神经生长因子受体TrkA在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓表达差异的研究

为了探讨神经生长因子 ( NGF)受体 Trk A在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓的分布状况、进而分析 NGF的作用机制 ,用免疫组化技术检测了新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓 NGF受体 Trk A的表达。结果显示 ,新生鼠脊髓前角运动神经元只有胞核 Trk A表达明显 ,胞浆及胞膜无表达 ,中间带、背角均无表达。幼鼠前角运动神经元胞浆 Trk A表达明显 ,胞核少量表达 ,胞膜无表达 ;部分中间带、背角神经元胞浆有表达。成鼠前角运动神经元胞浆及部分胞膜都有 Trk A表达 ,胞核无表达 ,中间带、背角神经元胞浆以及胶质细胞也明显表达。推论 ,新生鼠时胞核中 Trk A可与配体结合引起神经元的生物效应 ;成鼠 Trk

四氯化碳对大鼠海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75表达的影响

目的研究四氯化碳(CCl4)对大鼠脑海马CA1区神经元低亲和力神经生长因子受体p75的表达和凋亡的影响。方法将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和CCl4组。对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组分别在每周一或/和周四背部皮下注射60%CCl4-橄榄油溶液(0.3ml/100g)1次(1d组)2、次(1周组)和4次(2周组),实验结束时处死大鼠。取脑后沿正中矢状面切开,右侧半脑石蜡切片,行Nissl染色,观察海马CA1区神经元的形态学改变;行p75、Bax免疫组织化学染色和Western blotting分析,检测海马CA1区神经元p75、Bax的表达,行原位缺口末端标记法(TUNEL)观察海马CA1区神经元的凋亡。结果Nissl染色显示对照组CA1区神经元染色较深,细胞数目较多,排列整齐,神经元内可见大量尼氏体;CCl4组CA1区神经元排列较对照组紊乱,部分锥体细胞体积缩小,核固缩,呈三角形,胞浆内尼氏体数目减少或消失。对照组海马CA1区可见少量表达p75和Bax的阳性细胞;CCl4组海马CA1区表达p75和Bax的阳性细胞数较对照组明显增多,以1周CCl4组增多最为明显;Western blotting结果与免疫组织化学染色结果一致。对照组海马CA1区未见TUNEL阳性细胞;CCl4组海马CA1区可见大量细胞核呈棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,以1周CCl4组的阳性细胞数最多。结论注射CCl4后,大鼠脑海马CA1区p75的表达明显增强,Bax的表达也相应增强,凋亡的神经元明显增多。

神经生长因子受体(p75)在下颌骨骨折愈合中的表达及意义的研究

目的:探讨神经生长因子受体-p75在骨折愈合过程的表达及其对骨折愈合的影响。方法:本实验选用32只白兔随机分为8组(每组4只):对0、1、3、5、7、14、21、28d组。制作右下颌骨骨折模型,立即行钛板固定。术后实验组动物分别在1、3、5、7、14、21、28d处死。切取下颌骨脱钙后制作骨组织切片,分别行苏木精-伊红染色,NGFR-p75的免疫组化染色。结果:NGFR-p75在未骨折组仅仅弱阳性表达,而在骨折愈合过程中表达阳性,5～7d达到高峰,到21d与对照组比较无显著性差异。结论:NGFR-p75在骨折的愈合过程中,通过与NGF的结合,调节骨细胞的活性,对于骨折愈合过程中的修复重建起到重要作用。

肠间质细胞和神经生长因子受体及一氧化氮合酶在先天性巨结肠的分布及意义

目的:探讨肠间质细胞(ICC)、神经生长因子受体(NGFR)及一氧化氮合酶(NOS)与先天性巨结肠(HD)发病的关系.方法:应用c-kit及NGFR免疫组化法和NADPH黄递酶组化法观察10例HD患者病变结肠及8例对照组结肠ICC,NGFR及NOS的分布.结果:ICC密布于对照组结肠环肌浅表层及肌间神经丛周围并相互交织成网状结构,肠壁内含丰富的NGFR及NOS阳性神经节细胞和神经纤维.HD病变肠壁内ICC数量减少、网状结构破坏,缺乏NGFR及NOS阳性神经节细胞和神经纤维.结论:ICC,NGFR及NOS的异常分布可能与HD无神经节细胞结肠的舒张功能障碍有关.

