北五味子对糖尿病脑病大鼠脑中神经活性物质含量影响的在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用分析

采用在线微透析-高效液相色谱-串联质谱联用方法,测定了糖尿病脑病大鼠大脑海马区的8种脑递质的含量,从脑中神经活性物质的角度研究五味子改善学习记忆能力的作用机制.实验结果表明,经五味子治疗后,痴呆大鼠脑透析液中的谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、多巴胺(DA)及5-羟色胺(5-HT)的含量显著降低(P<0.05),牛磺酸(Tau)及乙酰胆碱(Ach)的含量显著升高(P<0.01),天冬氨酸(Asp)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量有降低趋势(P>0.05),8种神经活性物质的水平均向正常水平发生了调节.此结果说明五味子可能通过调节糖尿病大鼠大脑中神经活性物质的含量发挥保护中枢神经系统的作用,从而改善糖尿病脑病大鼠的学习记忆能力.Morris水迷宫实验结果表明,五味子水提物可以明显缩短糖尿病脑病大鼠的逃避潜伏期,增加穿越目标区域次数及中心区域(%)(P<0.05).

在线微透析-液相色谱-串联质谱法测定人参水提物对糖尿病脑病大鼠脑内神经活性物质的影响

评价人参水提物对糖尿病脑病大鼠学习记忆能力及脑内神经活性物质的影响。建立糖尿病模型,采用Morris水迷宫实验以逃避潜伏期(ELT)、穿越目标区域次数及中心区域(%)为指标评价大鼠的学习记忆能力。利用在线微透析-液相色谱-串联质谱法,Venusil C18柱梯度洗脱,MRM方式检测各组大鼠海马区8种神经活性物质水平并进行比较。结果表明:糖尿病大鼠人参治疗后认知能力明显改善(p<0.05);在线检测方法线性良好(R2>0.99),准确度和精密度满足分析要求;相比模型组,人参组大鼠脑内牛磺酸、乙酰胆碱水平显著升高(p<0.01),谷氨酸、丝氨酸、天门冬氨酸、γ-氨基丁酸、多巴胺和五羟色胺水平均显著降低,8种神经活性物质水平均向正常水平调节。

几种神经活性物质对海湾扇贝幼虫变态诱导作用的研究

本文研究了儿茶酚胺类和金属离子对海湾扇贝幼虫变态的诱导作用，结果显示：外加１０－４－１０－６ｍｏｌ／ｄｍ３的肾上腺素，１０－５ｍｏｌ／ｄｍ３的去甲肾上腺素和Ｌ－多巴具有十分显著的诱导能力；外加１０－１５ｍｍｏｌ／ｄｍ３Ｋ＋和Ｃａ２＋处理幼虫一段时间后，对其变态有明显促进作用。实验研究了最适浓度下肾上腺素、Ｌ－多巴和ＫＣＩ不同处理时间对幼虫变态的影响，表明幼虫对肾上腺素和Ｌ－多巴表现出很高的敏感性，而对ＫＣＩ则表现出对时间和剂量较强的依赖性。

周围神经损伤后脊髓神经元形态及神经活性物质变化的研究

为观测周围神经损伤，尤其是晚期损伤后，脊髓神经元形态、神经活性物质变化及其功能状态，采用切断大鼠坐骨神经，通过辣根过氧化物酶逆行示踪、免疫组化，并结合计算机图像分析等方法，对脊髓前角运动神经元形态及降钙素基因相关肽、胆碱乙酰转移酶和脊髓后角Ｐ物质变化进行定量分析。结果：①前角细胞胞体伤后３周肿胀，６周恢复正常，１２周萎缩２７％。树突持续性收缩，至１２周萎缩５３％。胞体和树突２４周与１２周相似，均无进一步变化。②降钙素基因相关肽神经损伤１周后，即在脊髓前角运动神经元中升至最高并持续４周，８周恢复正常，观察２４周无明显变化；胆碱乙酰转移酶在脊髓前角运动神经元中无明显变化；Ｐ物质在脊髓后角于损伤２～６周下降至最低，１６周恢复正常；而降钙素基因相关肽在脊髓后角则无明显变化。认为，晚期周围神经损伤，从形态学及神经活性物质的变化来看，脊髓神经元的功能活动仍保持在一定水平，具有修复价值。

