神经纤毛蛋白质1、存活素双基因联合沉默抑制鼻咽癌细胞生长增殖的研究

目的构建同时表达神经纤毛蛋白质1(NRP-1)和存活素(Survivin)双基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,通过体内外实验,观察其对鼻咽癌细胞CNE-2Z生长增殖的影响。方法构建同时表达NRP-1和Survivin双基因的质粒(Plasmid-1),并构建单独表达NRP-1和Survivin基因质粒(分别为Plasmid-2、Plasmid-3)。转染入鼻咽癌CNE-2Z细胞株,于荧光显微镜观察质粒转染及表达情况;以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;定量聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blot)在mRNA水平和蛋白水平上检测目的基因抑制作用。建立稳定转染裸鼠移植瘤模型,体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果。原位缺口末端标记法(TUNEL)法检测移植瘤细胞凋亡率。多组间比较采用单因素方差分析。结果通过测序证实重组shRNA真核表达载体构建成功。各重组质粒表达载体成功转染CNE-2Z细胞,可见大量的癌细胞表达绿色荧光。MTT显示细胞增殖受到抑制,且双基因干扰质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因干扰质粒,差异有统计学意义(0.209±0.021比0.392±0.013、0.384±0.014,F=354.121,P<0.05)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)证实双基因联合沉默组和单基因沉默组均能有效抑制目的基因mRNA表达,双基因组NRP-1 mRNA(0.20±0.06)表达明显低于NRP-1单基因组(0.27±0.05),差异有统计学意义(F=198.437,P<0.05);双基因组Survivin mRNA表达(0.13±0.02)明显低于Survivin单基因组(0.17±0.01),差异有统计学意义(F=245.647,P<0.05)。Western blot检测结果双基因组对NRP-1和Survivin蛋白的表达抑制率分别为67.41%和79.24%,与单基因组比较均有统计学意义(F=129.354、216.411,P<0.05)。体内抑瘤实验证实,与NRP-1单基因干扰组[(0.628±0.013)cm3]、Survivin单基因干扰组[(0.601±0.301)cm3]比较,双基因干扰组[(0.205±0.002)cm3]瘤体积生长明显受到抑制,差异有统计学意义(F=49.214,P<0.05),抑瘤率为81.71%。TUNEL实验表明双基因干扰组凋亡指数[(49.84±1.98)%],显著高于NRP-1单基因组[(21.53±2.01)%,P<0.05]和Survivin单基因组[(19.91±2.11)%],差异有统计学意义(F=254.130,P<0.05)。结论同时表达两个不同基因的shRNA质粒载体转染鼻咽癌细胞后,可同时敲降NRP-1和survivin基因表达,与单个基因沉默比较,可以更好的促进细胞凋亡,抑制细胞生长增殖。

肝细胞生长因子及其受体与神经纤毛蛋白1在骨肉瘤中的表达及意义

目的检测骨肉瘤组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(C-met)和神经纤毛蛋白1(NRP1)的表达特征,探讨三者的关系及临床意义。方法选择70例骨肉瘤术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择50例成熟的骨组织脱钙后的蜡块及临床资料作为对照组,应免疫组织化学技术检测2组中HGF、C-met和NRP1蛋白的表达,探讨HGF、C-met和NRP1在肿瘤患者不同临床病理特征的表达差别及其相关性。结果观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率与肿瘤的转移、脉管浸润、临床分期及Ki67的表达密切相关。观察组中HGF、C-met和NRP1之间的表达具有正相关性。结论骨肉瘤组织中HGF、C-met和NRP1高表达,三者对病变的进展具有重要作用,术后联合检测HGF、C-met和NRP1的表达可能对判断预后有一定价值。

神经纤毛蛋白1和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系

目的探讨神经纤毛蛋白1(NRP1)和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系。方法选取107例肺癌患者和79例正常患者的蜡块组织,分为观察组和对照组,通过免疫组化技术检测所有组织中的NRP1、C-MET的阳性表达率和MVD值,采用统计学方法对两组值进行对比并比较观察组的不同临床症状与的NRP1、CMET的阳性表达率和MVD值的相关性。结果观察组的NRP1、C-MET的表达和MVD值明显高于对照组(P<0.05)。NPR1、C-MET阳性率,MVD值与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、胸膜侵犯、Ki67表达、脉管浸润有明显相关性(P<0.05)。NRP1的阳性率与C-MET的阳性率存在正相关性(r=0.485,P<0.001),NRP1的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.447,P<0.001),C-MET的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.493,P<0.001)。结论 NRP1和C-MET在非小细胞肺癌中存在高表达,二者均可促进肿瘤血管的生成,同时还存在一定的正向协同作用。