神经生长因子受体阳性的人食管鳞癌细胞的分选及其干细胞特性

目的应用免疫磁珠分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法分选人食管鳞癌细胞(esophagealsquamous carcinoma cell,ESCC)中的神经生长因子受体(nerve growth factor receptor,NGFR)阳性细胞,并对其肿瘤干细胞样特征进行研究。方法采用MACS分选人ESCC中的NGFR阳性细胞。通过流式细胞仪法测定分选细胞的纯度及细胞周期分布,并计算细胞回收率;MTT法测定细胞数,绘制生长曲线并计算细胞群体倍增时间;平板克隆实验测定平板克隆形成率;裸鼠接种成瘤实验测定体内致瘤性,从而鉴定NGFR阳性ESCC的干细胞特性。结果 NGFR阳性细胞约占肿瘤细胞的1.89%,经过磁珠分选后纯度显著提高,达89.94%,细胞回收率为19.83%。与未分选细胞相比,分选后NGFR阳性细胞的增殖速度明显提高,生长曲线左移,细胞倍增时间缩短[(25.22±8.15)hvs.(47.41±12.69)h,P=0.01],平板克隆形成率显著增加[(16.27±8.31)%vs.(1.22±0.35)%,P=0.00],处于活跃增殖期S、G2、M期的细胞显著增加(72.7%vs.18.8%);裸鼠皮下接种的转移瘤形成率增加(8/10vs.1/10),转移瘤重量显著增加[(0.72±0.53)gvs.(0.16±0.26)g,P=0.00]。结论应用MACS技术能有效分选出人ESCC中的NGFR阳性细胞,其具有肿瘤干细胞特性。

神经生长因子受体对神经母细胞瘤血管生成作用的研究(英文)

目的 神经生长因子受体 (TrkA)基因是神经母细胞瘤 (NB)良好预后的标识之一 ,其高表达不仅可以抑制NB增殖和诱导良性分化 ,对NB的血管生长可能有一定的影响。该实验探讨TrkA基因对NB血管生成的作用。方法 1 5只裸鼠随机分为对照组、空载体组和实验组 (每组 5只 )。利用脂质体转染法将TrkA基因和pBPSTR1空载体转入NBSY5Y细胞 ,分别命名为SY5Y TrkA及SY5Y Vec细胞 ,未转染细胞为SY5Y细胞。将SY5Y ,SY5Y Vec ,SY5Y TrkA细胞分别接种在对照组、空载体组和实验组裸鼠皮下 ,接种 5 0d后处死动物 ,切除肿瘤 ,测量肿瘤体积 ;用RT PCR及免疫组织化学技术检测肿瘤内血管内皮生长因子 (VEGF)的表达 ;计算微血管密度 (MVD)。结果 SY5Y TrkA细胞TrkA表达明显高于SY5Y Vec及SY5Y细胞组 (P <0 .0 1 ) ;实验组肿瘤终体积小于对照组及空载体组 (0 .39± 0 .0 2cm3 vs 1 .74± 0 .4 9cm3 ) ;(0 .39± 0 .0 2cm3 vs 1 .80± 0 .75cm3 ) ,差异有显著性 (均P <0 .0 1 ) ;实验组VEGFmRNA表达低于对照组及空载体组 (0 .1 6± 0 .0 9vs 1 .4 5± 0 .77) ;(0 .1 6± 0 .0 9vs 1 .35± 0 .71 ) ,差异有显著性 (均P <0 .0 1 ) ;实验组VEGF蛋白表达低于对照组及空载体组 (2 .0 0± 0 .6 0vs 5 .6 7± 0 .4 9) ;(2 .0 0± 0 .6

神经生长因子受体在子宫腺肌病中的表达及意义

目的了解神经生长因子受体(tyrosine kinase,TrkA)在子宫腺肌病痛经患者异位内膜、在位内膜中的表达情况。方法采用免疫组化抗生物素蛋白-过氧化物酶染色法(S-P法)检测子宫腺肌病痛经患者(研究组)20例异位内膜、在位内膜及对照组22例子宫肌瘤无痛经患者子宫内膜中神经生长因子受体的表达,并进行比较分析。结果 TrkA在研究组异位内膜及在位内膜中的表达差异无显著性意义(P>0.05),但二者TrkA的表达强度均显著高于对照组子宫内膜(P<0.01)。研究组异位内膜增殖期高于分泌期[(3.25±0.82)vs(1.93±0.94),P<0.05],研究组在位内膜及对照组内膜增殖期与分泌期比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组痛经程度与TrkA的表达呈正相关(r=0.539,P<0.05)。结论 TrkA在子宫腺肌病痛经患者异位内膜及在位内膜中广泛表达,可能在子宫腺肌病发病及痛经发生中起重要作用。

