神经生长因子前体蛋白在糖尿病视网膜神经细胞病变中的作用

糖尿病视网膜神经细胞病变(DR)是糖尿病的主要周围神经组织病变。许多研究表明它发生在视网膜微血管病变之前,其受累的视网膜神经节细胞、神经胶质细胞、视锥视杆细胞等发生损伤和死亡,是最终导致糖尿病患者视力损伤的重要因素之一。DR已成为目前全球主要的致盲眼病之一。神经生长因子前体蛋白(proNGF)能与其凋亡受体p75神经营养因子受体(p75NTR)结合,对细胞的生长具有抑制作用,并介导细胞凋亡。研究证实,proNGF在DR中扮演了重要作用。本文现就proNGF及其受体p75NTR在糖尿病视网膜神经细胞病变的作用作一综述。

西妥昔单抗对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白表达的影响

目的:探讨西妥昔单抗对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡、胶质细胞活化及脑组织淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:27只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、西妥昔单抗组,每组9只。结扎大脑中动脉制备缺血再灌注模型,立即经侧脑室注射给予西妥昔单抗(106μg/d),持续7 d。每组选取3只,在术后第3和7天进行神经功能评分。每组分别在缺血再灌注术后第3和7天处死3只,取脑组织制备冰冻切片,用免疫荧光染色观察APP及胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,用TUNEL染色法检测神经元凋亡指数。提取新生大鼠大脑皮层组织制备胶质细胞悬液,培养的胶质细胞换成含有西妥昔单抗(10μg/mL)的无糖无血清培养基在缺氧培养箱中培养2 h,然后换成正常糖/血清的培养基在正常氧的培养箱中继续培养6 h,收集细胞,观察胶质细胞GFAP荧光强度的变化,对照组不进行缺氧/复氧处理,缺氧/复氧组不加西妥昔单抗。结果:与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠神经功能评分升高,凋亡指数增加,胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,APP表达升高(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,西妥昔单抗组神经功能评分下降,凋亡指数降低,GFAP免疫荧光强度减弱,APP表达下降(P<0.05)。体外实验结果显示,与对照组比较,缺氧/复氧组胶质细胞GFAP免疫荧光强度增强,而西妥昔单抗组较缺氧/复氧组降低(P<0.05)。结论:西妥昔单抗能促进脑缺血再灌注大鼠神经功能恢复,其机制可能与减少APP的表达、抑制神经元凋亡及胶质细胞活化有关。

埃兹蛋白477位酪氨酸的磷酸化在神经生长因子前体促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用

目的研究神经生长因子前体(precursor of nerve growth factor,pro NGF)促进乳腺癌细胞侵袭的作用与埃兹蛋白(ezrin)表达水平及其567位苏氨酸(Thr567)和477位酪氨酸(Tyr477)的磷酸化的相互关系。方法用梯度浓度的pro NGF(0、2.5、5和10 ng/m L)刺激人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7,用Transwell侵袭实验检测pro NGF对MDA-MB-231和MCF-7侵袭的影响;用免疫印迹法检测ezrin蛋白的表达水平,ezrin Thr567和ezrin Tyr477磷酸化水平的变化;在MDA-MB-231中转染p Enter-His-ezrin Y477F质粒(ezrin显性负突变质粒),研究ezrin Tyr477磷酸化在pro NGF促进乳腺癌细胞侵袭中的作用。结果pro NGF以浓度依赖的方式促进MDA-MB-231和MCF-7的侵袭(P<0.05);pro NGF以浓度依赖和时间依赖的方式显著升高ezrin Tyr477磷酸化,而对ezrin蛋白的表达以及其Thr567磷酸化无明显影响;Src激酶特异抑制剂SKI-606显著抑制pro NGF对ezrin Tyr477磷酸化的促进作用;转染p Enter-His-ezrin Y477F抑制pro NGF对MDA-MB-231细胞ezrin Tyr477磷酸化和侵袭能力的促进作用(P<0.05)。结论 ezrin Tyr477磷酸化在pro NGF促进乳腺癌细胞侵袭中起关键作用;pro NGF通过激活Src激酶使ezrin Tyr477发生磷酸化。