天然杀虫神经活性物质作用机理研究进展

许多天然产物是有杀虫作用的神经活性物质 。

阿米洛利对异氟醚麻醉后大鼠神经活性物质含量及认知功能的影响

目的探讨阿米洛利(Amil)对异氟醚麻醉后大鼠神经活性物质含量及认知功能的影响。方法采用2月龄SD大鼠吸入1.4%异氟醚6 h建立大鼠吸入麻醉模型,将60只模型大鼠随机分为模型组、低剂量Amil(Amil-L)组和高剂量Amil(Amil-H)组各20只。Amil-L组和Amil-H组分别于麻醉后腹腔注射2.5、5.0 mg/kg Amil,每8 h 1次,共3次。另取20只正常SD大鼠吸入含30%氧气的空氧混合气体6 h作对照。分别于麻醉24 h后检测各组的血流动力学和血糖指标,同时采用Morris水迷宫实验来评价各组的认知功能,将大鼠处死后取海马组织进行炎症指标和神经活性物质的含量测量。结果各组血气和血糖指标均无统计学差异(P>0.05);与对照组相比,模型组的Morris水迷宫逃避潜伏期延长,平台所在象限停留时间减少,海马组织炎症指标〔肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β〕的水平升高,但神经活性物质〔脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT)3和乙酰胆碱(Ach)〕的水平降低(P<0.05);Amil可缩短异氟醚麻醉大鼠的逃避潜伏期,增加其平台所在象限停留时间,降低海马组织的炎症水平且升高海马神经活性物质水平,与模型组和对照组均有统计学差异(P<0.05);Amil-H组的以上指标均优于Amil-L组(P<0.05)。结论 Amil可改善异氟醚麻醉后大鼠的认知功能障碍,可能与其缓解海马炎症反应及升高海马神经活性物质水平有关。

神经活性物质与针刺镇痛机制关联探讨

我国针刺疗法历史悠久,就临床而言,针灸具有明显的止痛作用。纵观1979年至今相关文献文章,发现大量研究致力于分项细致研究针刺对神经活性物质影响,鲜有研究者将各神经活性物质进行系统总结。该文选取在针刺中较为公认对镇痛具有确切影响的神经活性物质,对各研究者观点进行总结与阐述。

神经活性物质对小鼠学习记忆能力及耐力的影响

目的观察神经活性物质 (胚脑组织提取物 ,NAF)对小鼠学习、记忆能力提高的作用 ,以及对小鼠耐力的影响。方法采取随机分组法 ,将 51只小鼠按体重等分 ,分为 5个实验组 :生理盐水组 (A) 9只、脑活素组 (B) 1 1只和 3个不同浓度 (C :0 1mg,1 0只、D :0 2mg,1 0只、E :0 4mg ,1 1只 )的NAF治疗组。用自制的复杂迷宫检测小鼠的迷宫觅食时间及行走的错误次数 ,测定小鼠负重5%体重游泳至淹死的时间。结果迷宫觅食时间A组治疗前后无明显差异 (P >0 1 ) ,B、C、D、E组治疗后缩短或明显缩短 (P <0 0 5- 0 0 0 1 ) ;治疗前后小鼠行走的错误次数A组和B组无显著性差异 (P >0 2 - 0 5) ,C、D、E组有非常显著性差异 (P <0 0 2 - 0 0 1 ) ;小鼠负重 5 %体重游泳淹死时间 5组间方差分析有显著性差异 (P <0 0 5) ,进一步分析差异来自于C与E组 (P <0 0 5)和D与E组(P <0 0 1 )。结论NAF可提高小鼠的学习、记忆能力 ,也可增强小鼠的耐力。腹腔注射≥ 2 0mg kg体重时 。

