常用神经示踪剂及其示踪特点

丰富的神经示踪技术极大的促进了神经解剖学的发展,为神经生物学的各种研究提供了良好基础,在此,我们概述了常用神经示踪剂及其示踪特点,重点介绍了各种荧光染料和植物凝集素IB4的示踪特点。

犬自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经荧光金逆行示踪标记实验

目的采用荧光金逆行示踪方法来评价自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经修复狗坐骨神经缺损,再生神经的物质运输功能。方法在自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接狗坐骨神经5cm缺损,术后6个月,将5%荧光金(Fluoro-Gold,FG)注射入桥接侧的远段坐骨神经干内,2周后取相应的脊髓节段和背根节进行冰冻切片,并在激光共聚焦显微镜下观察结果,并进行了计量分析。结果桥接侧相应脊髓灰质前角和背根神经节切片中观察到被FG逆行标记的神经元。结论再生神经修复了缺损,恢复了神经干的连续性,再生神经具有良好的物质运输功能。

两种荧光示踪剂Fluoro-Gold和Fluoro-Ruby与组织透明技术兼容性研究

目的测试两种传统示踪剂Fluoro-Gold(FG)和Fluoro-Ruby(FR)与组织透明技术(3DISCO)的兼容性,并完成立体成像。方法通过切片透明实验评价FG和FR与一种组织透明技术(3DISCO)的兼容性;用FG和FR标记脑和脊髓后,对大鼠全脑和脊髓透明,用光学设备显示标记传导束的三维成像。结果 Fluoro-Gold和Fluoro-Ruby应用3DISCO透明后,信号无衰减,可以完成科研实验要求;对大鼠脑和脊髓组织透明后,应用双光子显微镜观察,可见FG更清晰地展示了神经元及树突,而FR可清晰地显示长距离的轴突。FG与FR表现出了不同的成像结果。结论 Fluoro-Gold和Fluoro-Ruby与3DISCO兼容性较好。通过组织透明技术与光学设备相结合,可以实现组织内部的立体成像。

辣根过氧化物酶逆行示踪评价组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损

背景:作者前期制备了无细胞神经移植物,并将骨髓间充质干细胞种植其内,成功构建了组织工程人工神经。目的:应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术,评价无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建的组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损后对感觉神经元的保护作用。方法:成年清洁级健康雄性SD大鼠,随机分成3组:实验组采用复合骨髓间充质干细胞的无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损;空白对照组采用无细胞神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损;自体神经对照组采用自体神经移植桥接大鼠坐骨神经缺损。移植后12周应用辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术,对脊髓后根神经节感觉神经元的再生进行评价。结果与结论:移植12周后根神经节感觉神经元再生评价结果提示,实验组与自体神经对照组相比差异无显著性意义,优于空白对照组;足底皮肤S-100免疫组织化学染色结果显示,各组皮下均见棕色阳性反应。提示无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经修复大鼠坐骨神经缺损,对大鼠脊髓后根神经节感觉神经元具有保护作用,可以促进感觉功能的恢复。

大鼠延髓巨细胞网状核与脑干内脏运动核间的纤维投射研究

目的研究成年大鼠延髓巨细胞网状核与脑干内脏运动核的神经联系。方法将顺、逆行神经示踪剂WGA-HRP注入一侧巨细胞网状核,光学显微镜下观察该核团与一般内脏运动核(迷走神经背核、上泌涎核、下泌涎核)和特殊内脏运动核(面神经核、疑核、三叉神经运动核)的纤维联系。结果在一般内脏运动核、双侧迷走神经背核、下泌涎核均可看到少量逆行标记细胞及神经纤维末梢,但上泌涎核未发现任何标记,在特殊内脏运动核的面神经核、疑核、三叉神经运动核团双侧均见逆行标记细胞及神经纤维终支。结论巨细胞网状核与大多数脑干内脏运动核有双向纤维联系。

不同脊髓损伤模型大鼠行为学及形态学的变化

背景:在脊髓全断模型中有切割伤模型、切除伤模型,为了更好地选择脊髓损伤修复研究的全断动物模型,有必要对这两种模型进行比较及探讨。目的:分析不同脊髓损伤模型的行为学及病理变化,选择适用于再生研究及治疗的脊髓损伤动物模型。方法:将160只SD大鼠随机均分为2组,分别制作切割型脊髓损伤模型与切除型脊髓损伤模型,术后1,2,4,8,10,20,30,50周内进行后肢行为学BBB评分及组织化学、免疫组织化学染色,观察损伤区残余纤维情况;术后4,10,26,52周分别在大鼠脑皮质运动区与颈髓注射BDA-FITC示踪剂,观察损伤区残余纤维的连续性。结果与结论:切割脊髓损伤模型组大鼠术后2-50周双后肢的BBB得分明显高于切除脊髓损伤模型组(P<0.05);切割脊髓损伤模型组在损伤区残存大量组织和神经丝、胶质纤维酸性蛋白纤维,而切除脊髓损伤模型几乎没有残存纤维;不论是切割脊髓损伤模型还是切除脊髓损伤模型,皮质脊髓束均不能通过损伤区,终止于损伤区的头端;在切割脊髓损伤模型中,脊髓固有束重新进入尾侧端的宿主脊髓组织中,而在切除脊髓损伤模型中脊髓固有束终止于损伤区的头端。表明切除脊髓损伤模型更适用于脊髓损伤后再生效果及治疗手段或药物的筛选与评价。

生物素葡聚糖胺观测周围神经局部轴突运输的实验研究

目的 研究神经示踪剂生物素葡聚糖胺（BDA）用于直观观察周围神经局部轴突运输的可行性。方法 （1）显露双侧兔坐骨神经，于实验侧及对照侧坐骨神经干注射不同浓度、不同剂量BDA，对照侧注射生理盐水，术后6、12、24、48h取样。于光镜及共聚焦显微镜下观察样本。（2）将兔左侧坐骨神经横断损伤并缝合，分别于术后1～6周于损伤近侧神经干注射10％BDA，12h后取标本观察。结果 10％BDA可清晰地在周围神经轴突内显像，操作简单，结果易于观察。同时，坐骨神经断伤术后3周时有明确的轴浆运输的恢复。结论 BDA神经干局部注射后能较清楚而直观地显示局部轴突运输的情况。