神经纤毛蛋白-1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

【目的】探讨神经纤毛蛋白-1（Neuropilin-1，NRP-1）在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义。【方法】收集42例口腔鳞状细胞癌、癌旁正常组织作为实验标本，用免疫组织化学方法检测NRP-1原位表达情况，采用RT—PCR检测NRP—1 mRNA在口腔鳞状细胞癌、癌旁组织中的表达情况。【结果】本组42例口腔鳞状细胞癌组织中NRP-1均为高表达，42例癌旁正常组织中的NRP-1表达均呈阴性；癌组织NRP-1mRNA为（0．59±0．15），显著高于癌旁正常组织（0．43±0．17），且两者相比较差异具有显著性（P〈0．05）；〉3am的口腔鳞状细胞癌NRP-1 mRNA为（0．63±0．1）显著高于≤3cm的组织；周围组织及淋巴结转移的NRP-1 mRNA表达为（0．67±0．20），显著高于局部无转移的组织，且两者相比较差异具有显著性（P〈0．05）。【结论】口腔鳞状细胞癌中NRP-1为高表达，且可能参与口腔鳞状细胞癌的生长、转移过程中。

Nrp1^＋T细胞对淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响

目的探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp+T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响。方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1+T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-nA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况。采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1+T细胞、CD4+CD25+Treg细胞和CD4+CD25-T细胞各1×106个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI1640培养基)。对比观察各组移植皮肤的存活情况。结果加入Nrp1+T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169)。实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1+T细胞者为20.66±1.11d,注入Nrp1-T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4+CD25+Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01)。结论Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4+CD25+Treg相比,注入Nrp1+T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间。

神经纤毛蛋白1基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响

目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin1,NRP1)基因RNA干扰质粒对胃腺癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法构建NRP1基因特异性shRNA表达质粒,经脂质体介导转染入人胃腺癌SGC7901细胞。采用Western blot法检测细胞中NRP1蛋白的表达水平,应用流式细胞术和Annexin-V-FITC/PI法检测细胞的增殖水平和凋亡率。结果经酶切及测序鉴定证明,shRNA-NRP1质粒构建正确,转染SGC7901细胞48h后,能有效抑制NRP1蛋白的表达,G0/G1期细胞百分比显著升高,S期细胞显著减少,细胞凋亡率增加。结论 shRNA-NRP1质粒能有效抑制胃腺癌SGC7901细胞株NRP1蛋白的表达,细胞周期阻滞在G0/G1期,从而降低细胞的增殖水平,诱导细胞进入凋亡期。

血管内皮生长因子通过神经纤毛蛋白-1受体防护6-羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)对6羟基多巴胺(6OHDA)诱导的PC12细胞变性损伤的保护及机制。方法用PC12细胞制作帕金森病细胞模型,采用四甲基偶氮唑蓝法检测暴露于梯度浓度VEGF165后细胞的活性;流式细胞术检测对照组、损伤组(单加6OHDA)、VEGF组(单加VEGF165)和VEGF保护组(同时加6OHDA和VEGF165)细胞凋亡率(每组5个样本);免疫印迹法检测PC12细胞VEGF165及其受体fms样酪氨酸激酶1(Flt1)、胎肝激酶1(Flk1)、神经纤毛蛋白1(Nrp1)的表达,并观察VEGF165及其受体中和抗体对VEGF165作用的影响。结果随着VEGF165的浓度增加到50～100ng/ml时,PC12细胞吸光度由0.14±0.06逐步上升至0.35±0.08(P<0.01),随后又稍下降;细胞凋亡率VEGF保护组(29.65%±6.63%)低于损伤组(57.10%±5.66%),但高于VEGF组(3.67%±1.51%)和对照组(4.76%±1.06%,P<0.01);免疫印迹实验检测到PC12细胞有VEGF165及Flt1和Nrp1的表达,而未检测到Flk1;抗VEGF165和抗Nrp1中和抗体可阻断VEGF165的作用,而抗Flt1抗体无作用。结论VEGF165可保护PC12细胞因6OHDA造成的损伤,Nrp1受体在其中发挥重要作用。