神经活性物质对小鼠学习记忆能力及耐力的影响

目的 :观察神经活性物质 (胚脑组织提取物 ,NAS)对小鼠学习、记忆能力提高的作用 ,以及对小鼠耐力的影响。方法 :用自制的复杂迷宫检测小鼠的迷宫觅食时间及行走的错误次数 ,测定小鼠负重 5 %体重游泳至淹死的时间。将实验动物随机分为五组 :生理盐水组 (A)、脑活素组 (B)和三个不同浓度 (C :0 .1mg、D :0 .2mg、E :0 .4mg)的NAS治疗组。结果 :①A组迷宫觅食时间治疗前后无显著性差异 (P >0 .1) ,B、C、D、E组治疗后迷宫觅食时间缩短 ,治疗前后有显著性差异或有非常显著性差异 (依次为P <0 .0 0 5、P <0 .0 5、P <0 .0 0 1、P <0 .0 0 1) ;②治疗前后小鼠行走的错误次数A组和B组无显著差异性 (P >0 .2和P >0 .5 ) ,C、D、E组有显著性差异 (依次为P <0 .0 2、P<0 .0 2、P <0 .0 1) ;③小鼠负重 5 %体重游泳 ,其淹死的时间五组方差分析有显著性差异 (P <0 .0 5 )。但组间比较只有C组与E组 (P <0 .0 5 )和D组与E组 (P <0 .0 1)有差异。结论 :NAS可提高小鼠的学习、记忆能力 ,也可增强小鼠的耐力。但其腹腔注射≥ 2 0mg/kg组体重时 ,小鼠的耐力反而下降。

骨髓基质细胞源性神经活性物质的提取与纯化

目的 分离纯化骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)胞浆中神经营养蛋白,并验证其神经活性作用。 方法 自小鼠股骨分离培养MSCs,超声粉碎后离心并收集其上清液,超滤浓缩后收集大于10 ku浓缩蛋白液。Sephadex G- 10 0层析、高效液相色谱分析(high performance liquid chromatography,HPL C)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳(sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electropheresis,SDS- PAGE)等技术分离神经活性蛋白,培养脊髓运动神经元,通过MTT法及观察细胞形态来验证其神经活性作用。 结果 MSCs胞浆上清液经SephadexG- 10 0层析后发现, 峰对神经细胞生长有促进作用。对 峰行HPL C分析发现,A峰对神经细胞生长有明显促进作用。对A峰行SDS- PAGE分析,提示为单一蛋白带,分子量为13ku。 结论 MSCs胞浆中含有神经营养蛋白,其分子量为13ku。

谷氨酸—耳蜗传入神经活性物质的研究进展

耳蜗传入神经活性物质目前尚不清楚。众多实验表明,谷氨酸可能为耳蜗传入神经活性物质。本文就谷氨酸在内耳的合成、释放、高亲和的摄取系统及酶活性测定、电生理及免疫细胞化学研究作一综述。

猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层非典型复合终末神经活性物质的探讨

采用光镜电镜技术探测猫腰骶背根全切后脊髓Ⅱ板层内新出现的一类终末—非典型复合终末(ACT)神经活性物质的性质。实验结果表明:光镜下Ⅱ板层内SP与CCK阳性反应强度早期(7～24天)减弱、范围减小;晚期(2—4.5月)有所回升。m-ENK与5-HT阳性反应强度和范围早期无变化,晚期增加。电镜下分别找到SP、CCK、m-ENK,5-HT阳性的ACT,表明至少存在这四种神经活性物质类型的ACT。本文讨论了四种ACT的机能意义和可能的来源。

耳蜗神经活性物质

耳蜗螺旋器中几种感觉神经的功能迄今尚未弄清。作者应用免疫细胞化学、放射自显影以及神经化学方法对啮齿类动物螺旋器中神经介质或神经调节物质进行了定性及定位研究。

骨髓基质细胞条件培养液中神经活性物质的提取与纯化

目的分离纯化骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells ,BMSCs)条件培养液以获得某些神经活性物质。方法分离培养小鼠骨髓基质细胞并收集其培养液,超滤浓缩后采用SephadexG 10 0层析,高效液相色谱分析(HPLC)和十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳(SDS PAGE)等技术分离其培养液中的蛋白组分并利用细胞培养技术验证其神经活性作用。结果骨髓基质细胞培养液经SephadexG 10 0层析及HPLC分析,证实Ⅲ峰中的A峰和B峰对神经细胞生长有明显的促进作用,其相对分子质量分别为180 0 0和14 0 0 0。结论骨髓基质细胞条件培养液中相对分子质量为180 0 0和14 0 0 0两组分对神经元有营养活性。

督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进大鼠受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质

