神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化

目的构建和转化神经突起因子(Neuritin)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础。方法用PCR扩增neuritin全长cDNA中编码开放读框的基因片段;将该基因片段与pLex-A载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA-neuritin重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的2种EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落,同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16 h后,A600均值均为0.9。表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用。结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。

膝骨性关节炎滑膜神经纤维分布和神经突起因子表达及意义

目的探讨神经纤维和神经突起因子(Neuritin)在膝骨性关节炎中的表达和意义。方法应用免疫组化的方法检测Neuritin在膝骨性关节炎和单纯膝关节外伤膝关节滑膜中的表达;用Gless神经纤维染色法观察膝骨性关节炎和单纯膝关节外伤膝关节滑膜中神经纤维分布。结果 30例膝骨性关节炎滑膜中阳性表达Neuritin 22例(73.3%),30例对照滑膜中阳性表达Neuritin 13例(43.3%);神经纤维在膝骨性关节炎滑膜的分布较单纯膝关节外伤广泛。结论 Neuritin和神经纤维可能参与膝骨性关节炎膝关节疼痛的发生。

大鼠神经突起因子的克隆及表达载体的构建

从成年SD大鼠脑组织分离提取总RNA,反转录PCR扩增出鼠神经突起因子(neuritin)cDNA的最大开放阅读框(openingreadingframe,ORF)后,重组于克隆载体pGEM3z上,经PCR、限制内切酶鉴定和DNA测序鉴定,扩增出的cDNA426bp全部核苷酸序列与国外文献报道的完全一致;在已构建好的重组克隆载体neuritin pGEM3z基础上,将该neuritinORF亚克隆到原核表达载体pQE30上,为获取具有天然活性的neuritin蛋白及其功能研究提供了基础。

血清神经突起因子、神经元特异性烯醇化酶与脊柱骨折合并脊髓损伤神经功能的关系及预后预测

目的:分析血清神经突起因子(Neuritin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)与脊柱骨折合并脊髓损伤神经功能关系及预后预测。方法:选取2017年6月至2018年6月开封市人民医院的脊柱骨折合并脊髓损伤100例,比较不同神经功能分级,预后良好、预后不良血清Neuritin、NSE水平;Logistic回归分析法分析预后不良危险因素;受试者工作特征曲线(ROC)、Kappa一致性检验分析两者预测预后不良效能。结果:A、B、C、D级血清Neuritin水平分别为(119.42±13.14)、(107.30±10.20)、(95.54±11.62)、(79.33±9.96)ng/L,NSE水平分别为(11.54±2.01)、(9.53±1.02)、(8.41±0.96)、(7.25±0.86)μg/L,均依次降低(P<0.05);Logistic回归分析显示血清Neuritin、NSE水平均是预后危险因素(P<0.05),Kappa一致性检验显示两者预测预后不良效能高(Kappa=0.824,P<0.05)。结论:脊柱骨折合并脊髓损伤血清Neuritin、NSE水平越高,神经功能损伤越严重,两者联合预测该病预后不良效能高。

神经突起生长导向因子(netrin)受体家族研究进展

神经突起生长导向因子netrin是一种分泌蛋白 ,在神经发育所需的轴突导向及细胞迁移中发挥双重导向功能———吸引或排斥 ,主要依赖于生长锥所表达的不同受体结肠癌缺失蛋白 (DCC)或UNC5同源物 (UNC5H) ,从而传递不同信息。同时 ,dcc和unc5h也是肿瘤抑制基因 ,近年来的研究显示这种双重导向功能可能归因于它们属于配体依赖性受体家族。依赖性受体的重要特征是缺乏相应配体时将诱导细胞凋亡 ,因此推测DCC和UNC5H不仅为神经元传递信号所必需 ,同时也是细胞生存因子 ,与细胞存活及正常功能的发挥密切相关。