单核细胞趋化蛋白1、颗粒蛋白前体、胶质细胞源性神经营养因子水平与阿尔茨海默病认知功能、日常生活能力相关性分析

目的 分析血清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、颗粒蛋白前体(PGRN)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平与阿尔茨海默病(AD)病人认知功能及日常生活能力的相关性,探讨其在AD中的诊断价值。方法 选取2019年7月至2021年6月入住苏州大学附属广济医院治疗的41例AD病人作为观察组,采用随机数字表法选取苏州大学附属广济医院同期经评估符合入组的41例健康志愿者作为对照组,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测两组研究对象血清MCP-1、PGRN、GDNF水平;采用简易智力状态检查表(MMSE)及日常生活量表(ADL)评估其认知功能及日常生活能力。分析观察组病人血清MCP-1、PGRN、GDNF水平与MMSE、ADL评分的相关性;并通过受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析MCP-1、PGRN、GDNF在AD中的诊断价值。结果 观察组MCP-1(321.7±51.1)ng/L、PGRN(42.6±8.5)μg/L水平较对照组MCP-1(242.6±35.2)ng/L、PGRN(26.5±6.1)μg/L显著增高,观察组GDNF(357.8±112.3)ng/L水平较对照组GDNF(468.0±106.6)ng/L显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示:观察组MMSE、ADL评分与血清MCP-1、PGRN水平均呈负相关(r=-0.46~-0.31,P<0.05),与PGRN水平呈正相关(r=0.47、0.46,P<0.05)。ROC曲线显示:MCP-1、PGRN、GDNF对AD的诊断价值较高,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.73、0.75、0.71,灵敏度分别为75.6%、75.6%、70.7%,特异度分别为61.0%、70.7%、63.4%,MCP-1、PGRN、GDNF三项标志物联合检测的AUC为0.83,灵敏度和特异度分别达到82.9%、75.6%。结论 AD病人血清MCP-1、PGRN水平表达明显增高,GDNF水平表达明显降低。这与AD病人认知功能和日常生活能力减退严重程度显著相关。三项指标联合检测在AD诊断中有着重要的参考价值.

神经生长因子及其前体蛋白在晚期胰腺癌组织中的表达研究

采用2011年1月-2014年6月在云南省第一人民医院确诊并行手术治疗的58例胰腺癌患者,切除部分肿瘤组织作为实验标本,癌旁组织作为对照,利用免疫组化及Western blot检测晚期胰腺癌组织内神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及神经生长因子前体(precursor of nerve growth factor,pro NGF)的表达,Gel-Pro analyzer 4图像分析系统分析Western条带密度.试验重复3次,取3次IOD值行统计学分析.免疫组化及Western blot结果显示肿瘤组织NGF的表达较癌旁组织明显增高,而pro NGF的表达较癌旁组织明显降低.半定量Western blot显示癌旁组织和肿瘤组织NGF表达的IOD值分别为113.33±8.54和285.00±15.13,pro NGF表达的IOD值分别为245.00±7.55和86.33±7.37,差异有统计学意义(P<0.05).因此,晚期胰腺癌患者肿瘤组织内NGF/pro NGF的比例发生改变,组织内NGF蓄积,而pro NGF减少,这可能是导致胰腺癌肿瘤细胞凋亡减少,生长、浸润和迁徙功能增强的重要机制之一.