目的探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用能否促进受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质。方法成年大鼠分为正常组、对照组、神经干细胞移植组(NSCs组)、督脉电针组(电针组)和督脉电针+神经干细胞移植组(电针NSCs组)。除正常组外均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。分别于术后14 d和28 d取材,进行受损伤脊髓组织环一磷酸腺苷(cAMP)含量的放射免疫检测;用Westenblotting检测神经营养素-3(NT-3)、神经营养因子受体(Trk)以及生长相关蛋白-43(GAP-43)的水平。结果1.在术后14 d,NSCs组、电针组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有增加。但除电针组外,脊髓损伤区的上段或下段组织cAMP含量低于正常组。在术后28 d,电针NSCs组脊髓损伤区上段、下段组织cAMP含量仍保持较高水平。NSCs组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有所增加。2.NT-3、Trk及GAP-43的表达以电针组和电针NSCs组较为明显,对照组和NSCs组的3种蛋白表达均低于电针组和电针NSCs组。结论督脉电针能促进受损伤的脊髓组织产生cAMP;督脉电针与NSCs移植联合应用能保持受损伤的脊髓组织较高水平的cAMP,而且NT-3、Trk及GAP-43的含量也有增高的趋势。

睫状神经营养因子和雪旺细胞神经营养活性物质对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的 观察睫状神经生长因子 ( ciliary neurotrophicfactor,CNTF)和雪旺细胞神经营养活性物质 ( Schwann cellsneurotrophic agent,SCNA)对视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用 .方法 采用镊夹法制作大鼠视神经损伤模型 ,损伤后立即一次性向玻璃体内注射 CNTF( 5 0 ng)或SCNA ( 10μL ) ,在损伤后 1,2 ,3和 4 wk时观察夹伤视神经的形态 ,及进行图像分析和轴突纤维计数 .结果 损伤后视神经轴突减少 ,间质增多 .CNTF组和 SCNA组的轴突数密度在 1wk时分别为正常值 ( 0 .10 65± 0 .0 0 5 6个·μm- 2 )的0 .5 9和 0 .61,而对照组为 0 .5 5 ,实验组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 ) .但在夹伤 2 wk后 3个组间、各时间点间数据差异均不显著 ( P>0 .0 5 ) .结论 CNTF及 SCNA一次玻璃体给药能在 1wk内减缓视神经损伤后轴突数目的减少 .

阿米洛利对氯胺酮麻醉大鼠神经细胞凋亡及神经细胞活性物质的影响

目的探讨阿米洛利对氯胺酮麻醉大鼠神经细胞凋亡及神经细胞活性物质的影响。方法选取60只成年雄性SD大鼠,根据随机数字表将大鼠分为生理盐水5 ml·kg^(-1)·h^(-1)组(对照组)、氯胺酮组40 mg·kg^(-1)·h^(-1),氯胺酮40 mg·kg^(-1)·h^(-1)+阿米洛利5.0 mg·kg^(-1)·h^(-1)组,每组20只,每天持续静脉注射2 h,连续给药7 d,最后1次给药24 h后应用Morris水迷宫测试各组大鼠空间记忆能力。水迷宫试验结束后处死各组大鼠取出脑海马组织,分别应用TUNEL法及免疫组化法检测神经元细胞凋亡指数及Bax、Bcl-2表达,酶联免疫吸附(ELISA)法测定海马组织匀浆中神经营养因子(NT)、神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及乙酰胆碱(Ach)水平。结果实验第1天氯胺酮组、氯胺酮+阿米洛利组逃避潜伏时间显著长于对照组(P<0.05),随着实验时间延长,氯胺酮组、氯胺酮+阿米洛利组逃避潜伏期时间显著延长(P<0.05),但氯胺酮+阿米洛利组各时间段逃避潜伏期时间均短于氯胺酮组(P<0.05)。氯胺酮组、氯胺酮+阿米洛利组大鼠海马神经元细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2阳性细胞数量均高于对照组(P<0.05),而氯胺酮组大鼠海马神经元细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2阳性细胞数量均高于氯胺酮+阿米洛利组(P<0.05)。氯胺酮组海马匀浆中NT、NGF、BDNF、Ach水平低于氯胺酮+阿米洛利组(P<0.05),而氯胺酮+阿米洛利组海马匀浆中NT、NGF、BDNF、Ach水平低于对照组(P<0.05)。结论阿米洛利对氯胺酮麻醉后认知功能障碍的改善可能与其抑制神经细胞凋亡及调节神经细胞活性物质水平有关。

