急性一氧化碳中毒致迟发性脑病大鼠胼胝体损伤及神经生长抑制因子A的表达

目的：研究急性一氧化碳（ carbon monoxide ， CO ）中毒致迟发性脑病（ delayed neuropsychologic sequelae ， DNS ）大鼠胼胝体的损伤及神经生长抑制因子 A （ neurite outgrowth inhibitor-A， Nogo-A）的表达情况。方法腹腔内分次注射CO气体造成DNS模型，于不同时间点取胼胝体。HE染色观察细胞形态，变色酸染色观察脱髓鞘改变，免疫组化检测观察Nogo-A蛋白表达，荧光定量聚合酶链式反应（ real time polymerase chain reaction ， RT-PCR）检测Nogo-A mRNA表达，电镜观察胼胝体超微结构变化。结果中毒组光镜下胼胝体出现脱髓鞘等变化，以造模成功后0 h变化较明显。免疫组化显示，Nogo-A在各时间点均高表达（P＜0．05）。 RT-PCR于造模成功后0、12、24 h高表达（P＜0．05），0 h为高峰，其后逐渐下降，第3天与对照组比较差异无统计学意义，中毒组第7天表达再次升高（P＜0．05）。电镜下，胼胝体出现相应改变。结论 CO中毒后大鼠胼胝体出现脱髓鞘损伤，且与Nogo-A表达相关。

神经生长抑制因子A的相关研究进展

近年来,中枢神经系统(central nervous system,CNS)损伤后的再生与修复一直备受关注,其与再生障碍和中枢系统的微环境中存在不利因素有关.神经生长抑制因子A(neunte outgrowth inhibitor A,Nogo-A)作为神经生长抑制因子(neurite outgrowth inhibitor,Nogo)家族的成员之一,在CNS可特异性地抑制轴突生长.本文将阐释Nogo-A及其受体NgR的基本结构和功能,及其在神经系统再生等方面的最新研究进展.

神经生长抑制因子A、高迁移率蛋白-1、Adropin蛋白对脑出血的诊断价值

目的分析神经生长抑制因子A(Nogo-A)、高迁移率蛋白-1(HMGB-1)、Adropin蛋白对脑出血的诊断价值。方法选取2018年5月-2020年5月浙江省温州市人民医院收治的脑出血患者51例为脑出血组,另选取同时期在该院体检的体检健康者50例为健康对照组,采用酶联免疫吸附法检测Nogo-A、HMGB-1、Adropin表达水平,分析Nogo-A、HMGB-1、Adropin水平对脑出血的诊断价值。结果与健康对照组相比,脑出血组Nogo-A、HMGB-1表达量较高,Adropin表达量较低,差异有统计学意义(P<0.05)。血清Nogo-A、HMGB-1、Adropin诊断脑出血的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.761(95%CI:0.883~1.00,P<0.01),0.844(95%CI:0.816~0.985,P<0.01),0.892(95%CI:0.869~0.984,P<0.01),三者联合诊断的AUC为0.944(95%CI:0.883~1.964,P<0.01)。结论Nogo-A、HMGB-1在脑出血患者血清中表达升高,Adropin蛋白在脑出血患者血清中表达降低,对脑出血具有一定的诊断价值,其中三项联合对脑出血的诊断价值较高。

神经生长抑制因子研究进展

神经生长抑制因子 (neuronalgrowthinhibitoryfactor,GIF)又名金属硫蛋白 Ⅲ (metallothionein Ⅲ ,MT Ⅲ ) ,特异分布于中枢神经系统 (CNS) ,是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白 .GIF一级序列、高级结构、金属结合特性类似于其他MTs,基因结构也与其他MTs高度同源 ,但表达调控途径相异 .GIF可能以其 β结构域的CPCP区 ,与脑组织提取物中的相关因子结合 ,进而表现其生物学功能 .

人神经生长抑制因子的单克隆抗体制备及抗原决定簇的研究

神经生长抑制因子（ＦＩＦ）是一种特异存在于哺乳动物脑中的金鹰硫蛋白 （ＭＴ），又称ＭＴ－Ⅲ，具有特异神经细胞生长抑制效应．ＭＴ－Ⅲ与ＭＴ有７０％的序列 同源性，但ＭＴ却无此功能．在患ＡＤ症病人的大脑中，ＧＩＦ和ｍＲＮＡ的含量均显著降 低．为了进一步研究，ＭＴ－Ⅲ的结构与功能及与ＡＤ症的关系，制图示ＧＩＦ的单克隆抗 体，用ＥＬＩＳＡ方法研究了ＧＩＦ，α－结构域和β－结构域，Ｎ－末端六肽和Ｎ－末端＋肽分别 与ＧＩＦ的单克隆抗体的相互作用，并对单克隆抗体的抗原决定簇进行了分析．结果显示 了ＧＩＦ的抗原决定簇与其一定的空间构象有密切的关系．

