神经突触核蛋白-γ、骨形态发生蛋白2、基质金属蛋白酶9在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性分析

目的分析神经突触核蛋白-γ(SNCG)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性。方法选取2016年1月21日~2017年1月21日我院存档的70例口腔颌面部鳞癌组织蜡块标本作为肿瘤组织,另选择70例癌旁组织与70例正常组织进行参照。依据肿瘤细胞的分化程度,将70例肿瘤组织标本分为高分化组(15例),中分化组(33例)及低分化组(22例)。依据是否出现淋巴结转移情况,将70例肿瘤组织标本分为淋巴结转移(30例)及淋巴结未转移(40例)。比较三组不同组织部位标本中的SNCG、BMP-2、MMP-9表达情况;比较不同分化程度肿瘤组织中SNCG、BMP-2、MMP-9的表达阳性率;分析淋巴结转移对肿瘤组织中SNCG、BMP-2、MMP-9表达阳性率的影响;分析SNCG、BMP-2、MMP-9三者之间的相关性。结果肿瘤组织中的SNCG、MMP-9的阳性率高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁组织与正常组织的SNCG、MMP-9阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤组织和癌旁组织中的BMP-2的阳性率高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁组织与肿瘤组织的BMP-2阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高、中、低分化组肿瘤组织中的BMP-2与MMP-9阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);高分化组肿瘤组织中的SNCG阳性率低于低、中分化组,差异有统计学意义(P<0.05);低、中分化组肿瘤组织中的SNCG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。出现淋巴结转移组织中的SNCG、MMP-9阳性率高于淋巴结未转移组织,差异有统计学意义(P<0.05)。SNCG与BMP-2蛋白成正相关性(r=0.420,P<0.05),BMP-2与MMP-9成正相关性(r=0.390,P<0.05),SNCG与MMP-9成正相关性(r=0.561,P<0.05)。结论在口腔颌面部鳞癌中,SNCG、BMP-2、MMP-9三者互成正相关性,具有高表达特征,可作为该类肿瘤疾病的常用检测指标。

神经突触核蛋白-γ过表达降低肝癌细胞对抗微管药物的敏感性

肝癌是中国最常见的恶性肿瘤之一。目前,紫杉醇(paclitaxel,PTX)和长春新碱(vincristine,VCR)等抗微管药物是临床上肝癌化疗的常用药物,然而此类药物对患者的疗效差别很大。因此,发现影响抗微管药物作用的细胞内因子具有重要意义。本研究采用人肝癌细胞株HepG2稳定过表达synuclein-γ(SNCG)模型,研究SNCG是否影响肿瘤细胞对抗微管药物的敏感性。实时定量PCR(real-timeRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测HepG2/SNCG细胞稳定高表达SNCG,与HepG2/Neo细胞相比,SNCG mRNA表达上调13.6倍,增殖活性增高(66±5)%。经PTX或VCR分别处理,SNCG过表达可降低抗微管药物诱导的细胞有丝分裂期阻滞,HepG2/SNCG细胞的G2/M期比例较HepG2/Neo细胞分别下降(19±2.9)%和(27±1.7)%;HepG2/SNCG、HepG2/Neo和HepG2细胞对PTX的有丝分裂指数分别为0.47、0.64和0.67,对VCR的有丝分裂指数分别为0.14、0.30和0.34。HepG2/SNCG细胞对PTX、VCR的敏感性显著降低,耐药指数分别为21和15。研究结果表明,SNCG在肝癌细胞过表达后可显著降低其对抗微管药物的敏感性,在肝癌化疗中SNCG是潜在的抗微管药物使用的生物标志物。

神经突触核蛋白-γ在人脑胶质瘤中的表达

目的探讨神经突触核蛋白-γ （SNCG）在人脑胶质瘤组织中的表达情况。方法针对43例人脑胶质瘤组织标本，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法测定SNCGmRNA的转录水平，同时采用免疫组化sP法检测SNCG的蛋白表达。结果高级别胶质瘤（HGG，Ⅲ-Ⅳ级）和低级别胶质瘤（LGG，Ⅰ-Ⅱ级）中的SNCG阳性率分别为89．3％（25／28）和73．3％（11／15），胶质瘤病理分级越高SNCG的阳性率越高（χ2=15．724，P=0．000）。SNCGmRNA在HGG和LGG中的转录水平较正常脑组织分别升高（4．46±0．39）倍和（2．56±0．34）倍（P〈0．05），而且HGG中的表达较LGG显著升高（P〈0．05）。结论SNCG的转录和蛋白表达水平在神经胶质瘤中显著增高，检测SNCG表达水平有利于胶质瘤的恶性程度判断。

