基于RhoA/ROCK通路探讨电针心包经穴对急性脑缺血大鼠神经轴突生长抑制因子的影响

目的基于RhoA/ROCK通路观察电针心包经穴对脑缺血大鼠的调控作用,探讨其对急性脑缺血后神经修复的作用机制。方法将90只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、心包经组、肺经组,除空白组和假手术组外,采用颈外动脉插入线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功后次日,心包经组、肺经组予电针治疗,分别于电针7、14、21 d后取材。HE染色观察梗死区脑组织病理变化,ELISA检测血清Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)Ⅱ含量,免疫组化检测梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡ表达,RT-qPCR和Western blot检测梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达。结果与空白组、假手术组同一时点比较,模型组大鼠梗死区脑组织神经细胞数量减少,细胞核固缩,各时点血清RhoA、ROCKⅡ含量及梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01);与模型组同一时点比较,心包经组大鼠梗死区脑组织神经细胞数量增加,形态结构改善,除7 d血清ROCKⅡ含量外,各时点血清RhoA、ROCKⅡ含量及梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05),且心包经组作用优于肺经组(P<0.01,P<0.05)。结论电针心包经穴可下调急性脑缺血大鼠神经轴突生长抑制因子表达,其机制可能与抑制RhoA/ROCK通路相关。

G蛋白Rab3a协同神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元的生长

为了研究G蛋白Rab3a与神经生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF ,原称金属硫蛋白 3,MT 3)相互作用对神经元细胞生长的影响 ,以嗜铬细胞瘤株 (pheochromocytoma)PC1 2充当神经元模型 .将hMT 3(humanMT 3)和Rab3a基因分别克隆至真核表达载体pFlag CMV 2和pSV HA中 ,质粒共同转染PC1 2细胞 ,观察转染后细胞的生长状态 .以共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a的细胞组作为对照 ,验证hMT 3与Rab3a相互作用对PC1 2影响的特异性 .结果发现 ,共转染pFlag CMV 2 hMT 3和pSV HA Rab3a的PC1 2细胞生长明显受到抑制 ,细胞生长抑制率与GIF在脑提取物存在F的神经元生长抑制作用接近 ,但转染两基因中的任何单个基因以及共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a对PC1 2细胞生长无影响 .进一步构建重组表达质粒pGEX 4T 1 Rab3a和pGEX 4T 1 hMT 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析、凝血酶酶切和SephacrylS 1 0 0纯化 ,得到纯度 95 %以上的Rab3a和hMT 3蛋白 .体外细胞生物学活性检测表明 ,表达的Rab3a蛋白与重组hMT 3蛋白共培养PC1 2 ,对细胞的生长产生了明显的特异性协同抑制作用 。

神经生长抑制因子(GIF)和小分子G蛋白Rab3a在大鼠脑组织中的定位研究

神经生长抑制因子(GIF)是金属硫蛋白家族中唯一具有明确生理功能的成员,在Alzheimer's症脑提取物存在下,对神经细胞的生长还具有抑制作用。Rab3a为小分子G蛋白的一种,通常以一种Ca2+依赖形式在调控神经递质释放的过程中起着十分重要的作用。目的:本文用免疫组织化学的方法验证二者间的相互作用。方法:利用酶标定和荧光标定的免疫组化方法,确定GIF和Rab3a蛋白在大鼠脑中的分布定位及其二者的共定位。结果:用ABCKit进行酶标定测得GIF和Rab3a在鼠大脑中的主要分布区域为脑皮层、海马等部位,用荧光标定的方法确定GIF和Rab3a两蛋白能在脑组织中共定位。结论:GIF和Rab3a广泛分布于脑组织中,且二者有共定位行为,为二者间存在相互作用提供了有力的证据。

神经生长抑制因子研究进展

神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 Ⅲ (metallothionein Ⅲ ,MT Ⅲ ) ,特异分布于中枢神经系统 (CNS) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白 .GIF一级序列、高级结构、金属结合特性类似于其他MTs,基因结构也与其他MTs高度同源 ,但表达调控途径相异 .GIF可能以其 β结构域的CPCP区 ,与脑组织提取物中的相关因子结合 ,进而表现其生物学功能 .