广西人群中神经突起生长抑制因子基因rs2968795G/A和rs10496040A/C多态性分析

目的:分析神经突起生长抑制因子(Nogo)基因rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点在广西人群中的多态性分布特点,并比较其在不同人群间的分布差异。方法:运用多重单碱基延伸法(SNaPshot)和DNA测序法检测323例广西人群的rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点基因型,并用统计学方法比较2个位点的基因型及等位基因频率在男性和女性之间以及不同人群中分布差异。结果:rs2968795G/A位点存在GG、GA、AA 3种基因型,分布频率为18.9%、46.1%、35.0%。此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男性和女性间差异无统计学意义。其基因型和等位基因与国际人类基因组单体型图计划(HapMap)公布的欧洲和非洲人群比较差异有统计学意义;rs10496040A/C存在AA、AC、CC3种基因型,分布频率为1.2%、16.4%、82.4%。此位点基因型及等位基因频率在广西人群的男女之间差异无统计学意义。基因型和等位基因频率与欧洲、非洲和日本人群间差异均有统计学意义。结论:Nogo基因rs2968795G/A位点和rs10496040A/C位点基因多态性在不同人群间存在着不同程度差异。这种差异可能对研究其多态性和相关疾病的关系在不同人群间中的差异具有指导意义。

神经突起导向因子-1蛋白在结直肠癌组织中的表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨神经突起导向因子-1(netrin-1)蛋白在结直肠癌组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法按照随机数字表法选取2012年1月至2014年6月福建省漳州市医院收治的184例行结直肠癌根治术病人作为研究对象,免疫组织化学染色检测癌组织及癌旁正常组织中netrin-1的表达,比较其表达差异,并分析其与临床病理特征及预后的相关性。结果癌组织与癌旁正常组织中netrin-1高表达率分别为71.7%(132/184)、9.8%(18/184),差异有统计学意义(χ^(2)=146.255,P<0.001)。netrin-1高表达与浸润深度(χ^(2)=11.580,P=0.001)、TNM分期(χ^(2)=8.875,P=0.003)、淋巴结转移(χ^(2)=15.692,P<0.001)有关,而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度、病理学类型无关(P>0.05)。netrin-1高表达与低表达者5年总生存率分别为40.9%(54/132)和71.2%(37/52),差异有统计学意义(χ^(2)=15.101,P<0.001)。单因素分析显示浸润深度(χ^(2)=4.874,P=0.027)、TNM分期(χ^(2)=9.215,P=0.002)、淋巴结转移(χ^(2)=14.414,P<0.001)、netrin-1表达(χ^(2)=15.101,P<0.001)与结直肠癌病人5年总生存率相关。Cox多因素分析显示TNM分期(RR=1.768,95%CI:1.083~2.887,P=0.023)、淋巴结转移(RR=1.946,95%CI:1.193~3.175,P=0.008)、netrin-1表达(RR=1.959,95%CI:1.034~3.709,P=0.039)是结直肠癌病人的独立预后因素。结论netrin-1在结直肠癌组织中表达升高,其高表达可能参与结直肠癌的发生发展,对预后判断有一定的参考价值。

神经突起诱向因子Netrin-4受体的初步研究(英文)

目的研究神经突起诱向因子Netrin-4的受体,并分析Netrin-1已知受体DCC和UNC5H1作为Netrin-4共受体的可能性。方法以碱性磷酸酶(AP)标记的Netrin-4为配体,分别以原代培养神经元及转染DCC和UNC5H1的COS7细胞为对象,采用亲和细胞化学技术检测Netrin-4的受体,并分析Netrin-4的受体结合动力学及受体竞争结合动力学特征。结果通过载体转染表达已知Netrin-1受体DCC和UNC5H1的COS7细胞既能被Netrin-1结合,也能被Netrin-4结合;受体结合饱和实验显示Netrin-4与其受体快速结合(15min达高峰)后缓慢解离;受体结合竞争实验显示Netrin-1能竞争Netrin-4与其受体的结合。结论DCC和UNC5H1可能是Netrin-1与Netrin-4的共受体。由于Netrin-4受体结合动力学及受体竞争结合实验显示Netrin-1与受体的亲和力高于Netrin-4,提示Netrin-4可能还存在自身独特的受体。