人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体

目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据。方法体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9 d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平。结果对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA。感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTRmRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高。免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达。结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR。

淀粉样前体蛋白胞内结构域对阿尔茨海默病模型小鼠神经发生和学习记忆的影响

【目的】探讨淀粉样前体蛋白胞内结构域(AICD)对阿尔茨海默病(AD)模型动物神经发生、学习记忆的影响。【方法】本研究使用免疫荧光染色检测AICD转基因小鼠来源的体外培养的神经前体细胞(NPCs)、胚胎大脑皮质、成年海马齿状回(DG)中增殖和分化的细胞数目;水迷宫实验检测老年AICD转基因小鼠对学习记忆能力影响;生物信息学预测和分析潜在的分子机制。【结果】免疫荧光染色结果显示AICD转基因模型体外NPCs、胚胎皮质、海马DG区域的神经干细胞和神经元数量减少(P<0.05),即AICD抑制不同时期AD模型小鼠的神经发生。水迷宫结果显示AICD增加AD模型小鼠逃逸潜伏期,减少其跨越平台次数,并减少DG区域神经元数目(P<0.05)。生物信息学结果显示,AICD参与调节AD发病进程中神经发生和学习记忆的靶点有1723个,关键靶点有TP53、CTNNB1、Akt1、EGFR、SRC、EP300、HDAC1、STAT3、HSP90AA1和MAPK1;另外,KEGG通路注释分析发现PI3KAkt、HIF-1等信号通路在AICD调节神经发生和学习记忆起关键作用。【结论】表明AICD可以抑制AD模型小鼠海马神经发生进而损害学习记忆能力,这可能与PI3K-Akt和HIF-1等信号通路有关。本研究为进一步理解AICD在AD发病进程中作用提供实验依据。

急性心力衰竭患者血清胰岛素样生长因子结合蛋白-7、沉默信息调节因子4表达水平及意义

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP-7)、沉默信息调节因子4(SIRT4)在急性心力衰竭(AHF)患者血清中的表达水平及其对预后的预测价值。方法 选取151例AHF患者(AHF组)和151例健康体检者(对照组)作为研究对象,检测并比较2组血清IGFBP-7、SIRT4、N-末端钠尿肽前体(NT-proBNP)和活性氧(ROS)水平。分析血清IGFBP-7、SIRT4、NT-proBNP、ROS水平与病情分级的关系;采用Pearson相关系数法分析IGFBP-7、SIRT4与NT-proBNP、ROS的相关性;采用多因素Logistic回归分析法分析AHF患者预后的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清IGFBP-7、SIRT4对AHF患者预后不良的预测效能。结果 AHF组血清IGFBP-7、SIRT4、NT-proBNP和ROS水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AHF组患者中,病情分级Ⅳ级者血清IGFBP-7、SIRT4、NT-proBNP和ROS水平高于Ⅲ级者和Ⅱ级者,且Ⅲ级者高于Ⅱ级者,差异有统计学意义(P<0.05);AHF组预后不良者病情分级和血清IGFBP-7、SIRT4、NT-proBNP、ROS表达水平均高于预后良好者,差异有统计学意义(P<0.05)。AHF患者血清IGFBP-7、SIRT4水平均分别与血清NT-proBNP、ROS水平呈正相关(r=0.523、0.498、0.578、0.557,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,病情分级和血清IGFBP-7、SIRT4、NT-proBNP、ROS水平均为AHF患者预后的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清IGFBP-7、SIRT4对AHF患者预后均有一定预测价值,曲线下面积(AUC)分别为0.794、0.795,且两者与ROS联用的预测价值更高,AUC为0.909(95%CI:0.858~0.959)。结论 IGFBP-7、SIRT4在AHF患者血清中呈高表达,且其表达水平与患者病情分级和预后显著相关,两者联合检测对患者预后具有较高的预测价值。

血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白、N末端脑钠肽前体、神经酰胺风险评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值