白介素-1α及与白介素-11、白血病抑制因子和胶质细胞源性神经生长因子联合诱导人神经干细胞向多巴胺神经元的分化

目的探讨细胞因子白介素-1α(IL-1α)及与白介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)联合应用对体外诱导人神经干细胞定向分化为多巴胺神经元的影响。方法采用无血清培养技术和单细胞克隆技术、免疫荧光双标技术。结果对照组仅有极少量的神经干细胞分化为不成熟的多巴胺神经元;IL-1α组分化的多巴胺神经元较多,但细胞形态欠成熟;联合因子组分化的多巴胺神经元最多,细胞较为成熟。结论IL-1α具有诱导人神经干细胞向多巴胺神经元分化的作用,联合应用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF对人神经干细胞向成熟的多巴胺神经元分化具有协同作用。

针康法对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及缺血区碱性成纤维细胞生长因子、血管抑制素蛋白表达的影响

目的探讨针康法对局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损及缺血区碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)和血管抑制素(AS)蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将90只清洁健康级雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺治疗组、康复治疗组和针康治疗组,各组又分为3 d、7 d、14 d 3个亚组(n=6)。改良Longa法制备永久性脑缺血大鼠模型。模型组与假手术组不予任何治疗,针刺治疗组采用头穴丛刺疗法,康复治疗组采用跑台训练,针康治疗组采用针康法治疗。术后3 d、7 d、14 d采用改良神经功能缺损评分(m NSS)评估各实验组大鼠的神经功能,Western blotting法检测各实验组大鼠缺血半暗区b FGF和AS蛋白的表达。结果术后3 d、7 d、14 d,与模型组、针刺治疗组、康复治疗组比较,针康治疗组m NSS评分降低(P<0.05),b FGF蛋白表达升高(P<0.05),AS蛋白表达降低(P<0.05)。结论针康法能降低局灶性脑缺血大鼠神经功能缺损,其机制可能与上调b FGF蛋白表达、下调AS蛋白表达有关。

生长抑制因子(GIF)与G蛋白Rab3a直接相互作用

生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF) ,又称金属硫蛋白 3,为 6 8个氨基酸组成的脑特异性金属硫蛋白 ,具有广泛的生理功能 ;GIF可能与阿尔茨海默氏症 (Alzheimer s)病理相关 ,在Alzheimer s脑提取物存在下 ,还对神经细胞具有特异的生长抑制活性 .然而 ,对其发挥生长抑制作用的分子机制并不清楚 .运用酵母双杂交系统从人脑cDNA文库中筛选与GIF相互作用因子 ,从 4 1× 10 6个人脑cDNA文库转化子中 ,首次筛选到Ras家族G蛋白Rab3aC端 ,包含 87个氨基酸的片段能与GIF相互作用 ;用PCR自人胎盘总cDNA中获得包含完整Rab3a编码序列的cDNA ;通过酵母双杂交实验表明 ,全长Rab3a蛋白亦能与GIF相互作用 .免疫共沉淀和蛋白质印迹实验进一步验证了GIF与Rab3a在哺乳动物细胞中可以相互作用 ;而且 ,Rab3a是以GTP结合形式(GTP Rab3a)

神经生长因子及抑制因子对鸡胚背根神经节轴突生长的影响

目的 研究神经生长因子 (NGF)和神经生长抑制因子 (NGI)对鸡胚背根神经节 (DRG)轴突生长的影响。方法 分离培养鸡胚 DRG,加入 NGF、NGI并观察它们对轴突生长的影响。结果 DRG轴突在含 NGF的培养液中迅速生长 ,加入 NGI后这种生长被抑制。结论 NGF可促进 DRG轴突的生长 ,而 NGI抑制它的生长。

表皮生长因子在引起神经胶质瘤细胞生长抑制过程中对其受体的影响

表皮生长因子在引起神经胶质瘤细胞生长抑制过程中对其受体的影响王欣，杨予安，蔡良琬，黄秉仁，陆国钧（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）表皮生长因子（ＥＧＦ）是一细胞生长调节因子，它的作用是通过其细胞表面受体（ＥＧＦｒ）介导的。ＥＧＦｒ基因...

表皮生长因子受体抑制剂在中枢神经系统损伤中的应用

表皮生长因子（ EGF）受体（ EGFR）自被发现以来，经过几十年的研究，其结构和功能已被较为全面的了解。目前临床常见的EGFR抑制剂（如西妥西单抗？、易瑞沙？等）主要被作为抗癌药物使用。但在2005年美国科学家Koprivica等［1］发现小分子EGFR抑制剂可以促进视神经损伤后节细胞轴突再生以后，EGFR抑制剂被逐步纳入到CNS损伤后的研究中，其有望成为一种治疗神经损伤的新药物。