胸椎压缩性骨折伴脊髓损伤患者血清Fbg TNF-αNeuritin水平与神经功能的关系

目的探讨胸椎压缩性骨折伴脊髓损伤(SCI)患者血清纤维蛋白原(Fbg)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、神经突起因子(Neuritin)水平与神经功能的关系。方法选取2015-01—2019-06河南医学高等专科学校附属医院骨科收治的胸椎压缩性骨折伴脊髓损伤患者90例,按患者脊髓损伤程度分为完全SCI组28例和不完全SCI组62例,其中ASIA分级A级28例,B级33例,C级18例,D级11例。根据患者预后分为预后良好组51例和预后不良组38例。选取同期单纯胸椎压缩性骨折患者30例纳入单纯骨折组,选取同期健康体检正常人群30例作为正常对照组。所有患者于伤后24 h检测Fbg、TNF-α、Neuritin水平。结果完全SCI组、不完全SCI组、单纯骨折组3组患者的Fbg、TNF-α、Neuritin水平均高于正常对照组(P<0.05)。单纯骨折组的Fbg水平高于完全SCI组和不完全SCI组(P<0.05)。单纯骨折组的TNF-α和Neuritin水平低于完全SCI组和不完全SCI组(P<0.05)。随着患者的神经功能损伤严重程度逐渐加重,Fbg水平逐渐下降(P<0.05),TNF-α和Neuritin水平逐渐上升(P<0.05)。Fbg水平与脊髓损伤神经功能分级呈负相关(r=-0.420,P<0.001),TNF-α、Neuritin水平与脊髓损伤神经功能分级呈正相关(r=0.313,P<0.001;r=0.694,P<0.001)。预后良好组的Fbg水平高于预后不良组(P<0.05)。预后良好组的TNF-α和Neuritin水平低于预后不良组(P<0.05)。Fbg、TNF-α、Neuritin预测患者神经功能损伤严重程度的最佳阈值分别为287.83mg/dL(AUC=0.780)、2.06 ng/mL(AUC=0.732)、56.70 pg/L(AUC=0.781)。Fbg、TNF-α、Neuritin预测患者不良预后的最佳阈值分别为293.14 mg/dL(AUC=0.690)、1.91 ng/mL(AUC=0.713)、59.37 pg/L(AUC=0.698)。结论胸椎压缩性骨折伴脊髓损伤患者的血清Fbg、TNF-α、Neuritin水平与神经功能具有相关性,可在一定程度上预测患者的神经功能损伤严重程度和预后情况。

脊柱骨折伴脊髓损伤患者TNF-α、Neuritin与神经功能的关系及其对预后的预测价值

目的:探究脊柱骨折伴脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)患者肿瘤坏死因子(TNF-α)、神经突起因子(Neuritin)水平与神经功能的关系及其对预后的预测价值。方法:选取2021年3-11月中国人民解放军联勤保障部队第九〇九医院骨科收治的100例脊柱骨折伴SCI患者,根据SCI程度将其分为A组(n=30,完全性脊髓损伤)和B组(n=70,不完全性脊髓损伤),选取同一时间在本院进行体检的80例正常志愿者作为空白组。三组患者均检测TNF-α、Neuritin水平,并评价A、B组的神经功能。比较三组、不同神经功能分级患者TNF-α与Neuritin水平。统计100例患者骨折后6个月分组情况,并比较预后不佳组和预后良好组TNF-α与Neuritin水平。分析TNF-α与Neuritin对脊柱骨折伴SCI患者预后的预测价值。结果:A、B组TNF-α和Neuritin水平均显著高于空白组(P<0.05),A组TNF-α、Neuritin水平均显著高于B组(P<0.05)。A、B、C、D级患者TNF-α、Neuritin水平比较差异有统计学意义(P<0.05),且从D级至A级,TNF-α、Neuritin水平呈上升趋势。Spearman秩相关结果显示,TNF-α、Neuritin与ASIA分级均呈正相关(r=0.297、0.702,P<0.001)。100例患者骨折6个月后,36例患者预后良好,64患者预后不佳。预后良好组TNF-α、Neuritin水平均明显低于预后不佳组(P<0.05)。TNF-α的曲线下面积(AUC)是0.837(95%CI:0.801,0.926),敏感度为0.712,特异度为0.781(P<0.001);Neuritin的AUC是0.843(95%CI:0.750,0.937),敏感度为0.786,特异度为0.739(P<0.001);TNF-α与Neuritin联合检测的AUC是0.938(95%CI:0.876,0.989),敏感度为0.879,特异度为0.817(P<0.001)。结论:脊柱骨折伴SCI患者的血清TNF-α和Neuritin水平与神经功能损伤程度存在正相关性,TNF-α和Neuritin联合检测能够对脊柱骨折伴SCI患者预后进行预测。