神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子促HaCaT细胞增殖的研究

目的探讨神经纤毛蛋白-1（neuropilin-1，NRP-1）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）在血管内皮生长因子vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）促HaCaT细胞增殖中的可能机制。方法培养HacaT细胞，转染NRP-1质粒EX-00008-M02，采用逆转录（RT）-PCR法检测转染后NRP-1mRNA表达，蛋白免疫印迹法检测NRP-1蛋白质表达。将部分培养的HaCaT细胞分为脂质体对照组、对照质粒组以及目的质粒组分别予以脂质体、对照质粒pReceiver-M02及目的质粒EX-00008-M02转染，各组分别加入PBS、MEKI抑制剂（U0126）、VEGF或U0126联合VEGF进行处理后，噻唑蓝（MrITI、）法检测HaCaT细胞增殖的改变，蛋白免疫印迹法观察ERKl／2的磷酸化情况以及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。采用One—wayANOVA检验组间差异，LSD法进行多重比较和校正。结果RT—PCR和蛋白免疫印迹实验结果提示EX-00008-M02质粒转染可有效促进HaCaT细胞NRP-1mRNA及其蛋白质的表达。与脂质体对照组（A570值0．63±0．07）及对照质粒组（A570值0．62±0．13）比较，目的质粒组HaCaT细胞增殖活性（A570值0．88±0．14）明显增强，F=8．755，P〈0．05。与对照质粒VEGF刺激组（A570值0．88±0．10）比较，目的质粒VEGF刺激组HacaT细胞的增殖活性（A570值1．14±0．18）亦明显增强，F=4．591，P〈0．05。与目的质粒VEGF刺激组比较，U0126预处理可以明显抑制VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用（A570值0．50±0．13，F=42．106，P〈0．01）。蛋白免疫印迹结果提示与对照质粒转染细胞比较，目的质粒转染后VEGF对HaCaT细胞ERKl／2的促磷酸化及促PCNA表达得到明显提高，然而此作用可以被U0126有效抑制。结论ERKl／2信号通路的激活在NRP-1蛋白介导的VEGF促HaCaT细胞增殖作用中可能发挥关键性作用。

siRNA-NRP1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨神经纤毛蛋白1(Neuropilin 1,NRP1)基因小干扰RNA(siRNA)质粒对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用。方法设计靶向人NRP1基因的siRNA序列,合成一对互补的寡核苷酸,退火后克隆至质粒pGenesil-1.1上,构建重组质粒siRNA-NRP1;将人胃癌细胞SGC7901注入裸鼠右臀部皮下,构建移植瘤模型,成瘤后将重组质粒siRNA-NRP1注入瘤内,观察裸鼠临床表现,并测定裸鼠移植瘤的体积及重量;病理切片观察肿瘤组织及血管生长情况;免疫组化方法观察裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度。结果酶切分析及测序鉴定证实目的寡核苷酸片段已克隆至质粒pGenesil-1.1中;siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤的体积及重量均小于对照组(P<0.01);病理切片显示siRNA-NRP1组肿瘤细胞坏死较对照组明显;免疫组化显示siRNA-NRP1组裸鼠移植瘤中NRP1的表达及微血管密度均低于对照组(P<0.01)。结论通过siRNA-NRP1抑制裸鼠胃癌移植瘤中NRP1的表达,可影响裸鼠移植瘤中血管的生成,最终抑制肿瘤的生长。

shRNA沉默NRP-1基因抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的体内外研究

目的 构建靶向神经纤毛蛋白质1（Neuropilin-1,NRP-1）的短发卡RNA （shRNA）表达载体,观察NRP-1对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z细胞生长增殖的影响.通过体内裸鼠成瘤实验观察最优质粒对肿瘤的抑制效果.方法 根据NRP-1 mRNA序列设计并构建3个靶向NPR-1基因,并含荧光素标记的shRNA真核表达载体（pSilencer-shRNA1、pSilencer-shRNA2和pSilencer-shRNA3）;以脂质体Lipofectamine 2000转染的方法将shRNA表达质粒转导入CNE-2Z细胞及裸鼠瘤体内,于激光共聚焦荧光显微镜观察shRNA转染表达情况;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性;实时定量PCR（RT-PCR）检测NRP-1基因在mRNA水平表达的抑制作用;Western印迹法在蛋白水平上检测对目的基因的封闭效果.体内裸鼠成瘤实验观察质粒对肿瘤的抑制效果.结果 质粒成功转染CNE-2Z细胞及瘤体,可见大量的癌细胞表达绿色荧光.MTT实验证明NRP-1 shRNA抑制CNE-2Z细胞的生长增殖;RT-PCR结果表明NP-1的mRNA表达降低;Western印迹法结果验证目的基因蛋白同时表达下调;体内裸鼠成瘤实验证实转染6周后,转染组瘤体积生长较阴性对照组、空白对照组明显受到抑制[（0.599 ±0.002）比（1.141 ±0.013）、（1.165 ±0.308）cm^3,均P＜0.05],抑瘤率为48.6％.结论 表达shRNA的NRP-1基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外鼻咽癌细胞,沉默NRP-1基因能有效抑制鼻咽癌细胞生长增殖.为鼻咽癌基因治疗奠定了良好的实验基础。