目的探讨血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、神经酰胺风险(CERT)评分联合Fried衰弱量表对老年慢性心力衰竭(CHF)患者预后的评估价值。方法回顾性分析2020年7月至2021年7月于徐州医科大学附属医院收治住院治疗的304例老年慢性心力衰竭患者的临床资料。随访1年,根据随访期间是否发生不良心血管事件(MACE)将患者分为MACE组(76例)和非MACE组(228例)。比较2组患者血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱的差异。采用SPSS 25.0统计软件进行数据分析。根据数据类型,分别采用t检验、秩和检验或χ^(2)检验进行组间比较。采用Spearman相关分析左心室射血分数(LVEF)与sST2、NT-proBNP、CERT评分等指标的相关性。采用logistic回归分析MACE的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱对老年慢性心力衰竭患者预后的评估价值。结果sST2、NT-proBNP、CERT评分与LVEF呈负相关(r=-0.241,-0.193,-0.183;P<0.05)。与非MACE组比较,MACE组患者sST2、NT-proBNP、CERT评分、衰弱比例更高,LVEF值更低,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清sST2、NT-proBNP水平、CERT评分、衰弱对CHF患者预后不良的预测的曲线下面积(AUC)分别为0.695、0.713、0.636、0.658,四项联合预测AUC为0.800。结论血清sST2、NT-proBNP、CERT评分及衰弱是老年CHF患者发生MACE的重要影响因素,具有较高的预后预测价值,且联合预测价值更高。

血管性痴呆患者血同型半胱氨酸、超敏C反应蛋白、D-二聚体、碱性成纤维细胞生长因子和脑源性神经营养因子水平及其临床意义

目的探讨血管性痴呆(VaD)患者血同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、D-二聚体、脑源性神经营养因子(BDNF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平及其临床意义。方法选取231例急性缺血性脑卒中患者,分为VaD组175例和非血管性痴呆(NVaD)组56例。同时选取52例健康志愿者为健康组。比较3组血Hcy、hs-CRP、D-二聚体、BDNF及bFGF水平,分析VaD患者认知功能与上述指标的关系。结果VaD组的血Hcy、hs-CRP及D-二聚体水平均高于健康组和NVaD组(均P<0.05),血BDNF及bFGF水平均低于健康组和NVaD组(均P<0.05)。轻度VaD组、中度VaD组、重度VaD组的血Hcy、hs-CRP和D-二聚体水平依次升高,血BDNF及bFGF水平依次降低(均P<0.05)。VaD患者的痴呆程度与血Hcy、hs-CRP、D-二聚体水平呈正相关,与血BDNF及bFGF水平呈负相关(均P<0.05)。结论VaD患者血Hcy、hs-CRP、D-二聚体升高,而BDNF及bFGF降低;以上指标可能与VaD的发生发展有关,或可用于VaD预测以及疗效评估。

神经生长因子对牛腔前卵泡体外培养的影响

用改良的McCoy’s 5a培养液(含 3 mmol/L L-谷氨酰胺、1 g/L BSA、29 ng/mL睾酮、2.5μg/mL转铁蛋白、100 ng/mL胰岛素和4 ng/mL硒),在96孔培养板中,每孔250μL培养液条件下,研究了神经生长因子(NGF)对牛腔前卵泡体外发育的影响。结果表明:在培养液中添加 3种不同浓度(4、6、8 IU/mL)NGF对体外培养的d<60μm腔前卵泡有促进生长的作用。在体外培养10 d时,3种不同浓度NGF组的d<60μm腔前卵泡及其卵母细胞直径平均增长值显著高于对照组,但对60μm<d<130μm和d>130μm的腔前卵泡作用不显著。同时,不同浓度的 NGF显著提高了d<60μm腔前卵泡的发育率。