尿神经突起导向因子1和结缔组织生长因子与妊娠期高血压疾病早期肾损伤的相关性

目的探究尿神经突起导向因子1(Netrin-1)、结缔组织生长因子(CTGF)与妊娠期高血压疾病(HDCP)早期肾损伤的关系。方法将上海儿童医学中心三亚市妇女儿童医院2020年2月到2022年2月收治的HDCP患者128例纳入研究,按照病情严重程度分作妊娠期高血压组(n=38)、子痫前期组(n=51)、重度子痫前期组(n=39),另选取同期正常妊娠孕妇43人作为对照组,检测并比较各组尿Netrin-1、CTGF水平,采用logistic回归分析HDCP患者早期肾损伤的影响因素。结果各组研究对象的尿Netrin-1和CTGF水平对比,差异有统计学意义(F=191.210、1714.664,P<0.05);且随着HDCP病情严重程度增加,尿Netrin-1水平逐渐降低,而CTGF水平逐渐升高(P<0.05);肾损伤组尿Netrin-1水平[(117.5±14.1)μg/L]低于无肾损伤组[(157.0±20.8)μg/L]和对照组[(215.2±27.8)μg/L],尿CTGF水平[(902.6±47.2)μg/L]高于无肾损伤组[(476.8±33.0)μg/L]和对照组[(267.2±31.7)μg/L](F=96.254、104.728,均P<0.001)。Pearson相关性分析显示,尿Netrin-1和尿素氮、肌酐、24 h尿微量白蛋白排泄量(UAE)呈负相关(r=-0.410、-0.503、-0.476,均P<0.001),而尿CTGF和尿素氮、肌酐、UAE呈正相关(r=0.560、0.491、0.448,均P<0.001);多因素logistic回归分析显示,尿Netrin-1水平(OR=0.755,95%CI 0.659~0.782)升高是HDCP患者早期肾损伤的保护因素(P<0.05);而尿CTGF(OR=2.129,95%CI 1.417~3.798)、尿素氮(OR=1.315,95%CI 1.054~1.641)以及HDCP严重程度上升(OR=1.618,95%CI 1.132~2.311)是HDCP患者早期肾损伤的危险因素(均P<0.05)。结论尿Netrin-1、CTGF水平和HDCP患者病情严重程度关系密切,随尿Netrin-1水平的降低以及CTGF水平的升高,HDCP早期肾损伤风险越高,其水平检测有助于评估HDCP早期肾功能损伤状态。

神经突起导向因子netrin-1及其受体与肿瘤发生

近年来的研究发现,netrin1和其受体基因在多种肿瘤中表达下调,未与配体netrin1结合的DCC和UNC5H能够诱导细胞凋亡,而在结合配体后则抑制细胞凋亡。在肿瘤细胞中凋亡通路通常被抑制,而且在50%以上的肿瘤中p53是失活的。netrin1与其受体结合后能完全抑制p53诱导的细胞凋亡;同时p53也直接调节netrin1及其受体基因的表达。因此,netrin1及其受体可能在肿瘤发生过程中发挥重要作用。