G蛋白Rab3a协同神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元的生长

为了研究G蛋白Rab3a与神经生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF ,原称金属硫蛋白 3,MT 3)相互作用对神经元细胞生长的影响 ,以嗜铬细胞瘤株 (pheochromocytoma)PC1 2充当神经元模型 .将hMT 3(humanMT 3)和Rab3a基因分别克隆至真核表达载体pFlag CMV 2和pSV HA中 ,质粒共同转染PC1 2细胞 ,观察转染后细胞的生长状态 .以共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a的细胞组作为对照 ,验证hMT 3与Rab3a相互作用对PC1 2影响的特异性 .结果发现 ,共转染pFlag CMV 2 hMT 3和pSV HA Rab3a的PC1 2细胞生长明显受到抑制 ,细胞生长抑制率与GIF在脑提取物存在F的神经元生长抑制作用接近 ,但转染两基因中的任何单个基因以及共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a对PC1 2细胞生长无影响 .进一步构建重组表达质粒pGEX 4T 1 Rab3a和pGEX 4T 1 hMT 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析、凝血酶酶切和SephacrylS 1 0 0纯化 ,得到纯度 95 %以上的Rab3a和hMT 3蛋白 .体外细胞生物学活性检测表明 ,表达的Rab3a蛋白与重组hMT 3蛋白共培养PC1 2 ,对细胞的生长产生了明显的特异性协同抑制作用 。

广西人群中神经突起生长抑制因子基因rs2968795G/A和rs10496040A/C多态性分析

目的:分析神经突起生长抑制因子(Nogo)基因rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点在广西人群中的多态性分布特点,并比较其在不同人群间的分布差异。方法:运用多重单碱基延伸法(SNaPshot)和DNA测序法检测323例广西人群的rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点基因型,并用统计学方法比较2个位点的基因型及等位基因频率在男性和女性之间以及不同人群中分布差异。结果:rs2968795G/A位点存在GG、GA、AA 3种基因型,分布频率为18.9%、46.1%、35.0%。此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男性和女性间差异无统计学意义。其基因型和等位基因与国际人类基因组单体型图计划(HapMap)公布的欧洲和非洲人群比较差异有统计学意义;rs10496040A/C存在AA、AC、CC3种基因型,分布频率为1.2%、16.4%、82.4%。此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男女之间差异无统计学意义。基因型和等位基因频率与欧洲、非洲和日本人群间差异均有统计学意义。结论:Nogo基因rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点基因多态性在不同人群间存在着不同程度差异。这种差异可能对研究其多态性和相关疾病的关系在不同人群间中的差异具有指导意义。

电针手厥阴心包经穴对脑缺血大鼠神经生长抑制因子及其受体表达的影响

目的观察电针手厥阴心包经穴对脑缺血后大鼠神经生长抑制因子及其受体表达的影响,探讨电针心包经穴对大鼠脑缺血后神经修复的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、心包经组和肺经组,每组18只。颈外动脉插入线栓法制作局灶性脑缺血模型。成模后第2日起电针干预30 min,每日1次,干预6 d休息1 d,分别于7、14、21 d进行取材,每个时间点6只。ELISA检测血清神经生长抑制因子(Nogo-A)含量,RT-qPCR检测脑梗死区Nogo-A及其受体NgR1的mRNA表达。结果与同一时间点正常组和假手术组比较,模型组大鼠血清Nogo-A含量及脑梗死区Nogo-A和NgR1 mRNA表达各时间点均明显升高(P<0.01);与同一时间点模型组比较,心包经组大鼠血清Nogo-A含量第21日及脑梗死区Nogo-A和NgR1 mRNA表达第7、21日明显降低(P<0.01),肺经组大鼠脑梗死区NgR1 mRNA表达第7日明显降低(P<0.05),NgR1 mRNA表达第14日明显升高(P<0.01);与同一时间点肺经组比较,心包经组大鼠血清Nogo-A含量第21日明显降低(P<0.05),脑梗死区Nogo-A和NgR1 mRNA表达各时间点明显降低(P<0.01)。结论电针心包经穴可促进脑缺血后神经修复,其机制与下调模型大鼠血清Nogo-A含量、抑制缺血侧脑组织Nogo-A和NgR1的mRNA表达相关。