人胰岛素样生长因子前体基因的重组、表达及其蛋白纯化

目的:构建含有人胰岛素样生长因子(humaninsulin-likegrowthfactor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coliBL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值。方法:采用PCR法,扩增编码hIGF-1前体cDNA的片段,通过双酶切、胶回收纯化、连接后得到pET32a(+)/hIGF-1重组载体,然后将其转化入BL21(DE3)中,经IPTG诱导后表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Westernblot法检测重组蛋白的抗原活性。结果:重组质粒pET32a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。BL21(DE3)表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳后显示,其表达量占细菌总蛋白量的25%左右,该重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后其纯度高达90%以上。Westernblot结果显示非常清晰的免疫印迹条带,表明此重组蛋白具有免疫学特异性。结论:pET32a(+)/hIGF-1重组载体构建成功,并能够高效表达。

胰岛素样生长因子-1减少胎羊缺血性脑白质损伤后淀粉样前体蛋白表达(英文)

目的 淀粉样前体蛋白 (β APP)是脑白质损伤早期敏感的指标 ,并参与缺氧缺血性脑损伤机制。本研究观察胎羊缺血性脑白质损伤及胰岛素样生长因子 1(IGF 1)治疗对淀粉样前体蛋白 (β APP)表达的影响。方法 胎羊于胎龄 117 12 4天 (足月为 14 7天 )时通过双侧颈动脉阻塞 30min造成双侧脑缺血损伤 ,损伤后胎羊随机分为损伤组 (n =8)和重组人IGF 1(rhIGF 1)治疗组 (n =9) ;另设正常对照组 (n =5 ) ,为假手术动物。治疗组缺血后 90min经侧脑室注射 3μgrhIGF 1;损伤组经侧脑室注射等量人工脑脊液。缺血损伤后 96h结束实验 ,处死动物 ,取出胎羊 ,固定脑组织。免疫组化法检测脑白质胶质原纤维酸性蛋白 (GFAP)、β APP阳性细胞及白质内髓鞘碱性蛋白 (MBP)密度。应用免疫荧光双标记观察APP表达阳性细胞。结果 与正常对照组 (2 7.8± 4 .8)比较 ,缺血损伤组MBP密度 (4.7± 7.1,P <0 .0 0 1)明显减少。正常对照组未见 β APP阳性细胞 ,损伤后阳性细胞数明显增加 (49.6± 2 3.7,P <0 .0 0 1) ,rhIGF 1治疗可减少 β APP阳性细胞数 (17.9± 16 .5 ,P <0 .0 1)。免疫荧光双标记显示部分细胞为 β APP GFAP双标阳性细胞。 结论 胎羊缺血性脑白质损伤可导致星形胶质细胞表达β APP ,β APP表达增加可能与脑损伤有关?

胰岛素样生长因子结合蛋白-7在急性心力衰竭所致呼吸困难诊断中的应用

目的探讨血浆胰岛素样生长因子结合蛋白-7(IGFBP7)以及IGFBP7联合N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)在急性心力衰竭所致呼吸困难中的诊断价值。方法选取2018年3月至2020年9月中国医科大学附属第一医院急诊科就诊的154例急性呼吸困难患者为研究对象,根据临床诊断结果,将患者分为非急性心力衰竭组(n=93)和急性心力衰竭组(n=61)。2组患者均进行血常规,肝、肾功能,胸部X线片、心电图和超声心动图检查及左心室射血分数(LVEF)、血浆IGFBP7和NT-proBNP水平检测。采用t检验或χ2检验比较2组各项临床指标的差异,对有统计学意义(P<0.05)指标采用logistic回归分析急性心力衰竭的危险因素。采用受试者操作特征(ROC)曲线分析IGFBP7、NT-proBNP以及二者联合对急性心力衰竭患者呼吸困难的诊断价值。结果与非急性心力衰竭组比较,急性心力衰竭组患者合并高血压、冠状动脉疾病、心房颤动比例,血浆IGFBP7和NT-proBNP水平显著增高,而合并哮喘/慢性阻塞性肺疾病(COPD)比例、LVEF和肾小球滤过率估算值(eGFR)则显著降低(均P<0.05)。logistic回归分析结果显示,IGFBP7、NT-proBNP升高及LVEF降低是急性心力衰竭的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析表明,IGFBP7的ROC曲线曲线下面积(AUC)为0.878(0.821~0.935)。IGFBP7最佳截断值为98.4 ng/mL,诊断心力衰竭性呼吸困难的灵敏度为85.2%,特异度为82.8%。NT-proBNP的ROC曲线AUC为0.879(0.818~0.940)。NT-proBNP的最佳截断值为1366 ng/L,诊断心力衰竭性呼吸困难的灵敏度为85.2%,特异度为89.2%。二者联合诊断的AUC为0.952(0.918~0.986),灵敏度为88.5%,特异度92.5%。结论单独使用IGFBP7或联合NT-proBNP是诊断急性心力衰竭所致呼吸困难的有效方法,IGFBP7可作为一种新型的急性心力衰竭的生物学标志物。