神经突触核蛋白-γ降低U87-MG裸鼠皮下荷瘤细胞对紫杉醇敏感性的体内实验研究

【目的】探讨神经突触核蛋白-γ(synuclein-γ,SNCG)对神经胶质瘤U87-MG细胞移植瘤对紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响。【方法】建立裸鼠双侧皮下荷U87/SNCG、U87/neo人脑胶质瘤模型,并给予紫杉醇(PTX,12 mg/kg)治疗,每5 d测量肿瘤体积以评估其对PTX的药物敏感性。治疗5周后处死动物并剥离肿瘤组织,采用TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡变化;分别应用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测移植瘤中细胞核增殖抗原(nuclear-associated antigen Ki-67,Ki-67)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达变化,评价SNCG对胶质瘤增殖、凋亡及对PTX敏感性的影响。【结果】PTX干预后U87/SNCG移植瘤体积显著高于U87/neo组[(236.4±24.3)mm3对比(93.5±16.1)mm3,P<0.01]。TUNEL结果表明,PTX干预后U87/SNCG瘤体中凋亡细胞率(12.4±2.3)%明显低于U87/neo瘤体(32.5±4.1)%(P<0.05)。免疫组化和免疫印迹结果显示,U87/SNCG瘤体中肿瘤细胞恶性生物学表型相关蛋白Cyclin D1、EGFR、Ki-67表达明显上升,细胞有丝分裂期标志性周期蛋白Cyclin B1表达下降(P<0.05)。【结论】SNCG可降低裸鼠皮下胶质瘤移植瘤对紫杉醇的药物敏感性。

神经突触核蛋白-γ质粒转染胶质瘤细胞及其过表达对紫杉醇耐药性的影响

目的探讨胶质瘤细胞U87中神经突触核蛋白-γ(synuclein-γ,SNGG)过度表达对紫杉醇耐药的影响。方法 U87/SNCG组采用pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体转染U87胶质瘤细胞,构建稳定转染SNCG的U87/SNCG细胞系,U87/neo对照组采用pIRES2-EGFP空载质粒转染U87胶质瘤细胞,构建U87/neo细胞系。采用G418选择培养稳定转染的U87/neo和U87/SNCG细胞系,采用反转录实时定量聚合酶链反应和免疫荧光染色技术鉴定成功后,2组分别于紫杉醇作用6、12、18、24h时检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡细胞比例,采用免疫荧光染色法观察细胞形态学变化。结果成功构建U87/SNCG细胞系;U87/SNCG组SNCG mRNA表达较U87/neo对照组上调9.06倍;紫杉醇作用24h时,U87U/SNCG组细胞增殖抑制率[(25.49±2.44)%]和凋亡细胞比例[(7.02±0.26)%]明显低于U87/neo对照组[(34.36±2.95)%、(14.93±1.53)%](P<0.05);紫杉醇作用6h时,U87/SNCG组细胞G2/M期比例[(22.87±0.60)%]低于U87/neo对照组[(26.75±2.70)%](P<0.01);随着紫杉醇作用时间延长,与U87/SNCG组比较,U87/neo对照组细胞总数减少,细胞散落浮于培养液中,出现透明空泡、崩解细胞,并可见大量核固缩、核碎裂之凋亡现象。结论 SNCG过表达可降低抗微管药物诱导的U87细胞有丝分裂期阻滞,增强胶质瘤细胞的增殖能力和抗凋亡能力。