131I标记抗NRP-1单克隆抗体A6在荷瘤裸鼠体内分布和显像研究

目的制备131I标记的抗神经纤毛蛋白-1（NRP-1）单克隆抗体A6（131I-A6），探讨其作为NRP-1靶向显像新型分子探针的可行性。方法（1）采用Iodogen法对A6进行131I标记，检测其标记率、放化纯和体外稳定性。（2）以人胶质瘤细胞株U87MG为实验细胞进行体外实验，测定131I—A6生物学活性、结合率及其与受体的亲和力。（3）将荷U87MG胶质瘤模型裸鼠采用随机抽样法分为5组，每组5只，分别于注射1．2MBq 131I-A6后24、48、72、96和120h处死，计算各脏器放射性摄取（％ID／g）、肿瘤／血液（T／B）和肿瘤／肌肉（T／M）比值。（4）取6只荷瘤裸鼠，以随机抽样法分为未阻断组和竞争阻断组，前组注射3．7MBq 131I-A6；后组注射3．7MBq 131I-A6和未标记的700仙gA6，均分别于注射后24、48、72、96和120h行SPECT／CT显像。采用两样本t检验对实验数据进行统计学分析。结果（1）131I—A6标记率为（95．46±3．34）％，放化纯〉95％；131I—A6在室温下PBS溶液中放置至96h，其放化纯仍〉85％。（2） 131I-A6与U87MG胶质瘤细胞特异性结合率1h达到最高值，为（15．80±1．30）％，在加入未标记的抗体A6时，U87MG细胞对131I-A6明显受抑制（t=2．862，P〈0．05）；与细胞表面抗原的亲和力（kd）为（1．67±0．14）nmol／L。（3）24h时131I—A6在荷瘤裸鼠血液放射性最高，为（8．00±1．42）％ID／g；其次是肝脏和肿瘤组织，分别为（7．68±1．56）和（6．00±1．24）％ID／g；脑、骨、肌肉组织放射性计数较低。给药后24h，T／B和T／M分别为0．78±0．10和3．20±0．30，随时间延长比值逐渐增高，在120h达到最高，分别为1．87±0．50和7．13±0．24。（4）体内显像示，注射 131I-A6后24h肿瘤略显影，随时间延长变清晰，120h显影为最清晰，阻断后未见肿瘤显影。结论 131I-A6的标记方法简单易行，标记率高，产物稳定性好，具有良好的NRP-1靶向性和特异性，有望成为一种新型肿瘤诊断和治疗的药物。

新型αvβ3和Neuropilin-1双靶点正电子成像探针18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR用于脑胶质瘤的PET显像研究