神经生长因子受体TrkA在喉癌中的表达及意义

目的:探讨神经生长因子受体TrkA在人喉鳞状细胞癌(喉癌)中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法,检测34例喉癌组织、11例癌旁黏膜、6例喉乳头状瘤及8例正常声带黏膜组织中TrkA的表达。结果:34例喉癌组织中TrkA受体蛋白均有阳性表达,喉癌、癌旁黏膜及喉乳头状瘤中TrkA的表达均高于正常声带黏膜;喉癌伴随颈部淋巴结转移的病例组中TrkA表达的强阳性率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:TrkA的高表达与喉癌的恶性进展及淋巴结转移有相关性,这为临床诊断及治疗喉癌提供了新的途径。

神经生长因子受体P75和P140trkA mRNA在寻常型银屑病患者皮损中的表达

目的 : 研究神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)受体P75和P14 0trkA在寻常型银屑病发病机制中的作用。方法 : 应用原位杂交技术检测了 33例寻常型银屑病患者 (18例为进展期 ,15例为静止期 )和 10例正常人皮肤组织中两受体 (P75和P14 0trkA)mRNA的表达情况。结果 : 与正常人皮肤比较 ,寻常型银屑病皮损及非皮损中P75和P14 0trkA受体mRNA的表达明显上调 ,且皮损中的表达明显高于非皮损区 (P <0 .0 1) ;进展期患者皮损与非皮损中P75和P14 0trkA受体mRNA的表达分别高于静止期患者的皮损与非皮损区 (P <0 .0 1)。结论

豚鼠形觉剥夺性近视视网膜组织中神经生长因子受体p75NTR和Caspase-3的表达

目的探讨豚鼠形觉剥夺性近视视网膜神经生长因子受体p75NTR、Caspase-3表达的变化。方法出生1周的豚鼠30只随机分为2组,正常组10只,实验组20只。实验组右眼为遮盖眼,通过单眼遮盖法建立豚鼠形觉剥夺性近视模型,左眼为自身对照眼,正常对照组取双侧眼球。检影验光检测屈光度,A超测量双眼眼轴长度。免疫组织化学法检测视网膜p75NTR与Caspase-3蛋白的表达,RT-PCR检测视网膜p75NTR mRNA的变化,TUNEL法检测视网膜神经细胞凋亡。结果实验结束,遮盖眼屈光度加深、眼轴长度延长,可见凋亡细胞核。正常对照眼与自身对照眼屈光度与眼轴长度无明显变化,视网膜外核层及内核层几乎无p75NTR、Caspase-3阳性染色,无凋亡细胞。遮盖眼视网膜可见p75NTR、Caspase-3阳性表达、p75NTR mRNA增加和凋亡细胞。结论形觉剥夺性近视视网膜p75NTR和Caspase-3的表达增加可能与视网膜神经细胞凋亡有关。

实验性牙移动三叉神经节内神经生长因子受体mRNA的改变

目的:观察实验性牙移动时,NGF受体-TrkA mRNA在三叉神经节内的改变,方法:采用RT-PCR方法研究实验性牙移动后,三叉神经节内TrkA mRNA表达的改变。结果:实验性牙移动后6 h,实验侧TrkA mRNA的表达开始增加;24 h、3 d,1周实验组三叉神经节内TrkA mRNA的表达强于对照组;2周组,实验侧TrkA mRNA的表达恢复至正常水平。结论:实验性牙移动时,三叉神经节内TrkA的表达升高。

Neurturin和神经生长因子对体外培养的神经生长因子受体阳性神经元生长发育的影响

目的探讨Neurturin(NTN)、神经生长因子(NGF)对新生大鼠基底前脑胆碱能神经元生长发育的影响。方法用免疫组化结合图象分析技术观察Neurturin和NGF对培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育的作用。结果培养4d时,NTN组的NGF-R阳性神经元细胞数目、突起数、胞体面积和最长突起长度均与对照组有显著性差异(P<0.05),NGF+NTN组各项指标均优于NGF组或NTN组(P<0.05);培养8d时,NTN组除突起数目外其他各项指标均与对照组无显著性差异(P>0.05),NGF+NTN组各项指标仍然均优于NGF组或NTN组(P<0.05);NTN组NGF-R阳性神经元突起数多于NGF组(P<0.05)。结论Neurturin对体外培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育有营养作用,但作用时间较短,而且增加突起数的作用较NGF强;Neurturin和NGF的联合作用较单独使用Neurturin或NGF为好。