组织因子途径抑制物-2和γ-神经突触核蛋白在食管癌中的表达及其与肿瘤细胞浸润、转移和凋亡之间的关系

目的:探讨组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)和γ-神经突触核蛋白(synuclein gamma,SNCG)在食管癌组织中的表达及其与肿瘤浸润、转移和细胞凋亡之间的关系。方法:应用免疫组织化学法检测82例食管癌组织及20例相应癌旁不典型增生组织和54例相应癌旁正常食管组织中TFPI-2、SNCG和基质金属蛋白酶-9(matrix metallo-proteinase-9,MMP-9)的表达,应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)。结果:TFPI-2和SNCG在食管癌组织、癌旁不典型增生组织及正常食管组织中的阳性表达率分别为30.4%、60.0%、87.0%和63.4%、30.0%、3.7%,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。TFPI-2和SNCG的表达与肿瘤淋巴结转移、浸润深度、TNM分期和分化程度密切相关(P<0.01),但与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和肿瘤大体分型无关(P>0.05)。食管癌组织中TFPI-2与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.636,P=0.000),而SNCG与MMP-9的表达呈正相关(r=0.393,P=0.000)。TFPI-2和SNCG的表达与AI有关(P<0.05)。结论:TFPI-2可能通过抑制MMP-9的表达诱导细胞凋亡,抑制食管癌细胞的生长和转移,而SNCG可能在此过程中起着相反的作用,TFPI-2和SNCG有望成为有效的肿瘤标志物和肿瘤基因治疗的新靶点。

结直肠癌肝转移γ-神经突触核蛋白高表达的临床意义

目的:探讨结直肠癌(CRC)肝转移患者γ-神经突触核蛋白(SNCG)高表达的临床意义。方法:根据术后癌细胞转移情况将219例患者分为肝转移组114例和无肝转移组105例。采用免疫组织化学法,分析SNCG表达水平与CRC患者术后肝转移的关系及其与术后无病生存时间和总生存时间的关系。结果:SNCG阳性率在肝转移组为71.96%,无肝转移组为28.04%。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断CRC术后是否有肝转移的独立因素(P<0.01)。SNCG阳性表达与阴性表达的肝转移患者术后无病生存时间分别为(48.70±5.40)个月和(78.75±4.23)个月,总生存时间分别为(51.10±5.20)个月和(80.29±4.12)个月,SNCG阴性患者的生存时间均明显长于SNCG阳性患者(P<0.01)。结论:SNCG表达水平越高,CRC患者术后肝转移的风险越高,无病生存期越短。CRC组织中SNCG高表达可以作为预测肝转移的指标,值得临床推广。

γ-神经突触核蛋白在电针改善大脑中动脉闭塞模型大鼠认知功能中的作用

目的:观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠神经功能及海马中γ-神经突触核蛋白(SNCG) mRNA表达的影响,探讨SNCG与记忆认知能力之间的关系。方法:将18只SD大鼠平均随机分为电针组、模型组、假手术组。采用Longa改良线栓法制作MCAO大鼠模型,造模后24h后电针组每日电针神庭、百会穴20min,连续7d,模型组、假手术组予同等条件抓取。通过平衡木实验判断大鼠神经功能缺损状况;实时定量荧光PCR(q-PCR)检测脑组织SNCG mRNA表达。结果:电针组神经功能缺损评分大于假手术组,小于模型组;电针组海马中SNCG mRNA的表达大于假手术组,模型组海马中SNCG mRNA的表达小于假手术组,差异均有统计学意义。结论:电针能改善MCAO大鼠的神经功能状况,SNCG可能与认知功能神经系统之间存在相互作用。

SNCG真核表达载体构建及其在胶质瘤细胞中的稳定表达和影响

目的:利用神经突触核蛋白-γ(SNCG)真核表达载体,构建人胶质瘤细胞株U373稳定过表达SNCG模型,初步探讨过表达SNCG对U373细胞的影响。方法:应用RT-PCR法扩增SNCG基因,将PCR产物插入至真核表达载体pIRES2-EGFP中。通过EcoR I、BamH I双酶切及测序鉴定后转染至人神经胶质瘤细胞U373,G418筛选建立SNCG稳定转染的U373细胞系。运用实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测转染后SNCG表达,流式细胞术(FCM)检测SNCG对细胞周期的影响。结果:构建pIRES2-EGFP-SNCG真核表达载体,建立稳定转染SNCG的U373细胞系。与U373/neo细胞相比,U373/SNCG细胞SNCG mRNA表达上调17倍;经紫杉醇(PTX)处理后,U373/SNCG细胞G2/M比例(49±3.6)%较U373/neo细胞(66±1.7)%下降17%(P<0.05)。结论:成功构建人SNCG真核表达载体,并在U373细胞中稳定表达,初步证实过表达SNCG可降低抗微管药物诱导的U373细胞有丝分裂期阻滞,为进一步体外研究SNCG在神经胶质瘤中的功能奠定了基础。