基于RhoA/ROCK通路探讨电针心包经穴对急性脑缺血大鼠神经轴突生长抑制因子的影响

目的基于RhoA/ROCK通路观察电针心包经穴对脑缺血大鼠的调控作用,探讨其对急性脑缺血后神经修复的作用机制。方法将90只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、心包经组、肺经组,除空白组和假手术组外,采用颈外动脉插入线栓法建立大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功后次日,心包经组、肺经组予电针治疗,分别于电针7、14、21 d后取材。HE染色观察梗死区脑组织病理变化,ELISA检测血清Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)Ⅱ含量,免疫组化检测梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡ表达,RT-qPCR和Western blot检测梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达。结果与空白组、假手术组同一时点比较,模型组大鼠梗死区脑组织神经细胞数量减少,细胞核固缩,各时点血清RhoA、ROCKⅡ含量及梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.01);与模型组同一时点比较,心包经组大鼠梗死区脑组织神经细胞数量增加,形态结构改善,除7 d血清ROCKⅡ含量外,各时点血清RhoA、ROCKⅡ含量及梗死区脑组织RhoA、ROCKⅡmRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05),且心包经组作用优于肺经组(P<0.01,P<0.05)。结论电针心包经穴可下调急性脑缺血大鼠神经轴突生长抑制因子表达,其机制可能与抑制RhoA/ROCK通路相关。

神经生长抑制因子(GIF)和小分子G蛋白Rab3a在大鼠脑组织中的定位研究

神经生长抑制因子(GIF)是金属硫蛋白家族中唯一具有明确生理功能的成员,在Alzheimer's症脑提取物存在下,对神经细胞的生长还具有抑制作用。Rab3a为小分子G蛋白的一种,通常以一种Ca2+依赖形式在调控神经递质释放的过程中起着十分重要的作用。目的:本文用免疫组织化学的方法验证二者间的相互作用。方法:利用酶标定和荧光标定的免疫组化方法,确定GIF和Rab3a蛋白在大鼠脑中的分布定位及其二者的共定位。结果:用ABCKit进行酶标定测得GIF和Rab3a在鼠大脑中的主要分布区域为脑皮层、海马等部位,用荧光标定的方法确定GIF和Rab3a两蛋白能在脑组织中共定位。结论:GIF和Rab3a广泛分布于脑组织中,且二者有共定位行为,为二者间存在相互作用提供了有力的证据。

电针心包经穴对急性脑缺血大鼠脑组织神经生长抑制信号通路关键分子基因表达的影响

目的探究电针心包经穴对大鼠脑缺血后神经修复的作用机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、心包经组、肺经组,每组6只。采用颈外动脉插入线栓法制造局灶性大脑中动脉缺血模型。大陵、内关、曲泽、天泉四穴为心包经组取穴,太渊、列缺、尺泽、天府四穴为肺经组取穴,每日电针30 min,连续3 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠缺血脑组织病理形态学改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中神经生长抑制因子(Nogo-A),Ras同源基因家族成员A(RhoA),Rho激酶Ⅱ(ROCKⅡ)含量,实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测脑梗死区Nogo-A、NgR1、RhoA、和ROCKⅡmRNA的表达。结果造模后模型组大鼠脑组织中出现大片梗死灶,神经细胞大片消失或细胞皱缩;电针心包经和肺经穴能有效改善脑组织结构和细胞形态,且心包经组优于肺经组。与正常组、假手术组相比,模型组大鼠血清中Nogo-A、RhoA、RockⅡ含量均上升(P<0.01),缺血侧脑组织中Nogo-A、NgR1、RhoA及RockⅡmRNA表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,心包经组血清中Nogo-A、RhoA含量和脑组织中Nogo-A、NgR1、RhoA mRNA的表达均下降(P<0.05),肺经组脑组织中NgR1、RhoA mRNA的表达降低(P<0.01);与肺经组相比,心包经组血清中Nogo-A含量下降(P<0.01),脑组织中NgR1、RhoA mRNA的表达下降(P<0.01)。结论电针心包经穴能改善脑组织结构和细胞形态并通过下调神经生长抑制信号通路Nogo-A/NgR1-RhoA/RockⅡ中关键分子基因的表达促进脑缺血后神经功能修复。

猪脑类神经肽抑制因子的分离纯化和抗小鼠癫痫作用

本实验室以猪脑为原料,利用超滤,凝胶过滤层析和反相高效液相色谱等分离纯化方法,分离出一种小分子类神经肽抑制因子(Neuropeptide-like inhibitor,NPI),并进行生物活性和理化性质的初步研究。以MTT比色法检测NPI对噬铬细胞瘤(pheochromocytoma)PC12细胞生长的影响;建立戊四氮致小鼠急性癫痫模型,检测NPI体内活性;通过液相色谱法鉴定NPI相对分子量和氨基酸组成。结果表明NPI对PC12细胞生长具有抑制作用,并呈量效关系。动物模型实验显示小鼠初次惊厥时间明显延长(P<0.01),惊厥程度及死亡率明显下降(P<0.05),表明NPI具有体内抗惊厥活性。