目的 构建可靶向αvβ3和血管内皮生长因子受体Neuropilin-1（NRP-1）双受体的正电子成像探针，并验证双靶点融合肽探针较之单靶点探针的优越性。方法 采用^18F-氟化铝（^18F-FAl）配合物的方法实现分子探针的18F标记。在人神经胶质瘤U87MG细胞中，检测αvβ3和NRP-1的表达水平，测定分子探针精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）-丙氨酸-苏氨酸-色氨酸-亮氨酸-脯氨酸-脯氨酸-精氨酸（ATWLPPR）与αvβ3/NRP-1的受体-配体亲和力。在U87MG荷瘤裸鼠模型中，测定18F标记RGD-ATWLPPR的体内肿瘤micro-PET显像特性，并且与其对应单体进行比较分析。采用方差分析和t检验对结果进行统计学分析。结果 αvβ3及NRP-1在U87MG肿瘤细胞、肿瘤组织及肿瘤新生血管中均有较高水平的表达。受体-配体亲和力测定的实验结果显示，^18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR双靶点融合肽与αvβ3及NRP-1的亲和力并未明显优于其单体，但融合肽在U87MG细胞中的摄取高于相应的单体肽。Micro-PET显像结果显示，融合肽较其单体肽RGD[（4.86±0.48）% ID/g vs.（3.33±0.15）% ID/g，t=10.21，P〈0.05]和ATWLPPR[（4.86±0.48）% ID/g vs.（2.28±0.41）% ID/g，t=32.16，P〈0.05]表现出了更好的显像效果，且融合肽在αvβ3、NRP-1任一受体被未标记“冷”肽阻断的情况下仍能获得肿瘤的阳性显像结果。结论 ^18F-FAl-NOTA-RGD-ATWLPPR可以灵敏地对整合素αvβ3和NRP-1中任何一个受体高表达的肿瘤进行显像，并且较其单体具有更高的肿瘤摄取，但该融合肽的受体-配体亲和力还有待进一步提高。

NRP-1基因对人膀胱尿路上皮癌细胞迁移和侵袭及血管新生能力的作用研究

目的 通过RNA干扰的方法确定最佳靶点用于NRP-1基因功能研究.在两株膀胱尿路上皮癌细胞中采用慢病毒干扰NRP-1基因表达,探讨NRP-1基因对膀胱尿路上皮癌细胞迁移和侵袭及血管新生能力的影响,为膀胱尿路上皮癌的发病机制,转移机制提供了理论基础.方法 采用Western Blot筛选出两株NRP-1表达丰度较高的细胞.设计NRP-1的RNA干扰靶点,构建干扰载体并包装至慢病毒载体中,通过qPCR和Western Blot筛选出能同时在上述两株细胞中有效干扰NRP-1的最佳靶点.分别感染两株膀胱尿路上皮癌细胞对照慢病毒和干扰NRP-1基因慢病毒载体,通过Transwell及血管新生法验证NRP-1对膀胱尿路上皮癌细胞的侵袭,转移和促进周围血管新生能力.结果 通过Transwell小室法发现,对照慢病毒感染的两株膀胱尿路上皮癌细胞体外的侵袭和迁移能力显著地高于NRP-1干扰慢病毒感染的细胞,NRP-1干扰对T24细胞的体外侵袭和迁移抑制率分别为51％和72％ （P ＜0.05）,NRP-1干扰对5637细胞的体外侵袭和迁移抑制率分别为61％和65％（P＜0.05）;通过血管新生实验发现,相较于对照病毒感染组,NRP-1干扰组两株膀胱尿路上皮癌细胞对血管内皮细胞的血管生成能力影响降低,干扰组对血管新生的调控能力下降率在T24和5637细胞中分别为21％和28％ （P ＜0.05）.结论 NRP-1慢病毒RNA干扰对膀胱尿路上皮癌细胞的迁移和侵袭具有抑制能力,NRP-1干扰对膀胱尿路上皮癌细胞周围血管新生能力具有抑制能力.

CpG ODN1826体内增强人肺癌细胞株A549对放射治疗的敏感性

目的观察CpGODN对荷瘤鼠肺癌皮下种植瘤生长和血管生成的作用。方法建立荷瘤鼠皮下种植瘤模型,随机分为4个治疗组:单纯给药组[CpGODN1826(1μg/μl)]、照射给药组[CpGODN1826(1μg/μl)+β射线(RT:8Gy)]、对照照射组[生理盐水(NS:100μl/只)+β射线(RT:8Gy)]、对照组[生理盐水(NS:100μl/只)]。接种肺癌细胞后7d开始瘤内注射药物并照射5d,计算抑瘤率。免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、neuropilin-1(NRP-1)的表达,RT-PCR法测定瘤组织中VEGF-CmRNA、NRP-1mRNA的表达。结果在抑瘤率方面,CpGODN1826+RT组抑瘤率为(69.80±26.54)%,显著高于CpGODN1826组(21.5±14.96)%、NS+RT组(15.10±49.45)%和NS组,差异有统计学意义(P<0.01)。四组荷瘤鼠肿瘤组织中VEGF-C的阳性表达率分别为10%(1/10)、50%(5/10)、80%(8/10)、100%(10/10);NRP-1的阳性表达率分别为10%(1/10)、40%(4/10)、90%(9/10)、100%(10/10)。在NRP-1和VEGF-C阳性表达率方面,CpGODN1826+RT组和CpGODN1826组的阳性表达率显著低于NS+RT组和NS组(P<0.01),CpGODN1826+RT组明显低于CpGODN1826组(P<0.01)。VEGF-CmRNA相对表达水平分别为18.34±3.19、29.62±3.14、51.13±2.81、53.46±5.67;NRP-1mRNA相对表达水平分别为23.57±5.73、34.72±5.13、59.95±4.76、62.49±6.34,CpGODN1826+RT组和CpGODN1826组较NS+RT组和NS组显著下降(P<0.01),CpGODN1826+RT组明显低于CpGODN1826组(P<0.01)。结论 CpGODN1826可显著抑制荷瘤鼠种植瘤的生长,其作用机制可能与抑制VEGF-C和NRP-1的表达、抑制血管生成有关。