实验性牙移动过程中三叉神经节内神经生长因子受体TrkA的改变

目的观察实验性牙移动时,神经生长因子受体TrkA在三叉神经节内的改变。方法采用免疫荧光方法观察大鼠实验性牙移动后,三叉神经节内TrkA免疫阳性细胞的改变。结果实验性牙移动加力24 h组3、d组、1周组,实验侧三叉神经节内TrkA免疫阳性神经元较对侧增多;2周组实验侧三叉神经节TrkA免疫阳性神经元与对照组相比差异无显著性。结论实验性牙移动时,实验侧三叉神经节内TrkA免疫阳性神经元增多。

神经生长因子受体在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的探讨神经生长因子受体p75NRT（NGFR／p75NRTJ在涎腺腺样囊性癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测49例涎腺腺样囊性癌中NGFR／p75NRT的表达情况。结果49例涎腺腺样囊性癌中，NGFR／p75NRT阳性表达率为653％（32／49oNGFR／p75NRT在涎腺腺样囊性癌的表达与患者性别、肿瘤部位、原发灶分期及病理分型无相关性。未见神经侵犯现象16例，有神经侵犯现象33例，两者间NGFR／p75NRT阳性表达率的差异存在统计学意义（P〈0．05）。结论神经生长因子受体与涎腺腺样囊性癌的神经侵袭性显著相关，而与肿瘤原发灶分期、病理类型无关。

缺氧下神经生长因子受体p75在膀胱癌细胞中表达的变化及生物学特点

目的:探讨缺氧条件下神经生长因子受体(p75 NGFR)在不同组织来源膀胱癌细胞株中表达的变化及生物学特性的变化。方法:选取不同膀胱癌组织来源的鳞癌细胞株SCaBER和中分化的移行细胞癌细胞株5637。采用免疫荧光细胞化学染色及RT-PCR检测常氧和缺氧24、48、72 h 2个膀胱癌细胞系中p75 NGFR蛋白和mRNA的表达情况,流式细胞术检测缺氧1、3、5、7 d膀胱癌细胞凋亡情况,MTT法检测丝裂霉素(MMC)处理24、48、72 h对缺氧条件下膀胱癌细胞的抑制率的影响。结果:p75 NGFR蛋白及mRNA表达在2个细胞系缺氧24、48 h有所下降,但与常氧组相比差异无统计学意义(P>0.05);在72 h有显著降低,与其余各组相比差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱癌SCaBER、5637细胞在缺氧第3天开始凋亡率低于常氧组(P<0.05);缺氧48、72 h后MMC对膀胱癌细胞的抑制率低于常氧组(P<0.05)。结论:缺氧条件下,p75 NGFR在膀胱癌细胞的表达随时间逐渐降低,膀胱癌细胞的凋亡率降低,MMC对膀胱癌细胞的抑制率下降。

神经生长因子受体在先天性胆总管囊肿表达的意义

目的 :探讨神经生长因子受体 (NGFR)在先天性胆总管囊肿 (CCC)的分布情况及其意义。方法 :应用免疫组化方法对 18例CCC患儿及 9例对照组的胆总管进行检测。结果 :丰富的NGFR染色阳性神经纤维分布于正常胆总管外膜下 ,神经节细胞表现为NGFR染色强阳性 ,先天性胆总管囊肿狭窄段及上段NGFR染色阳性纤维明显减少。结论 :NGFR在先天性胆总管囊肿的异常分布可能与CCC的发病机理有关。

大鼠心肌梗死后神经生长因子受体的表达

目的:观察大鼠心肌梗死(MI)后不同时间点(1 d、7 d、30 d)神经生长因子(NGF)受体的表达情况。方法:采用开胸结扎冠状动脉法建立大鼠MI模型,在术后1 d、7 d、30 d处死动物,取出心脏,假手术大鼠(只开胸不结扎)作为对照研究。分别用实时定量PCR方法及Western blot方法检测梗死边缘区心肌中高亲和性受体酪氨酸激酶A(Trk A)和低亲和力神经受体P75(P75NTR)mRNA及蛋白的表达。结果:与对照组相比,MI后1 d,7 d,30 d,P75NTR mRNA及蛋白表达都没有明显差异,Trk A mRNA及蛋白表达在MI后7 d及30 d较对照组明显下降(P<0.05),而且呈动态下降趋势。结论:大鼠MI后心脏NGF受体Trk A和P75NTR的表达发生了变化,P75NTR表达程度在NGF介导的MI后交感神经增生中不起决定作用。

