载体 pcDNA 3 0 -antiP3 8导入SH -SY5Y细胞 ,建立稳定低表达P3 8蛋白的细胞株 ,经Westernblotting鉴定后命名为SH -SY5Y -antiP3 8,而转染空载体pcD NA3 0的SH -SY5Y细胞株则命名为SH -SY5Y -pcDNA3 0 ;SH -SY5Y -antiP3 8细胞和SH -SY5Y -pcD NA3 0细胞分别经胆红素作用 3h和 5h ,在倒置光显微镜下观察细胞形态的变化及存活情况 ;流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果 :在 0 0 2 g/L胆红素作用下 ,流式细胞仪显示与对照相比SB2 0 3 580预处理的SH -SY5Y细胞在胆红素作用 3h后 ,其凋亡细胞由 19 4%下降到 12 1% ,5h后由 66 2 %降到 3 9 3 % ;与SH -SY5Y -pcDNA3 0细胞相比 ,SH -SY5Y -antiP3 8细胞在胆红素作用 3h后 。

MALAT1抑制Aβ_(25-35)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖并促进细胞凋亡及其机制

目的探讨长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)神经细胞的细胞周期、细胞增殖凋亡的影响。方法利用β淀粉样肽25-35(Aβ_(25-35))处理人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y建立AD细胞模型。将AD SH-SY5Y细胞随机分为对照组、p CDH空载体(p CDH-EV)组、MALAT1过表达(p CDH-MALAT1)组、抑制表达空载体(p SICOR-EV)组、抑制MALAT1表达(p SICOR-sh MALAT1)组。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测转染48 h后的细胞周期和细胞凋亡率,Western blot法检测细胞BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)蛋白水平。结果成功构建AD细胞模型和过表达及敲低MALAT1的表达载体。敲低MALAT1水平后,显著抑制AD模型细胞的增殖、细胞阻滞于G1期、促进细胞凋亡。同时上调BAX、caspase-3蛋白水平,下调Bcl2、p-PI3K、p-mTOR、p-GSK3β蛋白水平。过表达MALAT1则可逆转以上作用。结论敲低MALAT1水平可阻断PI3K/mTOR/GSK3β通路抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞增殖,促进细胞凋亡。

P2X_7受体阻断剂对三磷腺苷诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平的影响

目的观察三磷腺苷(ATP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)水平变化的特点,并探讨P2X_7受体阻断剂对其的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞接种于含体积分数10%胎牛血清高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为4组,分别加入含0、1、3、5 mmol·L^(-1)ATP的培养液,每孔100μL,各组均分别作用15、30、60 min,然后用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluo-3/AM染细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度。另取对数生长期的SH-SY5Y细胞悬液接种于含体积分数10%胎牛血清高糖DMEM的96孔板中,在37℃、体积分数5%CO_2培养箱中培养24 h,随机分为正常对照组、ATP组及KN-62低、中、高剂量组,正常对照组细胞在每孔100μL培养液中常规培养,ATP组细胞在每孔100μL含5 mmol·L^(-1)ATP的培养液中培养,KN-62低、中、高剂量组细胞分别每孔先用100μL含100、500、1 000 nmol·L^(-1)KN-62的培养液孵育30 min,每孔再用100μL的5 mmol·L^(-1)ATP培养液处理1 h,用Hank's溶液洗涤细胞3次,Fluro-3/AM染色细胞内Ca^(2+),Hoechst 33258染色细胞核。荧光显微镜下观察细胞内荧光发射强度变化,图像分析软件记录结果,测每组细胞中Ca^(2+)的平均荧光强度。每次实验每组设3个平行复孔,实验重复3次。结果0 mmol·L^(-1)ATP组呈现荧光的细胞数量少,荧光强度弱;1、3、5 mmol·L^(-1)ATP组随着ATP剂量增加,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强;若ATP剂量相同,则随着ATP作用时间的延长,呈现荧光的细胞数量逐渐增多,荧光强度逐渐增强。正常对照组、ATP组、KN-62低、中、高剂量组细胞荧光强度分别为468.24±45.67、3 292.35±159.64、3 013.27±321.42、2 515.77±320.98、2 486.32±318.31,ATP组细胞平均荧光强度显著强于正常对照组(P<0.05);KN-62低、中、高剂量组细胞平均荧光强度均低于ATP组(P<0.05)。结论 ATP诱导SH-SY5Y细胞内Ca^(2+)升高具有浓度和时间依赖性,KN-62可部分阻断ATP的这一作用。

