基于NRG-1/ErbB信号通路探讨黄芪多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的:探讨黄芪多糖通过神经调节因子-1(NRG-1)/表皮生长因子受体(ErbB)信号通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响。方法:无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠70只,随机分为对照组、模型组、黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组及阳性对照组,每组14只。对照组进行假手术,其余各组采用左前降支结扎建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。造模前30 d,模型组、对照组和阳性对照组大鼠分别按1 mL/kg尾静脉注射生理盐水,术后每日1次注射;黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组分别按1 mL/kg尾静脉注射20、40 mg/mL黄芪多糖溶液,术后每日1次注射。造模前30 min,阳性对照组给予4μg/kg NRG-1溶液静脉注射,术后每日1次注射。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠血清心肌酶水平、心肌组织细胞凋亡指数、心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和NRG-1、磷酸化ErbB2(p-ErbB2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平。结果:治疗后,与模型组比较,黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组及阳性对照组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌钙蛋白T(cTnT)水平降低,心肌组织细胞凋亡指数降低,心肌组织Caspase-3阳性表达率降低,心肌组织NRG-1、p-ErbB2、Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且黄芪多糖高浓度组以上指标的变化均优于黄芪多糖低浓度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪多糖可减轻心肌缺血再灌注损伤大鼠的心肌损伤,抑制心肌细胞凋亡,其作用可能与激活NRG-1/ErbB信号通路,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达有关。

神经调节蛋白1/表皮生长因子受体4信号通路的激活加强了七氟醚对心肌缺血/再灌注损伤大鼠的心肌保护作用

目的研究七氟醚预处理中神经调节蛋白1(NRG1)/表皮生长因子受体4(Erb B4)信号通路的激活对大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法按照体重将SD大鼠随机分为5组,每组10只:假手术组、模型组、七氟醚组、七氟醚+NRG1类似物组、七氟醚+NRG1类似物+AG1478组。其中,40只大鼠在给药后制备I/R模型,30只给予2.4%七氟醚麻醉处理,20只腹腔注射NRG1类似物,10只腹腔注射NRG1类似物+AG1478。用缺口末端标记法检测心肌凋亡情况;以免疫印迹检测Erb B4/p-Erb B4蛋白表达;以酶联免疫吸附法检测NRG1表达。结果假手术组、模型组、七氟醚组、七氟醚+NRG1类似物组、七氟醚+NRG1类似物+AG1478组的细胞凋亡指数分别为1.10±0.03,32.82±6.43,12.38±2.25,6.23±1.88,14.87±2.28。这5组的NRG1含量分别为178.3±20.8,92.3±16.5,120.4±18.2,151.6±20.7,149.1±18.7;这5组的p-Erb B4/Erb B4表达水平分别为0.81±0.08,0.42±0.05,0.60±0.08,0.72±0.07,0.61±0.09。上述指标:模型组与假手术组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);3个给药组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论激活NRG1/Erb B4信号通路进一步加强了七氟醚对心肌的保护作用。

下调lncRNA MCM3AP-AS1通过调控miR-205-5p/NEGR1轴抑制动脉粥样硬化的机制

目的探讨lncRNA MCM3AP-AS1对氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用10 mg/L OX-LDL诱导HUVEC细胞48 h,qRT-聚合酶链反应(PCR)检测细胞中MCM3AP-AS1、miR-205-5p和神经生长调节因子(NEGR)1 mRNA表达水平,Western印迹检测NEGR1蛋白表达。分别转染MCM3AP-AS1小干扰RNA、NEGR1小干扰RNA、miR-205-5p模拟物(mimics)或共转染MCM3AP-AS1小干扰RNA与NEGR1过表达载体至HUVEC细胞,然后再用10 mg/L OX-LDL干预48 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1和活化的半胱天冬酶(Cleaved-caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证MCM3AP-AS1与miR-205-5p、miR-205-5p与NEGR1的调控关系。结果OX-LDL诱导HUVEC细胞后,细胞中MCM3AP-AS1水平、NEGR1 mRNA和蛋白水平明显升高,miR-205-5p水平明显降低(均P<0.05)。下调MCM3AP-AS1、下调NEGR1或上调miR-205-5p均提高了OX-LDL诱导的HUVEC细胞存活率和CyclinD1蛋白表达,而降低了细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3蛋白表达(均P<0.05)。MCM3AP-AS1靶向负调空miR-205-5p表达,NEGR1是miR-205-5p的靶基因。上调NEGR1逆转了下调MCM3AP-AS1对OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖和凋亡的影响。结论下调MCM3AP-AS1可能通过调控miR-205-5p/NEGR1轴促进OX-LDL诱导的HUVEC细胞增殖,并降低细胞凋亡。