神经生长因子受体p75NTR对肝癌细胞凋亡的影响及其关键功能域

目的了解神经生长因子(nerve growth factor,NGF)受体p75NTR在肝癌组织和肝癌细胞株HepG2中的表达,探讨p75NTR对肝癌细胞凋亡的影响及其关键功能域。方法收集2006年9月至2008年4月于华中科技大学同济医学院附属同济医院行手术切除患者的肝癌组织标本及对应的癌旁组织标本共26对,应用免疫组织化学法检测trkA和p75NTR在肝癌组织和癌旁组织中的表达。应用Western blot检测NGF在肝癌细胞株HepG2和人胚胎肝细胞株L02中的表达。p75NTR组通过脂质体将p75NTR质粒转染入HepG2细胞中,空载体组将pcDNA3.1空载体转染HepG2细胞,空白对照组为未处理的HepG2细胞。采用Western blot和免疫荧光法检测各组p75NTR的表达。应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)构建p75NTR肿瘤坏死因子2受体相关因子结构域(tumor necrosis factor 2 receptor associated factor domain,TRAF)、突触后密度蛋白结合结构域(postsynaptic density protein domain,PSD)和Ⅱ型死亡结构域(typeⅡdeathdomain,T2DD)突变质粒,转染入HepG2细胞中,应用流式细胞术检测细胞凋亡,采用方差分析和LSD-t检验比较不同功能域点突变对HepG2细胞凋亡的影响。结果免疫组织化学检测表明TrkA和p75NTR在26对肝癌组织和癌旁组织中均未见明显表达。Westernblot结果表明,NGF在HepG2细胞中的相对表达量为0.749±0.302,显著高于L02细胞的0.452±0.290,差异有统计学意义(t=7.421,P=0.037)。p75NTR质粒转染入HepG2细胞株后,应用Western blot和免疫荧光进行验证,均可见p75NTR高表达,而空载体组和空白对照组未见明显表达。流式细胞术检测表明,p75NTR组、空载体组和空白对照组细胞凋亡率分别为(25.3±3.6)%、(3.2±0.7)%、(3.0±0.8)%,差异有统计学意义(F=21.740,P <0.001),其中p75NTR组显著高于空载体组和空白对照组(t=25.230、23.156,P均<0.001),空载体组和空白对照组差异无统计学意义(t=0.417,P=0.692)。进行p75NTR质粒功能域突变后,空白对照组、空载体组、p75NTR组、TRAF组、T2DD组和PSD组的HepG2细胞凋亡率分别为(3.1%±0.8)%、(3.5%±0.6)%、(25.8%±3.3)%、(24.8%±4.1)%、(4.4±0.9)%、(23.4%±3.3)%,差异有统计学意义(F=47.794,P <0.001),其中T2DD组Hep G2细胞凋亡率降至与空载体组一致(t=-0.386,P=0.708);而TRAF组和PSD组HepG2细胞凋亡率与p75NTR组接近(t=0.429、0.987,P=0.677、0.347)。结论 p75NTR在肝癌组织及HepG2细胞中无明显表达,过表达p75NTR可促进肝癌细胞的凋亡,提示p75NTR在肝癌细胞中发挥肿瘤抑制因子的作用,T2DD是其关键功能域。

皮肤神经生长因子受体与银屑病

对神经生长因子 (NGF)的生物学作用 ,以及NGF的两种受体 ,即高亲和性P14 0受体和低亲和性P75受体的性质、生物学作用 ,以及它们与NGF的相互作用和在皮肤病尤其银屑病的发生和发展中的作用进行了综述。

神经生长因子受体与泌乳素垂体腺瘤生物学特性的关系研究

目的:探讨泌乳素垂体腺瘤(PRL瘤)表达神经生长因子受体(NGFR)与其生物学特性的关系。方法选取2008年2月~2013年10月我院收治的82例PRL瘤患者作为研究对象,应用免疫组化法检测上述研究对象p75-NGFR的表达情况,分析PRL瘤表达p75-NGFR与患者性别、血清泌乳素水平、肿瘤大小、侵袭性的关系。结果①82例PRL瘤患者,32例p75-NGFR表达阳性,阳性率为39.0%。②男性组与女性组p75-NGFR表达阳性率、平均光密度值(ALD)相比差异无统计学意义(P>0.05);血清泌乳素≤300 ng/ml组p75-NGFR表达阳性率、ALD显著高于血清泌乳素>300 ng/ml组(P<0.05);肿瘤直径≤10mm组p75-NGFR表达阳性率、ALD显著高于肿瘤直径>10mm组(P<0.05);非侵袭组p75-NGFR表达阳性率、ALD显著高于侵袭组(P<0.05)。结论 PRL瘤组表达p75-NGFR与患者血清泌乳素水平、肿瘤大小及侵袭性等因素有关。