孕晚期妊娠期高血压患者血清串珠素、神经纤毛蛋白-1水平与病情、围生结局的关系

目的 探讨孕晚期妊娠期高血压患者血清串珠素(perlecan)、神经纤毛蛋白-1(NRP-1)水平与病情、围生结局的关系。方法 将2021年1月至2023年1月该院收治的103例孕晚期妊娠期高血压患者作为研究对象,根据病情严重程度将其分为单纯高血压组46例、轻度子痫组35例、重度子痫组22例。记录患者的围生结局情况,分为结局良好组72例和结局不良组31例。采用酶联免疫吸附试验法检测血清perlecan、NRP-1水平,采用受试者工作特性(ROC)曲线分析探讨血清perlecan、NRP-1对孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的影响因素。结果 轻度子痫组、重度子痫组血清perlecan、NRP-1水平低于单纯高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);重度子痫组血清perlecan、NRP-1水平低于轻度子痫组,差异有统计学意义(P<0.05)。结局良好组血清perlecan、NRP-1水平高于结局不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清perlecan、NRP-1两项指标联合预测孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的临床效能优于单项指标预测。结局不良组年龄≥35岁占比、孕前体重指数(BMI)≥24 kg/m2占比、有流产史占比、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白高于结局良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,孕前BMI≥24 kg/m2、有流产史、收缩压高、perlecan≤8.63 nmol/L、NRP-1≤4.37 ng/mL是孕晚期妊娠期高血压患者不良围生结局的独立危险因素(P<0.05)。结论 血清perlecan、NRP-1水平降低与孕晚期妊娠期高血压患者的病情加重及不良围生结局有关,两项指标可作为预测患者围生结局的生物学标志物。

基于CiteSpace的神经纤毛蛋白-1研究的可视化分析

目的运用CiteSpace分析神经纤毛蛋白-1(NRP1)的研究现状、热点和趋势。方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网及Web of Science核心合集数据库从建库至2022年9月NRP1的相关文献,利用CiteSpace对年份、作者、机构及关键词进行可视化分析。结果共纳入中文文献536篇和英文文献2444篇,年发文量呈现波动上升趋势。中文文献发文量最多的作者是颜江华和韩正祥,英文作者是Ruhrberg,Christiana。厦门大学和哈佛大学分别是中英文文献发文量最多的机构。胃癌、血管生成、乳腺癌是中文研究热点,表达、受体、内皮生长因子是英文研究热点。结论NRP1的研究仍处于发展阶段,研究热点和趋势是机制和临床研究。团队间应加强合作,使研究更为系统。

血清可溶性神经纤毛蛋白-1、肉碱棕榈酰转移酶1A、网膜素-1水平与乳腺癌患者临床特征及预后关系研究

目的探讨血清可溶性神经纤毛蛋白-1(NRP-1)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)、网膜素-1(Omentin-1)水平与乳腺癌患者临床特征及预后的关系。方法选取自2017年1月至2018年12月收治的乳腺癌患者135例(乳腺癌组)。另选同期的健康体检者100例(健康组)。检测各组血清sNRP-1、CPT1A、Omentin-1水平。随访2年,详细记录患者的预后状况,并应用多因素Logistics回归分析影响患者临床预后的相关因素。结果乳腺癌组血清sNRP-1、CPT1A显著高于健康组,Omentin-1水平低于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤分化程度、淋巴结转移情况及临床分期的乳腺癌患者,血清sNRP-1、CPT1A、Omentin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者预后不良组血清sNRP-1、CPT1A水平高于预后良好组,血清Omentin-1水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析结果显示,肿瘤低分化、淋巴结转移、临床分期Ⅲ期、血清sNRP-1和CPT1A升高、血清Omentin-1降低是影响乳腺癌患者不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌患者血清sNRP-1、CPT1A、Omentin-1水平与患者临床病理特征和预后不良有关,肿瘤低分化、淋巴结转移、临床分期Ⅲ期、血清sNRP-1和CPT1A升高、血清Omentin-1降低是影响乳腺癌患者不良预后的独立危险因素。早期联合检测血清sNRP-1、CPT1A、Omentin-1对判断患者的生存预后有较高的临床价值。

神经纤毛蛋白-1的干扰RNA通过诱导结直肠癌细胞p27核转位影响细胞自噬与凋亡水平的研究

目的探究RNA干扰神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞自噬与凋亡的影响及其机制。方法将人结直肠癌细胞系DLD-1随机分为对照组、sh-NC组、sh-NRP-1组,进行慢病毒感染后收集各组细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting测定细胞的感染效果,CCK-8法检测细胞增殖活性,免疫荧光染色观察细胞内p27蛋白的亚细胞定位,Western blotting检测细胞质与细胞核内p27蛋白表达变化,透射电子显微镜观察细胞自噬情况,Western blotting检测细胞自噬相关蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果感染sh-NRP-1慢病毒液的细胞中NRP-1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05);与对照组和sh-NC组比较,sh-NRP-1组细胞增殖活性显著下降,细胞核内p27荧光染色明显增强,细胞质内p27蛋白相对表达量显著下调,而细胞核内p27蛋白相对表达量显著上调,可见较多双层膜的自噬小体,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1蛋白表达显著上调而p62蛋白表达显著下调,同时,细胞凋亡率显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论RNA干扰NRP-1能够抑制CRC细胞增殖活性,促进细胞自噬与凋亡,该作用可能与其调控p27蛋白的亚细胞定位有关。