法舒地尔通过抑制NogoA/NgR信号通路减轻H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞凋亡并增强突触可塑性

目的探讨法舒地尔(Fasudil)对H(2)O_(2)诱导的SY5Y人神经母细胞瘤细胞凋亡和突触可塑性的影响及其机制。方法细胞分为PBS对照组、250μmol/L H(2)O_(2)处理组和250μmol/L H(2)O_(2)联合15μg/mL Fasudil处理组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫荧光细胞化学染色检测神经突生长抑制因子A(NogoA)、NogoA受体(NgR)和突触小泡蛋白(Syn)的表达,Western blot法检测NogoA、NgR、p75神经营养因子受体(p75NTR)和含富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白结构域的Nogo相互作用蛋白1(LINGO-1)、Syn和突触后致密区蛋白95(PSD-95)的表达。结果与PBS组比较,H(2)O_(2)组细胞活性降低,细胞凋亡率升高,Fasudil处理可显著提高细胞活性,降低细胞凋亡率。与H(2)O_(2)模型组比较,Fasudil处理能使Syn和PSD-95的表达增加。与PBS组比较,H(2)O_(2)组NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达明显增加,而Fasudil处理可以抑制NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达。结论Fasudil可能通过抑制NogoA/NgR信号通路的激活,从而减轻H(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡以及增强突触的可塑性。

电针心包经穴对急性脑缺血大鼠血清及脑组织神经生长因子和神经生长抑制因子的影响

目的:探讨电针手厥阴心包经穴对急性脑缺血大鼠神经修复的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、心包经组、肺经组,每组10只。采用颈外动脉插入线栓法复制局灶性脑缺血模型。心包经组取"天泉""曲泽""内关""大陵"穴,肺经组取"天府""尺泽""列缺""太渊"穴,于造模后6、24、48、72h进行电针治疗,每次30min。用酶联免疫吸附法检测血清神经生长因子(NGF)和神经生长抑制因子(Nogo-A)含量,免疫组化法检测脑梗死区NGF和Nogo-A的表达。结果:与正常组、假手术组比较,模型组能上调NGF在血清中的含量及脑梗死区的表达(P<0.01),心包经组、肺经组较模型组进一步上调(P<0.01),心包经组提高NGF在血清的含量、脑梗死区表达的作用优于肺经组(P<0.01)。与正常组、假手术组比较,模型组血清Nogo-A含量增多(P<0.01),心包经组、肺经组少于模型组(P<0.01),心包经组降低血清Nogo-A含量作用优于肺经组(P<0.01);Nogo-A在脑梗死区的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针可促进血清、脑组织中NGF的表达,并降低血清Nogo-A的含量,且心包经组作用优于肺经组,对急性脑缺血后神经修复具有一定促进作用。

Lingo-1研究进展及其对神经系统疾病的相关影响

中枢神经系统(central nervous system,CNS)的损伤后修复是目前神经康复研究的重点和难点之一,但迄今为止尚缺乏针对损伤后修复的有效手段。富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的Nogo受体作用蛋白-1(leucine rich repeat and Ig domain containing,nogo receptor interacting protein-1,Lingo-1)是一种最近发现的在抑制轴突再生、抑制少突胶质细胞分化及髓鞘形成、抑制神经元存活等过程中发挥重要作用的蛋白,对其进行深入研究有可能为神经损伤后的再生治疗提供了新的途径。本文就Lingo-1及其对相关神经系统疾病的影响的研究进展进行综述。

神经生长抑制因子在体外可抑制嗜铬细胞瘤株PC12

神经生长抑制因子(GIF)又名金属硫蛋白-Ⅲ, 是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白. 采用MTT还原测定法测定了重组GIF对嗜铬细胞瘤株PC12和成神经细胞瘤株SY5Y生长的影响: 重组GIF在体外可抑制PC12的生长; 在浓度为100 mg/L时, 对PC12的抑制率约为25%; 而当浓度为300 mg/L时, 对PC12的抑制率达到约50%. 表明PC12可作为神经元模型来测定GIF的神经元生长抑制活性. GIF在体外不能抑制常用作神经细胞瘤株模型的SY5Y, 表明GIF并不具有广谱的抑制神经细胞瘤株的作用; GIF抑制PC12可能就是针对它所具有的胆碱能神经元的某些特性. 这对于揭示GIF的神经元生长抑制活性的作用机制有着重要意义.