神经生长因子和白血病抑制因子上调哮喘大鼠脾淋巴细胞IL-4、IL-5的表达

目的:探讨神经生长因子(NGF)、白血病抑制因子(LIF)对哮喘大鼠脾淋巴细胞IL-4、IL-5表达的影响。方法:16只大鼠随机分为对照组(A组)8只,哮喘组(B组)8只,采用卵蛋白和氢氧化铝腹腔内注射致敏,2周后给予1%卵蛋白雾化吸入激发哮喘。(1%卵蛋白/生理盐水)雾化吸入2周后,24h内体外分离培养对照组大鼠和哮喘组大鼠脾淋巴细胞;通过RT-PCR半定量法和ELISA法测定2组大鼠脾淋巴细胞表达Th2细胞因子IL-4、IL-5mRNA转录水平和分泌蛋白的基础水平,观察外源性NGF和LIF体外干预后淋巴细胞IL-4和IL-5表达随干预浓度的变化。结果:(1)哮喘组IL-4、IL-5mRNA表达及蛋白水平明显高于对照组(P<0.05);(2)在外源性不同浓度的NGF、LIF干预下,IL-4、IL-5mRNA和蛋白表达量分别比前一梯度低浓度干预组有显著升高(P<0.05),NGF、LIF上调IL-4、IL-5mRNA和蛋白表达呈浓度依赖性。结论:在哮喘大鼠中,NGF、LIF可能通过上调Th2类细胞因子IL-4、IL-5mRNA表达和蛋白分泌,参与促进和放大Th2类细胞因子免疫失衡效应。

脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B信号通路抑制剂K252a逆转丙戊酸引起的神经元过度生长

目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB）信号通路抑制剂K252a是否对丙戊酸引起的神经元过度生长有逆转作用。方法：用丙戊酸及K252a分别或共处理大鼠大脑皮层原代培养神经元，定量RT-PCR及免疫印迹检测BDNF/TrkB通路蛋白BDNF及TrkB的表达变化，同时以免疫荧光技术观测神经元形态变化。结果：丙戊酸处理后，显著增加神经元BDNF- mRNA的表达，TrkB mRNA的表达则未见明显变化；丙戊酸处理也导致BDNF蛋白表达上调。而用K252a处理后，神经元BDNF及TrkB表达与对照组相比，无明显变化。形态学结果显示，丙戊酸处理后，神经元过度生长，表现为神经元突起数目及总长度显著增加；而K252a处理后，丙戊酸引起的神经元突起过度生长受到明显抑制。结论：BDNF/TrkB通路抑制剂K252a可逆转丙戊酸导致的神经元过度生长。该结果为丙戊酸及K252a应用于临床治疗某些神经发育与退行性疾病如自闭症及阿尔茨海默病等提供了实验依据。

神经纤毛蛋白-1与膜相关转化生长因子-β共表达对调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨神经纤毛蛋白-1（Nrp-1）与膜相关转化生长因子-β（TGF-β）共表达对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）免疫抑制功能的影响。方法体外培养Balb/c小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞，在抗CD3/CD28和脂多糖（LPS）诱导下，给予不同浓度的抗Nrp-1抗体（Ab-Nrp-1）封闭24 h后收集细胞，采用流式细胞分析仪检测细胞表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达。分别将不同浓度Ab-Nrp-1封闭1 h后的Treg与小鼠正常CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养，观察抗CD3/CD28和LPS诱导下12、24和48 h后对CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖能力的影响。结果在抗CD3/CD28和LPS诱导下，Treg表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达率明显增加（均P＜0.05），Treg膜相关TGF-β表达随着Ab-Nrp-1浓度的增加逐渐降低，呈明显的浓度依赖性（P＜0.05）；正常Treg与CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养后，能显著抑制CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖功能（P＜0.05），而不同浓度Ab-Nrp-1处理能逆转抑制作用，其中5μg/ml已达最大效应（P＜0.05），且24 h后作用最强，具有明显的浓度-时间依赖性（P＜0.05）。结论 Treg通过膜相关TGF-β发挥免疫抑制功能，共表达Nrp-1能够明显增强其免疫抑制作用。

神经生长抑制因子Collapsin-1的致萎缩活性可被它的抗体所阻断

目的 制备鸡脑源性神经生长抑制因子Collapsin 1的抗体并检测它对Collapsin 1致萎缩活性的阻断作用。方法 PCR扩增并克隆表达整合了c myc表位的Collapsin 1全码序列 ,用所得的重组Collapsin 1免疫兔制备它的抗体。背根神经节 (DRG)培养物检测它们对生长抑制因子Col lapsin 1致萎缩活性的阻滞作用。 结果 Collapsin 1能导致DRG生长冠萎缩 ,这种致萎缩活性能被Collapsin 1的抗体所阻断。结论 所制备的抑制因子Collapsin 1的抗体具有阻断其抑制活性的作用。