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞ERK1/2活性的影响

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对体外培养成年大鼠海马神经前体细胞增殖和细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)活性的影响。方法 体外培养成年大鼠海马神经前体细胞经预处理后 ,分别加入BrdU(10μmol)和bFGF(2 0ng/ml)进行培养 ,采用流式细胞仪和Westernblot方法测定海马神经前体细胞DNA合成和磷酸化ERK1/ 2活性。结果 流式细胞仪结果显示加入bFGF进行培养的海马成年神经前体细胞BrdU阳性标记率为(19.5± 3.2 ) % ;对照组为 (10 .5± 1.4 ) % ,两组具有显著性差异 (P <0 .0 1)。同时 ,Westernblot方法测定结果表明bFGF刺激后 ,海马成年神经前体细胞磷酸化ERK1/ 2活性升高 ,15min时为峰值 ,6 0min后恢复到基础水平。结论 bFGF通过激活ERK1/ 2信号转导途径促进成年海马神经前体细胞胞核内DNA的合成 。

胰岛素样生长因子-1对β-淀粉样前体蛋白裂解酶1的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对人类神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中β-淀粉样前体蛋白裂解酶1(β-site amyloid precursor protein cleaving enzyme1,BACE1)的影响以及可能的细胞信号机制。方法:用不同剂量IGF-1(20、40 ng/ml和80 ng/ml)作用于人类神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 24 h,荧光定量PCR及Western blot检测BACE-1mRNA及蛋白水平;Western blot检测淀粉样前体蛋白、C99、C83及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositide3-kinase/serine threonine kinase,PI3-K/Akt)通路相关蛋白的水平;ELISA检测细胞培养液中β-淀粉样蛋白42(β-amyloid peptide,Aβ42)的水平,然后选择最佳剂量的IGF-1(80 ng/ml)作用于人类神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,在此之前30 min加入PI3-K抑制剂LY294002(25μmol/L及50μmol/L),重复上述检测。结果:IGF-1降低BACE-1、C99及Aβ42的水平(P=0.000),提高C83的表达(P=0.000),增加Akt的磷酸化(P=0.000),而LY294002具有抑制IGF-1的上述作用。结论:IGF-1降低BACE-1mRNA及蛋白的水平,其机制可能涉及PI3-K/Akt信号通路。

中国人β神经生长因子前体基因的克隆及其序列分析

从正常人外周血白细胞中提取基因组ＤＮＡ，用ＰＣＲ扩增神经生长因子（ＮＧＦ）β亚基前体的全长编码区序列，将其克隆到Ｔ－ｖｅｃｔｏｒ（原始质粒为ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ（＋））上，取两个独立的克隆采用自动测序仪进行双链ＤＮＡ双向测序，结果表明：两个克隆的序列完全相同，该序列与国外报道的ＮＧＦ序列有一个碱基的差别，从而导致ＮＧＦ前导肽中一个氨基酸的改变，而成熟的ＮＧＦ序列没有改变。

