脱细胞异体神经移植物联合电针对坐骨神经损伤大鼠脊神经节的保护作用及机制

目的探讨脱细胞异体神经移植物(ANA)联合电针对坐骨神经损伤(SNI)大鼠脊神经节的保护作用及机制。方法选取50只雄性SD大鼠,10只制备ANA;40只随机分为正常组、模型组、ANA组和联合组,每组10只。分离右侧坐骨神经,于梨状肌下缘5 mm处去除10 mm制备SNI模型。ANA组将制备好的ANA连接在损伤神经的两断端处。联合组于ANA连接术后2 d采用电子针疗仪电针“环跳穴”和“阳陵泉穴”,15 min/d,7 d为1个疗程,共4个疗程。电生理检测各组大鼠坐骨神经传导速度,评估受损轴突再生情况;尼氏染色观察脊神经节中神经元的形态结构;Western blotting和免疫荧光法检测脊神经节中神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经传导速度明显降低(P<0.01);神经节神经元中的尼氏体因肿胀、溶解导致结构不完整,数量显著减少(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,ANA组和联合组大鼠坐骨神经传导速度明显增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体损伤减弱,数量明显增加(P<0.01);NGF和BDNF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与ANA组比较,联合组大鼠坐骨神经传导速度显著增加(P<0.01);神经节神经元中尼氏体形态较规则,数量明显增加(P<0.01);NGF蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论ANA联合电针可提高大鼠坐骨神经传导速度,改善神经节中神经元的形态结构,发挥对脊神经节神经元的保护作用,其机制可能与提高神经元中NGF和BDNF蛋白的表达,尤其是NGF蛋白的表达相关。

基于SKP-SCs来源的胞外囊泡构建的组织工程神经移植物的生物安全性评价

目的:评价基于皮肤源性前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)分化成的施万细胞(Schwann cells,SCs)来源的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)构建的组织工程神经移植物(tissue engineered nerve graft,TENG)的生物安全性。方法:将SKP-SCs来源的EVs(SKP-SC-EVs)注射至带有3根纤维支架的壳聚糖导管中制备成TENGs,修复比格犬坐骨神经40 mm缺损。术后6个月,取心、肝、脾、肺、肾、脑,通过HE染色进行形态学观察,并收集血液进行血液常规和生化指标分析,包括:白细胞、中性粒细胞、红细胞、血小板、总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶和血糖等。结果:形态学分析显示TENGs组比格犬的各脏器组织结构清晰,与自体移植组、壳聚糖导管组相比,各项血液指标差异均无统计学意义(均P>0.05),且未见毒性反应改变。结论:基于SKP-SC-EVs构建的TENGs植入比格犬体内具有良好的生物安全性,为临床应用TENGs治疗周围神经损伤提供安全性数据支持。

基于SKP-SCs来源胞外囊泡构建的神经移植物桥接周围神经缺损的生物安全性评价

目的:评价基于皮肤源性前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)分化的施万细胞(Schwann cells,SCs)来源的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)构建的神经移植物用于修复周围神经缺损的生物安全性。方法:构建大鼠坐骨神经离断模型,将基质胶装载的SKP-SC-EVs注射至硅胶管制备含囊泡神经移植物(EV-NG),修复坐骨神经损伤。观察术后大鼠运动状态,12周后收集血液进行血常规和生化指标分析,取心、肝、脾、肺、肾、脑组织切片通过HE染色进行病理组织学分析。结果:病理检查显示各组大鼠各重要脏器组织结构清晰,血常规和生化指标均在正常参考范围内,与假手术组比较,EV-NG组与假手术组的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:装载SKP-SC-EVs的神经移植物具有良好的生物安全性,为临床治疗周围神经缺损提供安全性依据。

人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的 用人工组织神经移植物辅加神经再生素 (NRF)桥接修复大鼠周围神经缺损。 方法 用壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维制成人工组织神经移植物 ,辅加促神经生长的中药有效组分NRF ,桥接大鼠坐骨神经缺损10mm。术后作足迹试验 ;2 4周时对再生神经进行电生理学测试、形态学观察和计量学统计。 结果 术后 2 4周内 ,动物未见炎症及排斥反应。实验组的再生神经在足迹试验、电生理学、形态学及计量学上优于硅胶管桥接组。结论 人工组织神经移植物辅加NRF与周围神经组织具有良好的生物相容性 ;

脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞修复大鼠坐骨神经缺损

背景:作者前期试验已成功制备了天然可生物降解的无细胞神经移植物并证明其可促进周围神经再生。目的:无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞构建组织工程人工神经并观察其修复大鼠坐骨神经缺损促进运动功能恢复的效果。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-06/2009-02在辽宁医学院附属第一医院医学组织工程实验室完成。材料:180～200g成年健康雄性Wistar大鼠,用于制备无细胞神经移植物,100～120g成年健康雄性Wistar大鼠,用于制备骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞植入并与无细胞神经支架联合培养构建组织工程人工神经。方法:180～200g成年健康雄性SD大鼠60只构建坐骨神经15mm缺损模型,随机分成3组,每组20只。①实验组采用组织工程人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损。②空白对照组采用组织工程神经支架桥接大鼠坐骨神经缺损。③自体神经对照组采用自体神经移植桥接大鼠坐骨神经缺损。主要观察指标:术后12周通过大体观察、电生理检测、组织学和小腿三头肌湿质量等方法分析评价运动功能恢复情况。结果:①术后12周,实验组大鼠手术侧足趾可以分开,并且可以支撑着地;实验组大鼠再生神经传导速度与自体神经对照组相比,差异无显著性意义。②术后12周,实验组组织化学染色可见腓肠肌内有呈AchE阳性的运动终板整齐地排列于腓肠肌的中上部形成终板带,经结合镀银染色后可见再生的神经束及发出的分支与运动终板相连。③实验组与自体神经对照组胫骨前肌湿质量比差异无显著性意义。结论:无细胞神经移植物复合骨髓间充质干细胞桥接大鼠坐骨神经缺损具有促进其运动功能恢复的作用。

人工组织神经移植物修复狗缺损坐骨神经后腓肠肌的形态观察

目的 了解复合型医用可降解材料制成的人工组织神经移植物辅加神经再生素修复狗坐骨神经缺损后 ,腓肠肌的形态变化。 方法 将人工组织神经移植物连接在狗的坐骨神经缺损 30mm处。以自体神经桥接和神经缺损的狗为对照组Ⅰ和Ⅱ。术后 6个月时取腓肠肌进行称重、特殊染色和组织化学染色 ,显微镜下了解腓肠肌的形态变化并进行图像定量分析 ,同时了解肌纤维的超微结构变化。 结果 术后 6个月 ,实验组腓肠肌的萎缩形态指标变化均轻于对照组Ⅱ ,而与对照组Ⅰ相似。 结论 经人工组织神经移植物修复缺损的坐骨神经后 ,使腓肠肌又重新获得神经支配 。

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的: 研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后, 再生神经的形态学变化。方法: 光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化, 免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析。结果: 实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维, 两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异; 两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异。结论: 脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用。

脱细胞同种异体神经移植物的制备及成分分析

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植的制备方法及其含有的成分。方法 采用组织工程化低渗脱细胞方法制备神经异体移植物 ,光电镜观察其结构特征 ;用免疫组织化学法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析神经异体移植物的成分。结果 正常的 (天然的 )周围神经经脱细胞处理后 ,清除了雪旺细胞、神经外膜和束膜的细胞 ,以及神经纤维的髓鞘和轴突 ,保存了由雪旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。成分分析结果显示 ,含有LN、FN以及生长相关蛋白GAP 4 3和 6 5kDa蛋白等促进和诱导受体损伤神经再生的重要成分。结论 脱细胞异体神经移植物含有诱导和促进神经再生的相关蛋白 ,有利于受损神经的再生。

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的 :探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法 :采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月 ,进行细菌学检查、一般组织学观察、免疫组化染色、透射电镜观察。结果 :储存过程中不会发生细菌污染 ,储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好 ;其基本结构、神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留 ;仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论 :真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经 1年。

人工组织神经移植物对大鼠陈旧性坐骨神经缺损(60天)的修复作用

目的观察人工组织神经移植物对陈旧性大鼠坐骨神经缺损的修复作用。方法切除成年SD大鼠部分左侧坐骨神经,饲养60d形成陈旧性坐骨神经缺损后,以人工组织神经移植物修复缺损,同时设自体神经修复和不修复两对照组。修复术后3个月做神经-肌复合电位、腓肠肌湿重及再生神经形态学检测。结果人工组织神经移植物修复组实验侧的运动神经传导速度、腓肠肌湿重、移植物远侧再生神经有髓神经纤维髓鞘厚度等结果与自体神经修复组相似。不修复对照组则未记录到神经-肌复合电位,未观察到再生神经纤维结构,腓肠肌湿重明显小于人工组织神经移植组和自体神经移植组。结论人工组织神经移植物在一定程度上能修复缺损60d的大鼠坐骨神经。

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究(英文)

背景:研究表明:应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应,但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功,离临床应用尚有差距。目的:清除人类周围神经中的细胞和髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。设计:非随机非对照实验研究。地点和对象:实验在解放军第三○四医院骨科完成,对象为急性脑外伤死亡者,男,26岁,体质量75kg,死者家属同意遗体捐献。干预:切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经,以TritonX-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色,以观察细胞、髓鞘及神经基底膜;免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层;行半薄切片及超薄切片透射电镜检查,观察超微结构。主要观察指标:去细胞神经的物理形状,组织学观察和超微结构。结果:去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除,神经基底膜被保留;许旺细胞基底板层保留完好;去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论:TritonX-100及脱氧胆酸钠化学处理方法,可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘,萃取粗大和长段的去细胞神经;该神经移植物保持了网管柱状组织结构,保留了许旺细胞基底板层及其主要?