备用背根猫脊髓源性神经营养活性物质的初步分离及生物活性检测

本研究组对脊髓可塑性研究已证实，切除猫部分背根后，保留的背根（备用报）纤维可则侧支出芽代偿被切断的传入纤维，并与其靶区（背角）重建突触联系。用电泳和体外培养等方法亦发现备用背根猫去传入侧脊髓背角组织提取液中一些蛋白质的含量发生了变化，而且其促神经突起生长的作用增强。在以上研究的基础上，我们采用凝胶过滤层析方法，分离提取液中对神经突起生长有促进作用的相关蛋白质。实验采用成年雄性家猫30只，切除一侧T10～L1，L3～L5，L7～S2背根节，保留L2和L5背极为备用背根。术后五天取手术侧和非手术侧T9～S3节段脊髓背角组织，分别匀浆、离心后，所得上清液即为提取液。提取液经SephadexG－200凝胶过滤层析后，获得三个主峰，分别收集手术侧和非手术侧三个峰值处的洗脱液，透析、冻干，用再改良的悬滴培养法进行生物活性检测。结果发现：手术侧背角提取液中第二峰值洗脱液促鸡胚背根节神经突起生长的作用明显张于非手术侧者（Pwto．01），在加入量为50ug／ml时，促神经突起生长作用最强。本研究结果为进一步分离纯化该神经营养活性物质奠定了基础。

联合培养法的改良及其在检测神经营养活性物质中的应用

著者已用细胞钓蛋白带技术证明，在备用根猫脊髓背角手术侧提取液电泳带相对迁移率（R；）0．11—0．12，045－0．48两处蛋白带中含有某些神经营养活性物质。为进一步验证该两蛋白带所含物质对神经元存活的影响，本文用改良的联合培养法观察手术Rfo．11－0．12、Rro．45—0．48两蛋白带对鸡胚背报节神经元存活的影响。具体方法如下：将常规的联合培养法（即将合某神经营养活性物质的凝胶小条放置于鸡胚DRG附近进行联合培养后，可见DRG的神经突起明显朝向凝胶小条的一面生长）改为将DRG的神经细胞悬液接种于涂有鼠尾胶原的24孔培养板孔内，并将磨碎的凝胶小条分别加入培养孔内。根据神经营养活性物质可从凝胶内折至培养液中的原理直接观察其对神经元存活的影响。结果显示：加入手术侧Rf0．11－0．12、Rr0．45－0．48蛋白带凝胶碎末的培养，其神经细胞存活率分别为082±0．05、081±0．02；而非手术侧组者其神经细胞存活率分别为0．55±0．07、0．54±0．08。分别比较两组的两带细胞存活率，均有显著性差异（P＜0.01）。说明手术侧组Rf0．11－0．12及0．45—0．48两条蛋白带内均含有促进神经元存活的神经营养活性物质。

吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定

目的 分离纯化吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液 ,以期获得某些神经营养活性物质。 方法 应用SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析、高效液相色谱 (HPLC)和组织培养等技术分离和检测神经营养活性物质。 结果 备用根大鼠脊髓组织提取液能够促进体外培养的鸡胚背根节 (DRG)神经突起的生长 ;吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液也具有同样的作用 ,但备用根大鼠和吗啡作用的大鼠脊髓组织提取液在促神经突起生长作用方面并没有明显的差异。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液具有明显的神经营养活性作用。吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液的SephacrylS 2 0 0HR凝胶层析Ⅱ峰洗脱液和Ⅳ峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE分析 ,Ⅱ峰洗脱液呈现 1条分子量约为 6 5kD的蛋白质主带 ,Ⅳ峰洗脱液的蛋白质成分较为复杂。应用HPLC对凝胶层析Ⅳ峰洗脱液作进一步的分离 ,发现HPLCA峰洗脱液能够促进DRG神经突起的生长。经SDS PAGE显示 ,A峰洗脱液的两条蛋白质主带分子量分别为 30kD和 18kD。 结论 吗啡备用根大鼠脊髓组织提取液中具有神经营养活性作用的物质可能是分子量约为 6 5kD、30kD和