神经突起导向因子1和中性粒细胞/淋巴细胞与妊娠期高血压疾病早期肾损伤的相关性

目的探讨神经突起导向因子1(Netrin-1)和中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)与妊娠期高血压疾病(HDP)早期肾损伤的相关性。方法选取2016年1月至2018年1月期间产科收治的HDP患者110例为研究对象,根据病情严重程度分为妊娠期高血压30例,轻度子痫前期44例,重度子痫前期36例,根据内生肌酐清除率(Ccr)分为肾功能损伤组(n=47)和肾功能正常组(n=63)。选取同期产检的健康孕妇50人作为正常妊娠组。比较各组间尿Netrin-1、血NLR、尿素氮、肌酐差异,并进行相关性分析和Logistic回归分析。结果HDP组和正常妊娠组孕妇年龄、体质量、孕周、孕次、空腹血糖差异无统计学意义(P>0.05),HDP组血尿素氮、肌酐、24 h尿白蛋白排出量(UAE)、NLR高于正常妊娠组,Ccr、尿Netrin-1低于正常妊娠组(均P<0.05)。重度子痫前期患者Ccr、尿Netrin-1低于轻度子痫前期和妊娠期高血压组,NLR高于轻度子痫前期和妊娠期高血压组(P<0.05);轻度子痫前期患者Ccr、尿Netrin-1低于妊娠期高血压组,NLR高于妊娠期高血压组(均P<0.05)。肾功能损伤组NLR、尿素氮、肌酐、UAE高于肾功能正常组,Ccr、尿Netrin-1低于肾功能正常组(均P<0.05)。Pearson相关性分析显示,尿Netrin-1与HDP患者尿素氮、肌酐、UAE呈负相关(r=-0.658、-0.691、-0.732,均P<0.05),与Ccr呈正相关(r=0.688,P<0.05),血NLR与HDP患者尿素氮、肌酐、UAE呈正相关(r=0.639、0.675、0.704,均P<0.05),与Ccr呈负相关(r=-0.624,P<0.05)。Logistic多元逐步回归分析显示,尿Netrin-1是HDP患者发生肾功能损伤的保护因素(OR=0.582,95%CI 0.341~0.807),NLR是其独立危险因素(OR=1.412,95%CI 1.116~1.756)。结论Netrin-1、NLR与HDP患者病情严重程度密切相关,有助于评估HDP患者早期肾损伤状态。

尿神经突起导向因子1、肾损伤分子-1、视黄醇结合蛋白水平与妊娠期高血压疾病早期肾损伤的关系研究

目的:研究尿神经突起导向因子1(Netrin-1)、肾损伤分子-1(Kim-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)水平与妊娠期高血压疾病(HDCP)早期肾损伤的关系。方法:将我院从2017年2月2020年2月收治的HDCP患者80例纳入研究,按照HDCP严重程度分作妊娠期高血压组22例、轻度子痫前期组32例、重度子痫前期组26例,另随机选取同期于我院接受规律孕产检以及分娩正常妊娠孕妇40例作为正常妊娠组,检测并比较各组尿Netrin-1、Kim-1、RBP水平。此外,将HDCP患者按照是否出现早期肾损伤分作肾功能损伤组42例和肾功能正常组38例,比较两组尿Netrin-1、Kim-1、RBP以及肾功能指标水平,并进行相关性分析,通过Logistic回归分析HDCP早期肾损伤的影响因素。结果:正常妊娠组、妊娠期高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组尿Netrin-1水平呈逐渐降低趋势,而尿Kim-1、RBP水平均呈逐渐升高趋势,多组数据间两两对比差异均有统计学意义(均P<0.05)。肾功能损伤组尿Netrin-1水平低于肾功能正常组,而尿Kim-1、RBP以及血尿素氮、血肌酐、24 h尿白蛋白排出量(UAE)水平均明显高于肾功能正常组(均P<0.05)。经Pearson相关性分析可得:HDCP早期肾损伤患者尿Netrin-1水平和血尿素氮、血肌酐、UAE均呈负相关关系,而Kim-1、RBP水平和血尿素氮、血肌酐、UAE均呈正相关关系(均P<0.05)。经Logistic回归分析发现:尿Netrin-1是HDCP早期肾损伤的保护因素,而尿Kim-1、RBP是HDCP早期肾损伤的危险因素(均P<0.05)。结论:随着尿Netrin-1水平的降低以及Kim-1、RBP水平的升高,HDCP早期肾损伤风险越高,检测尿Netrin-1、Kim-1、RBP水平可能有助于评估HDCP的病情严重程度和肾功能损伤。