下丘脑神经生长因子前体对心肺转流大鼠室旁核场电位的影响

目的探讨下丘脑神经生长因子前体(nerve growth factor precursor, proNGF)在大鼠心肺转流(CPB)过程中的改变以及可能对交感输出产生的作用。方法雄性SD大鼠42只,3～4月龄,体重350～500 g。其中18只建立大鼠CPB模型,将大鼠分为三组:对照组、CPB组和心肌缺血-再灌注组(IR组)。CPB 110 min后,取大鼠下丘脑和心脏节段背根神经节,检测NGF mRNA表达量以及proNGF蛋白含量。另选取12只大鼠双侧室旁核(PVN)插管,连续7 d注入proNGF蛋白,检测并记录延髓头端腹外侧区(RVLM)场电位。另选取12只大鼠侧脑室注入proNGF蛋白,检测并记录给药前后PVN场电位;PVN场电位记录结束后,检测下丘脑谷氨酸以及γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果与对照组比较,CPB末CPB组、IR组proNGF蛋白含量明显升高(P<0.05),DRG以及下丘脑NGF mRNA表达量明显升高(P<0.05)。注入proNGF蛋白后,RVLM以及PVN场电位1～4 Hz频段能量明显下降,其余频段能量明显升高(P<0.05);侧脑室注入proNGF对下丘脑谷氨酸无明显影响,但明显降低GABA含量(P<0.05)。结论大鼠CPB后下丘脑proNGF表达增加,可能参与下丘脑交感输出改变。

神经生长因子、脑源性神经生长因子及其前体在神经系统中的效应

背景:神经营养因子目前已发现20余种,其中神经生长因子和脑源性神经营养因子作为中枢神经系统中分布最广泛的生长因子之一,对中枢神经系统甚至整个大脑的生长发育及神经元可塑性至关重要。目的:为全面深入认识神经生长因子和脑源性神经营养因子,进一步了解其在神经系统损伤修复时发挥的作用,文章对神经生长因子和脑源性神经营养因子及其前体的研究进展进行综述。方法:应用计算机检索PubMed、中国期刊网专题全文数据库等数据库有关神经营养因子、神经生长因子和脑源性神经营养因子等相关的文献,检索词为nerve growth factor(NGF);proform of nerve growth factor(proNGF);brain-derived neurotrophic factor(BDNF);precursor for brain-derived neurotrophic factor(proBDNF);神经营养因子,神经营养因子受体等。结果与结论:周围神经损伤后神经生长因子具有保护神经元的生物学功能;神经生长因子前体则同时与受体p75^(NTR)和Sortilin形成三聚体的信号传导物,诱导了神经损伤后的细胞凋亡和神经组织的死亡。脑源性神经生长因子优先结合TrkB产生促进突触生长或支持神经元存活、分化的生物学效应;脑源性神经营养因子前体则优先结合p75^(NTR)及Sortilin,引发神经元凋亡。虽然随着研究的不断深入发现了神经生长因子前体和脑源性神经营养因子前体表现出与成熟神经生长因子和成熟脑源性神经营养因子相反的生物学作用,但具体的作用机制还不完全清楚。

纤维蛋白凝胶/血管内皮生长因子复合体在兔坐骨神经损伤恢复中的作用

目的探讨纤维蛋白凝胶/血管内皮生长因子复合体在新西兰兔坐骨神经损伤后的功能恢复中的作用。方法将12只新西兰兔分成两组,每组6只,实验组给予纤维蛋白凝胶/血管内皮生长因子复合体治疗,对照组给予血管内皮生长因子基因转染治疗,分别于治疗后第3、6、9周比较两组大体观察、坐骨神经功能指数、微血管计数等指标改善情况。结果连续观察9周后,实验组新西兰兔大体观察、坐骨神经功能指数、微血管计数等指标均明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论纤维蛋白凝胶/血管内皮生长因子复合体能够有效促进新西兰兔坐骨神经损伤后的功能修复。