Neuropilin-1在胰腺导管癌及MIA PaCa-Ⅱ细胞系中的表达及意义

目的探讨Neuropilin-1在胰腺导管癌组织及MIAPaCa-Ⅱ胰腺癌细胞系中的袁达及意义。方法运用免疫组化和RT—PCR法分别检测正常胰腺组织、癌旁组织、胰腺癌组织及MIAPaCa-Ⅱ细胞系中Neuropilin-1蛋白及mRNA表达水平。结果蛋白水平可见正常胰腺组织无表达，癌旁组织轻度表达，而胰腺癌组织及MIAPaCa-Ⅱ胰腺癌细胞中高水平表达。神经组织也可表达Neuropilin-1。mRNA水平见正常胰腺组织微量表达，癌旁组织中度表达，而胰腺癌组织及MIAPaCa-Ⅱ胰腺癌细胞中高水平表达。结论Neuropilin-1可能参与了胰腺癌的发生发展，在胰腺癌神经转移中可能起着重要作用。

NRP-1在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的明确神经纤毛蛋白质1（NRP-1）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达情况及其临床意义。方法收集151例HCC组织和89例正常肝组织标本，应用免疫组织化学染色法检测其中NRP-1蛋白的表达情况。单因素及多因素统计分析NRP-1表达与HCC患者临床病理指标的关系，并以生存分析比较不同NRP-1表达水平患者的生存情况。结果失访或随访期间因非HCC疾病死亡的病例共11例，最终进入研究的有效病例为140例。NRP-1在HCC组织和正常肝组织中的阳性表达率分别为65.00%、35.96%，差异有统计学意义（χ2=18.843，P〈0.001）。按照NRP-1的表达水平，将140例HCC患者分为阴性表达组49例，阳性表达组91例。单因素分析结果显示，NRP-1在HCC中的表达与肿瘤数目（χ2=8.025，P=0.005）、TNM分期（χ2=26.467，P〈0.001）、分化程度（χ2=15.296，P〈0.001）、门脉侵袭（χ2=9.054，P=0.003）以及肝静脉侵袭（χ2=5.928，P=0.015）有关。多因素分析结果显示，TNM分期（OR=1.392，95%CI为1.121～1.730，χ2=8.950，P=0.003）、分化程度（OR=1.469，95%CI为1.102～1.958，χ2=6.862，P=0.009）、门脉侵袭（OR=1.829，95%CI为1.157～2.893，χ2=6.665，P=0.010）及肝静脉侵袭（OR=2.161，95%CI为1.172～3.987，χ2=6.084，P=0.014）是NRP-1表达的影响因素。NRP-1阴性组HCC患者的中位生存时间显著长于阳性组患者（44个月∶23个月），差异有统计学意义（χ2=21.922，P〈0.001）。结论NRP-1在HCC组织中呈过表达趋势，与HCC的恶性程度密切相关，其表达增高提示患者预后不良。

调节性T细胞及调节性B细胞在免疫性血小板减少症中作用的研究进展

免疫性血小板减少症(ITP)为一种获得性自身免疫性出血性疾病,该病以患者对自身抗原的免疫失耐受导致免疫介导的血小板破坏增多与生成不足为特征。近年来,研究发现调节性T细胞(Treg)、调节性B细胞(Breg)等免疫抑制性细胞亚群数量和(或)功能的异常,在ITP的发生、发展中发挥重要作用。阐明Treg、Breg与ITP发病的关系,有望为ITP的治疗提供新思路。因此,笔者拟就Treg与Breg的免疫调节机制,及其在ITP发病机制中的作用的研究进展进行综述。