神经生长因子低亲合力受体在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞的表达

目的探讨神经生长因子低亲合力受体(P75)在肝纤维化患者和大鼠肝星状细胞(HSCs)的分布及作用机制。方法对四氯化碳(CCl4)法制备的肝纤维化大鼠肝组织及肝穿刺获取的肝纤维化患者肝组织,常规石蜡包埋;大鼠离体培养的活化HSCs离心涂片,行免疫组织化学染色,确定P75的表达分布。结果P75在大鼠离体培养的活化HSCs膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化患者HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在肝纤维化大鼠HSCs膜和肝细胞膜,免疫组织化学染色呈阳性,在健康人和正常对照大鼠HSCs膜,免疫组织化学染色呈阴性,表明人和大鼠活化的HSCs膜表达P75。结论P75为肝纤维化的治疗提供了新的靶点。

p75NTR-Fc融合蛋白在毕赤酵母中的表达、鉴定和活性分析

为在酵母细胞中表达出具有生物活性的p75NTR Fc融合蛋白 ,采用PCR方法分别扩增α因子 (α factor)和p75NTR Fc基因 ,经重叠PCR ,获得α factor p75NTR Fc基因 .DNA序列分析该融合基因后 ,插入pAO815载体并构建串联多拷贝表达载体pAO815 3α factor p75NTR Fc .重组质粒电转化酵母GS115细胞后摇瓶培养 ,1%甲醇诱导表达的融合蛋白经ProteinA亲和层析和SephadexG 10 0纯化 ,Western印迹、N末端测序进行蛋白质鉴定 ,ELISA及细胞培养进行生物活性分析 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中 ,诱导第 4d的表达量最高 ,占上清总蛋白 6 0 %以上 ,ProteinA纯化后有 2条蛋白带 ,免疫印迹分析这 2条蛋白带均能和抗p75及抗IgG抗体结合 ,N末端序列测定证实 1条为完整p75NTR Fc ,1条为其蛋白酶降解带 .ELISA等分析表明 ,p75NTR Fc能与NGF结合 ,p75NTR Fc能抑制NGF对PC12细胞的分化作用 .

p75真核表达载体的构建及其在PC-3细胞中的表达

目的:构建人神经生长因子低亲和力受体p75真核表达质粒,并在前列腺癌细胞PC3中表达。方法:运用RTPCR技术从人脑胶质细胞瘤组织中分离扩增编码人p75完整基因,与pcDNA载体重组,并通过酶切和测序鉴定;用脂质体介导法将重组质粒转染到PC3细胞中,经G418筛选后,用RTPCR、间接免疫荧光化学和细胞免疫组织化学法在转录和翻译两个水平上检测表达产物。结果:酶切和测序证实所获得的重组质粒包含-p75完整基因;在转染pcDNA3.1(+)-p75的PC-3细胞中检测到转录和翻译产物。结论:成功地构建了-p75真核表达质粒并在PC-3细胞中表达,为深入研究p75在前列腺癌中的生物学功能奠定了基础。

参芎化瘀胶囊对全脑缺血大鼠海马CA1区GAP-43和P75NTR表达的影响

目的：探讨参芎化瘀胶囊对全脑缺血大鼠海马CA1区生长相关蛋白43（GAP-43）和神经营养因子低亲合力受体（P75NTR）表达的影响.方法：清洁级SD雄性大鼠72只,分正常对照组、全脑缺血模型组和参芎化瘀胶囊＋全脑缺血组（灌胃剂量：480 mg·kg-1 ·d-1,每日1次,早上8：00给药）,每组24只,取3,7,14d3个时间点.制备全脑缺血模型.水迷宫评价学习记忆能力,HE染色观察组织病理学的变化,免疫组化法观察GAP-43表达,蛋白印迹分析检测GAP-43和P75 NTR蛋白含量.结果：①行为学：和正常对照组比较,模型组大鼠各个时间点逃避潜伏期时间明显延长（P＜0.05）,参芎化瘀胶囊组大鼠逃避潜伏期时间较模型组缩短（P＜0.05）；②HE染色显示：与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元3～14 d进行性坏死,存活神经元减少,参芎化瘀胶囊组各个时间点正常神经元计数和模型组比较有差异（P＜0.05）；③GAP-43免疫组化和蛋白印迹结果：和正常组比较,模型组GAP-43的表达3d升高,7d最明显,14 d下降；和模型组比较,参芎化瘀胶囊组3,7,14d持续性升高,各个时间比较均有差异（P＜0.05）；④P75NTR蛋白印迹结果分析：和正常组比较,模型组的表达3d升高,7d最明显,14 d下降；和模型组比较,参芎化瘀胶囊组3,7,14 d持续性升高,所有时间点比较均有差异（P＜0.05）.结论：参芎化瘀胶囊增强全脑缺血大鼠海马CA1区GAP-43和P75 NTR的表达.