轴突损伤距离对成年金黄地鼠视网膜节细胞轴突在正常或预先溃变周围神经移植物中再生的影响

目的 系统研究轴突损伤的距离与轴突再生之间的关系 ,以及预先溃变周围神经移植物对视网膜节细胞 (简称节细胞 )轴突在不同距离损伤后再生的影响。 方法 在距成年金黄地鼠眼球后极 0 .5、1、1.5、2、3或7m m处切断左侧视神经 ,视神经眶侧断端同正常 (正常组 )或预先溃变 (溃变组 )的周围神经移植物相吻合。 结果 移植术后 2 8d,两组荧光金逆行标记的发出再生轴突的节细胞数量均随轴突损伤距离的增加而下降 ,并以 0 .5～3m m距离点之间下降最为明显。比较两组对应距离点 ,溃变组标记节细胞数量在 2、3mm距离点较正常组显著增多。 结论 成年金黄地鼠节细胞轴突损伤的距离 ,决定了发出再生轴突的节细胞数量。预先溃变周围神经移植物对节细胞轴突再生具有促进作用 ,并以轴突损伤距离为条件。

大鼠坐骨神经缺损半个月后人工组织神经移植物修复的实验研究

为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用。我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型。15d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为阴性对照(6只)。第二次手术后3个月,电生理学、形态学结果显示实验组的再生神经虽略差于自体对照组,但明显优于缺损对照组,腓肠肌的萎缩形态学指标变化则较接近自体对照组。实验结果表明人工组织神经移植物对已缺损15d的大鼠周围神经具有较好修复作用。

人工神经移植物丝素蛋白导管的生物相容性的初步研究

目的初步探讨人工神经移植物丝素蛋白导管的生物相容性。方法将丝素蛋白导管植入兔子皮下,术后4周、8周、12周、24周取材,切片,HE染色,观察局部组织反应。结果大体观察和组织切片观察,局部组织反应轻,纤维包裹逐渐变薄,丝素蛋白导管至24周完全降解。结论丝素蛋白导管有良好的生物相容性和可降解性,是理想的人工神经移植物。

异种脱细胞神经移植物修复坐骨神经缺损的实验研究

目的:观察异种脱细胞神经修复坐骨神经缺损的效果,探寻修复周围神经的新型移植物。方法:分别取家犬、新西兰大白兔臂丛神经及SD大鼠坐骨神经,对其适当切修使直径、长度相近,对获取的神经进行低渗-脱细胞处理,得到脱细胞神经移植物。32只大鼠均制造人为坐骨神经缺损,随机均分为4组,A组,家犬脱细胞神经移植修复;B组,兔脱细胞神经移植修复;C组,大鼠脱细胞神经移植修复;D组,未修复组。修复后进行神经运动和感觉功能的检测。结果:修复组大鼠坐骨神经功能恢复均显著优于未修复组,而各修复组间无明显差异。结论:异种脱细胞神经可取得与同种脱细胞神经修复周围神经缺损相似的效果。

HRP逆行示踪对人工组织神经移植物辅加NRF修复大鼠坐骨神经缺损的评价

目的 :用 HRP逆行示踪法评价人工组织神经移植物辅加神经再生素修复大鼠周围神经缺损的效果。方法 :壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维组成人工组织神经移植物并辅加神经再生素 ,修复大鼠的坐骨神经缺损 ( 10 mm)。术后 2 4周时 ,进行大鼠 HRP逆行示踪试验。结果 :脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被 HRP标记的神经元胞体。结论 :人工组织神经移植物辅加神经再生素对缺损的神经修复具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。

人工组织神经移植物修复狗坐骨神经缺损后荧光素逆行追踪试验

目的 :用荧光素逆行追踪试验了解人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接缺损坐骨神经后 ,神经再生修复的情况。方法 :人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接狗缺损的 30 m m坐骨神经手术后 6个月时 ,于原远端吻合口下 10 mm处注射快蓝 (FB) ;取脊髓及相应背根神经节 ,观察神经元被荧光素标记情况。结果 :脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被 FB标记的神经元胞体。结论

脱细胞神经移植物对骨髓间充质干细胞的诱导分化

目的探讨脱细胞神经移植物诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞的可行性。方法将分离纯化的SD大鼠骨髓间充质干细胞进行体外培养扩增,行表型鉴定后,取第5代细胞,诱导组采用脱细胞神经移植物匀浆进行诱导,非诱导组加入等量无血清培养基,倒置相差显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫细胞化学染色检测诱导后细胞S-100,神经胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein GFAP）的表达情况。结果BMSCs表型鉴定为CD44＋、CD54＋、CD34-,免疫细胞化学染色GFAP、S-100的阳性表达率分别为为（42±4）%和（64±5）%。结果 脱细胞神经移植物可诱导骨髓间充质干细胞分化为施旺细胞样细胞。