视神经横断后生长抑制因子Nogo及其受体NgR mRNA表达的变化及意义

观察大鼠视神经横断后Nogo-A及其受体NgR mRNA表达的变化。将36只正常成年SD大鼠随机分为三组,视神经横断7d组、14d组和正常对照组,每组12只。分别提取视神经组织,使用实时荧光定量聚合酶链式反应法定量分析Nogo-A及NgR mRNA表达量的变化。实验结果显示,在大鼠的视神经组织中存在Nogo-A及其受体NgR基因的表达。与对照组相比,视神经横断7d后Nogo-A表达显著减少(P<0.05);视神经横断14d后,其表达较横断7d组显著增加(P<0.05),但仍明显低于对照组(P<0.05)。NgR在视神经横断7d后与对照组相比,表达显著减少(P<0.05),视神经横断14d后,其表达较横断7d组无显著差异(P>0.05)。视神经完全横断伤后Nogo-A mRNA表达先下降再升高,NgR mRNA表达下降并基本保持在同一水平。

人神经生长抑制因子的单克隆抗体制备及抗原决定簇的研究

神经生长抑制因子（ＦＩＦ）是一种特异存在于哺乳动物脑中的金鹰硫蛋白 （ＭＴ），又称ＭＴ－Ⅲ，具有特异神经细胞生长抑制效应．ＭＴ－Ⅲ与ＭＴ有７０％的序列 同源性，但ＭＴ却无此功能．在患ＡＤ症病人的大脑中，ＧＩＦ和ｍＲＮＡ的含量均显著降 低．为了进一步研究，ＭＴ－Ⅲ的结构与功能及与ＡＤ症的关系，制图示ＧＩＦ的单克隆抗 体，用ＥＬＩＳＡ方法研究了ＧＩＦ，α－结构域和β－结构域，Ｎ－末端六肽和Ｎ－末端＋肽分别 与ＧＩＦ的单克隆抗体的相互作用，并对单克隆抗体的抗原决定簇进行了分析．结果显示 了ＧＩＦ的抗原决定簇与其一定的空间构象有密切的关系．

中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫促进脑缺血后神经再生(英文)

目的为了澄清中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫对局部脑缺血神经再生的促进作用。方法经腓肠肌注射抗轴突生长抑制因子DNA疫苗免疫动物,每周一次,共6w;血清中检测出相关抗体后,采用永久性阻断大脑中动脉的方法制备左侧局部脑缺血模型,通过立体定向脑内注射生物素化葡聚糖胺(BDA)追踪皮质红核束的新生轴索。结果中风前接受抗轴突生长抑制因子DNA免疫,局部脑缺血后皮质红核束的代偿性新生轴索明显增多。结论中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫可提高永久性局部脑缺血后的神经再生。

髓磷脂相关性轴突生长抑制因子与中枢神经再生

中枢神经系统(CNS)损伤后的再生情况一直是人们比较关注的问题,近几年来,随着髓磷脂(Nogo)等的发现,人们越来越认识到中枢神经髓磷脂中的一些成分在轴突再生中发挥着重要的抑制作用,笔者将与髓磷脂相关的几种轴突生长抑制因子(Nogo,MAG,OMgp,NgR)以及它们对中枢神经轴突再生的抑制作用的研究进展情况作如下综述。

一种神经生长的抑制性因子——collapsin-1的提取和功能测定

目的 提取一种成年鸡脑源性的神经生长抑制因子—— collapsin- 1并测定其功能。方法 鸡脑膜粗提物通过数个离子交换柱和麦胚凝集素亲和柱 ,再经 SDS- PAGE电泳纯化 ,用背根神经节 (DRG)培养物检测其致萎缩活性。结果 成年鸡脑膜提取物具有导致背根神经节生长冠萎缩的活性 ;随纯度的增加 ,活性也增加。10 0 kd的蛋白质与致萎缩活性紧密相关。结论 collapsin- 1为一种成年鸡脑源性神经生长抑制因子。

白血病抑制因子及神经生长因子联合诱导大鼠肌源性干细胞向神经元样细胞分化

目的:探讨白血病抑制因子(LIF)和神经生长因子(NGF)联合诱导大鼠肌源性干细胞分化为神经细胞的可能性和条件。方法:从大鼠乳鼠骨骼肌中分离培养肌源性干细胞,LIF和NGF进行分化诱导,以MEM培养基同等条件培养作对照,相差显微镜下观察细胞形态变化。免疫组织化学显色观察神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达,测定细胞转化率。结果:肌源性干细胞经过LIF和NGF诱导12 h后,部分细胞分化,类似神经细胞;免疫组织化学显色观察神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白呈强阳性。结论:LIF和NGF联合应用能将肌源性干细胞诱导成神经元样细胞,为细胞移植治疗脊髓损伤提供一种高效种子细胞生产方法。