TNF-α和Neuritin在四肢骨折合并脊髓损伤患者血清中的表达变化及临床意义

目的探讨血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和神经突起因子(Neuritin)水平在四肢骨折伴脊髓损伤中对骨折愈合的作用。方法选择2016年5月~2017年4月收治的42例单纯骨折患者(单纯骨折组)、26例单纯脊髓损伤患者(单纯脊髓损伤组)、30例四肢骨折合并脊髓损伤患者(四肢骨折合并脊髓损伤组);同期选取48例在体检中心行健康体检的正常人(正常组)。采用酶联免疫吸附(ELISA)技术检测血清TNF-α和Neuritin水平在各病例组术后第3、7、14天的变化情况,同时检测其在正常组中的表达水平。结果术后不同时间段,单纯骨折组、单纯脊髓损伤组、四肢骨折合并脊髓损伤组血清TNF-α、Neuritin含量呈动态表达现象,且均高于正常组,其中以四肢骨折合并脊髓损伤组变化最大,其TNF-α、Neuritin变化幅度明显高于其他三组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论四肢骨折合并脊髓损伤患者外周血中TNF-α与Neuritin含量变化情况明显高于其余三组,表明与创伤骨折的修复存在密切关联,这两种因子可能在骨折愈合过程中共同发挥作用,故推断其可能是脊髓损伤后加速骨折愈合的关键因子。

β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定

目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。

人类新基因netrin-G_2的初步分析

Netrins是与层粘连蛋白相关的、高度保守的小分子分泌蛋白家族成员,在细胞迁移和轴突导向活动中具有重要的作用,其同源物在多种模式动物中均已发现.Netrins分为2个亚家族:netrins和netrin-Gs;其中的netrin-G亚家族各成员之间具有高度的相似性.目前,在人类中得到确证的只有netrin-G1,推测在人类中应该还有其它的netrin-G亚家族成员以及编码它的基因.从20周龄人胚中提取脑组织的总RNA,用PCRcDNA文库试剂盒制备脑组织cDNA文库,再用特异性引物进行PCR扩增,得到1条人netrin-G的全长cDNA,命名为人netrin-G2,用Northern杂交研究其表达,用进化树分析其与netrin家族各成员间的关系;证实人netrin-G2确实为netrin-G亚家族的1个新成员,该基因位于染色体的9q34,大小为2428bp,含有1个1593bp的假定开放阅读框,起始密码子为86位的甲硫氨酸,终止密码子为1678位的TGA,可编码1个大小为530个氨基酸的蛋白质;Northern杂交显示,人netrin-G2在脑组织中特异性表达,而在其它组织中却很少发现,推测人netrin-G2可能在中枢神经系统的发育过程中具有重要的作用,可能与刺激性神经冲动的传递以及神经调节有关.

Neuritin对细胞水平中TUBB3蛋白表达的影响

目的:探讨神经突起因子(Neuritin)对细胞水平中β-微管蛋白Ⅲ型(classⅢbeta-tubulin TUBB3)蛋白表达的影响,旨在为紫杉醇化疗耐药性的相关研究提供理论依据。方法:利用真核基因表达技术和RNA干扰技术使人胚肾细胞水平中Neuritin高表达、低表达及TUBB3高表达,通过Western-blot技术检测Neuritin蛋白和TUBB3蛋白的表达情况。结果:Neuritin高表达时TUBB3高表达,Neuritin低表达时TUBB3表达降低,TUBB3蛋白的表达量与对照组比较差异有统计学差异(P<0.05);TUBB3高表达对细胞水平中Neuritin的表达水平无影响,Neuritin蛋白的表达量与对照组比较无统计学差异(P>0.05)。结论:Neuritin可能为TUBB3的正向调节因子或修饰分子,对TUBB3的表达起调控作用。

APPswe/PS1dE9双转基因小鼠中轴突异常与阿尔茨海默病的联系

目的探究阿尔茨海默病(AD)模型小鼠(APPswe/PS1dE9双转基因小鼠)中出现的神经元轴突异常及其可能的发生机制。方法RT-qPCR分别测定野生型及APPswe/PS1dE9双转基因小鼠体内神经突起导向因子(netrin)和结肠癌缺失基因(DCC)的表达量;用免疫细胞染色分别测量其海马区神经元轴突长度。结果与野生型相比,APPswe/PS1dE9双转基因小鼠海马区神经元轴突出现明显的缩短,且其脑内netrin-1(P<0.001)、DCC1和DCC2的表达量均有上升(P<0.01)。结论轴突的变化与AD的发生存在一定联系,这样的联系可能通过netrin-1与DCC的相互作用产生。