外源性Bax基因过表达对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株Smac蛋白表达的影响

目的观察Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因过表达对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞第二个线粒体来源的半胱氨酸酶的激活剂(Smac)蛋白表达的影响。方法采用脂质体Lipofectamine 2000将携带人Bax基因的过表达质粒转入SH-SY5Y细胞(转染组),同时设空载体组和未转染组。通过G-418筛选后获得转入目的基因的细胞克隆。Hoechst33258染色观察凋亡细胞,免疫印迹法法检测细胞中Bax、Smac蛋白表达,免疫荧光染色检测Bax、Smac蛋白在细胞中的分布。结果转染后用G-418持续筛选2周可获得G418抗性的细胞克隆。Smac主要分布于胞质,Bax主要位于细胞核。转染组SH-SY5Y细胞Bax蛋白表达水平(1.067±0.036)较空载体组(0.436±0.035)和未转染组(0.444±0.046)显著增高(P<0.05);转染组Smac蛋白表达水平(1.408±0.044)相比空载体组(0.708±0.021)和未转染组(0.748±0.041)显著增高(P<0.05);空载体和未转染组细胞Bax和Snac蛋白表达均无显著差异(P>0.05)。转染组较未转染组细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论外源性Bax基因转入人神经母细胞瘤细胞中并稳定过表达,能够上调Smac蛋白表达,促进细胞凋亡。

黄芪多糖对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖作用研究

目的:研究黄芪多糖(APS)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的抑制作用。方法:以0(空白对照)、25、50、100 mg/ml APS培养细胞6、12、24 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0(空白对照)、25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后,Hoechst33258荧光染色,荧光显微镜下观察细胞核形态;流式细胞仪检测细胞周期分布与凋亡情况;Western blot法检测细胞磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(ERK)1/2蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞白细胞介素2(IL-2)、IL-6、IL-12含量。结果:与空白对照比较,100 mg/ml APS培养细胞6 h,50、100 mg/ml APS培养细胞12 h与25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞抑制率升高。50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后,G0/G1期比例升高,G2/M、S期比例降低;IL-2、IL-6含量增加。25、50、100 mg/ml APS培养细胞24 h后细胞凋亡率升高;细胞核出现碎块状致密浓染,并有凋亡小体出现;细胞ERK1/2蛋白磷酸化水平降低,IL-12含量增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:APS能抑制SH-SY5Y细胞增殖,阻滞细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低ERK蛋白磷酸化水平和升高细胞因子水平有关。

他米巴罗汀对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖及酪氨酸激酶受体A、N-myc表达的影响

目的研究他米巴罗汀(Tamibarotene,Am80)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖抑制能力及酪氨酸激酶受体A(TrkA)、N-myc (即MYCN) mRNA和蛋白表达的影响,为治疗神经母细胞瘤提供实验依据。方法采用不同浓度(0、10、20、40、80、160 μmol/L)Am80作用SH-SY5Y细胞48 h。采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖情况。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法检测48 h时SH-SY5Y细胞中TrkA、MYCN mRNA和蛋白的表达情况。结果当Am80浓度为10 μmol/L时,Am80对SH-SY5Y细胞无显著抑制作用[(3.51±1.68)%,抑制率<5%];当Am80浓度为20 μmol/L时,显示弱抑制作用[(9.60±1.97)%,抑制率<10%];Am80浓度为80 μmol/L时,对SH-SY5Y细胞增殖的抑制率显著增强[(57.43±4.95)%];TrkA随着Am80浓度增加,表达量增加;Am80能显著降低SH-SY5Y细胞MYCN的表达(10 μmol/L:0.65±0.05比20 μmol/L:0.36±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。结论Am80可抑制SH-SY5Y细胞的增殖,随着Am80浓度的增加,对细胞的抑制作用逐渐增强,Am80浓度越高对肿瘤细胞的抑制作用越显著。其机制可能与通过下调MYCN来提升TrkA的表达有关。

白藜芦醇对氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞线粒体生物发生障碍的影响

目的探讨线粒体生物发生在氟神经毒性中的作用,以及白藜芦醇干预氟神经毒性的作用机制。方法不同浓度氟化钠(NaF)处理对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24h,并用20μmol/L白藜芦醇对60mg/L NaF组进行干预。NaF剂量染毒实验分组:对照组,20、40、60mg/L NaF组;白藜芦醇干预NaF染毒实验分组:对照组,60mg/LNaF组,20μmol/L白藜芦醇+60mg/LNaF组,20μmol/L白藜芦醇组。采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)法检测线粒体生物发生关键调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)及线粒体转录因子A(TFAM)的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR技术检测线粒体生物发生关键调控因子及其下游呼吸链复合物亚基细胞色素C氧化酶亚基1(CO1)和ATP合成酶亚基(ATP8)的mRNA表达水平与线粒体DNA(mtDNA)相对含量;采用流式细胞术检测线粒体膜电位。结果与对照组比较,60mg/L NaF组SH-SY5Y细胞线粒体生物发生关键调控因子PGC-1α、NRF1、TFAM mRNA与蛋白表达水平、线粒体呼吸链复合物亚基CO1和ATP8 mRNA表达水平以及mtDNA相对含量均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);60mg/L NaF组线粒体膜电位与对照组比较也明显降低(P<0.05)。经白藜芦醇干预后,与60mg/L NaF组比较,20μmol/L白藜芦醇+60mg/LNaF组SH-SY5Y细胞的线粒体生物发生关键调控因子PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白与mRNA表达水平均明显增加,线粒体呼吸链复合物亚基CO1和ATP8的mRNA表达水平、mtDNA相对含量和线粒体膜电位均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇干预可缓解氟导致的SH-SY5Y细胞线粒体生物发生障碍。

氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响

目的探讨氟对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法用不同浓度(20、40、60 mg/L)的氟化钠(Na F)染毒SH-SY5Y细胞24 h,采用透射电子显微镜观察细胞内自噬体超微结构;吖啶橙染色观察细胞内自噬囊泡的生成;Western blotting技术检测自噬延伸相关蛋白Atg5和LC3-II与自噬降解相关蛋白P62的表达水平。结果透射电子显微镜下可观察到细胞内自噬体结构,且随NaF剂量的增加自噬体数量明显减少;吖啶橙染色可见,与对照组相比,40和60 mg/L NaF染毒组自噬囊泡数量逐渐减少,尤以60 mg/L NaF染毒组减少最为明显;Western blotting检测发现,与对照组相比,Atg5和LC3-II的表达水平呈剂量依赖性降低,而P62的表达水平呈剂量依赖性升高,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论氟可抑制SH-SY5Y细胞的自噬水平。

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞胞内游离钙离子浓度的影响

目的研究22,’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞,分别染毒终浓度为0(溶剂对照)、1、5、10μmol/L的PBDE-47溶液。采用MTT法检测PBDE-47体外染毒24 h后SH-SY5Y细胞存活率。利用钙离子荧光探针Fluo-3/AM标记体外培养的SH-SY5Y细胞,在激光扫描共聚焦显微镜下持续动态观测1 h内胞内钙离子荧光强度变化。采用流式细胞仪检测PBDE-47染毒3、6、12、24 h后[Ca2+]i变化。结果与溶剂对照组比较,5、10μmol/L PBDE-47染毒组细胞存活率明显下降(P<0.05);不同浓度PBDE-47染毒1 h后[Ca2+]i浓度均高于染毒0 h(P<0.05);10μmol/LPBDE-47染毒3、6、12、24 h后[Ca2+]i浓度均升高(P<0.05),5μmol/L PBDE-47染毒3、6、24 h后[Ca2+]i浓度也升高(P<0.05),而1μmol/L PBDE-47仅染毒6 h后[Ca2+]i浓度升高(P<0.05)。结论 PBDE-47染毒可使SH-SY5Y细胞[Ca2+]i浓度发生早期且持续升高,提示PBDE-47导致的SH-SY5Y细胞损伤可能与细胞内钙离子稳态改变有关。

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制

目的探讨苦参碱对人神经母细胞瘤(NB)SH-SY5Y细胞的作用机制。方法取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0 g.L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-8的相对活性。采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析。结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)%、(11.01±0.85)%、(15.22±0.71)%和(22.31±1.45)%;FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)%、(10.74±1.65)%、(14.00±0.98)%和(17.81±1.06)%;比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)%、(10.69±1.10)%、(14.80±1.44)%和(19.80±0.97)%;以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强。

鱼藤素对SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞凋亡的诱导作用

目的研究鱼藤素对SH-SY5Y细胞凋亡的诱导作用。方法鱼藤素(0、0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol·L^(-1))处理SH-SY5Y细胞24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞存活率。鱼藤素(0、8、20、50μmol·L^(-1))处理SH-SY5Y细胞24 h,光镜下及AO/EB双染分别观察细胞形态和凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧水平,分光光度法检测caspase-3活化程度。结果鱼藤素对SH-SY5Y细胞存活率呈时间和浓度依赖性抑制作用,作用24、48、72 h的IC50值分别为(26.07±2.18)、(18.33±0.94)、(12.5±1.49)μmol·L^(-1)。鱼藤素处理24 h后,细胞凋亡率、细胞活性氧水平明显上升(P<0.05),caspase-3活化程度升高,且三者均有浓度-效应特征。结论鱼藤素可抑制SH-SY5Y细胞存活,诱导细胞凋亡,其机制可能与升高活性氧水平和活化caspase-3相关。

叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用

目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。

不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响

目的建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况。结果与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好。结论高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命。

锰化合物对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y脂质过氧化的作用

[目的 ]通过锰染毒神经母细胞瘤细胞 (SH SY5Y) ,观察脂质过氧化及其相关酶水平的改变 ,探讨锰对SH SY5Y的脂质过氧化及相关酶活性的影响 ,为进一步研究锰神经毒作用的机制提供科学依据。 [方法 ]采用浓度为 0 .2 5、0 .5 0、0 .75mmol/L的二价锰和三价锰 ,分别对体外培养的SH -SY5Y细胞染毒 2 4h ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和过氧化氢酶 (CAT)的活性。 [结果 ]二价锰和三价锰均可引起SOD、MDA、GSH、GSH Px和CAT活性的改变 ,其中SOD、GSH、GSH Px和CAT活性与对照组比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,且存在剂量 效应关系。而MDA含量则较对照组升高 (P <0 .0 1) ,且随染毒浓度增高而上升。 [结论 ]一定浓度的锰化合物可使SH SY5Y细胞脂质过氧化反应增强 ,引起相关酶活性的改变。提示这种变化很可能是锰对神经细胞发挥毒作用的重要途径之一。