神经纤毛蛋白-1与膜相关转化生长因子-β共表达对调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨神经纤毛蛋白-1（Nrp-1）与膜相关转化生长因子-β（TGF-β）共表达对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）免疫抑制功能的影响。方法体外培养Balb/c小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞，在抗CD3/CD28和脂多糖（LPS）诱导下，给予不同浓度的抗Nrp-1抗体（Ab-Nrp-1）封闭24 h后收集细胞，采用流式细胞分析仪检测细胞表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达。分别将不同浓度Ab-Nrp-1封闭1 h后的Treg与小鼠正常CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养，观察抗CD3/CD28和LPS诱导下12、24和48 h后对CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖能力的影响。结果在抗CD3/CD28和LPS诱导下，Treg表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达率明显增加（均P＜0.05），Treg膜相关TGF-β表达随着Ab-Nrp-1浓度的增加逐渐降低，呈明显的浓度依赖性（P＜0.05）；正常Treg与CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养后，能显著抑制CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖功能（P＜0.05），而不同浓度Ab-Nrp-1处理能逆转抑制作用，其中5μg/ml已达最大效应（P＜0.05），且24 h后作用最强，具有明显的浓度-时间依赖性（P＜0.05）。结论 Treg通过膜相关TGF-β发挥免疫抑制功能，共表达Nrp-1能够明显增强其免疫抑制作用。

神经纤毛蛋白-1与肿瘤的关系

神经纤毛蛋白‐1（neuropilin‐1，NRP‐1）为一种多功能信号传导跨膜蛋白，其参与转化生长因子‐β（TGF‐β）、血管内皮生长因子（VEGF）等信号通路的信号传导［1‐3］，在生长发育、免疫、肿瘤方面起着重要的作用。近年来关于 NRP‐1的研究已从最初的神经系统发育扩展到血管形成、肿瘤发生与发展、造血系统疾病、免疫系统功能等多个领域［4］，而关于NRP‐1在肿瘤发生、发展机制中的作用也逐渐成为研究热点。研究表明， NRP‐1表达于内皮细胞及肿瘤细胞，可作为血管内皮生长因子165（VEGF165）及与血管新生相关的其他几种VEGF家族成员的受体，在肿瘤血管新生方面发挥重要作用，N PR‐1在某些肿瘤中过度表达，是其不良预后的独立危险因素［5］。Teesa‐lu等［6］研究发现，具有C末端R／KXXR／K （X为任意氨基酸）特征的肿瘤导向肽能与NRP‐1高效、特异性结合，该类C末端元件依靠肿瘤识别序列与肿瘤细胞特异性结合，在细胞表面经肽酶剪切后暴露出C末端的R／KXXR／K序列，能被细胞表面的跨膜转运蛋白NRP‐1所识别结合，并携带进入细胞内部。

神经纤毛蛋白-1在肿瘤中的研究进展

神经纤毛蛋白-1为Ⅰ型跨膜糖蛋白,可作为轴突导向因子家族受体参与神经系统发育过程,同时还作为血管内皮生长因子家族受体表达于内皮细胞表面,参与血管新生。近年来研究表明,神经纤毛蛋白-1可表达于肿瘤细胞,通过与VEGF及其受体作用参与肿瘤血管生成过程,对肿瘤的发生、发展,肿瘤细胞的增殖和迁移产生影响。本文主要阐述了神经纤毛蛋白-1的结构与生物学关系、与血管内皮生长因子之间的相互作用关系,及其在常见肿瘤中的表达。

神经纤毛蛋白-1调控血管内皮细胞增殖迁移的功能作用和潜在机制研究

目的探讨神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP1)在血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cells,VECs)增殖迁移中的作用及潜在机制。方法通过基因干扰腺病毒靶向抑制NRP1的表达,行CCK-8实验研究NRP1下调后对VECs增殖活力的影响,采用流式细胞术研究NRP1下调后对VECs凋亡的影响,行Transwell实验研究NRP1下调后对VECs迁移能力的影响。此外,通过Western Blot检测NRP1下调后对其下游信号通路蛋白表达的影响。结果 CCK-8实验结果显示下调NRP1表达可抑制大鼠VECs的增殖活力[24 h(0.55±0.06)比(0.34±0.07);48 h(1.32±0.08)比(1.07±0.08);72 h(1.52±0.08)比(1.19±0.08),均P<0.05],流式细胞凋亡实验结果显示下调NRP1表达可促进大鼠VECs的凋亡[(24.55±3.89)%比(12.86±2.13)%,P<0.05],Transwell实验结果显示下调NRP1表达可抑制大鼠VECs的迁移能力[(83.00±15.72)比(185.00±28.01),P<0.05]。通过Western Blot检测发现NRP1下调后,下游信号通路蛋白Akt、ERK1/2及NFkB的磷酸化水平均显著降低。结论 NRP1可能通过激活PI3K/Akt、MAPK/ERK及NF-kB信号通路促进VECs的增殖与迁移,在静脉桥再内皮化进程中发挥潜在的促进作用。

神经纤毛蛋白-1与肿瘤血管生成的关系

神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)属跨膜糖蛋白,作为轴突导向分子(semaphorin,Sema)的受体,参与神经导向的调节,同时作为血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factorreceptor 2,VEGFR-2)的共受体表达于血管内皮细胞,参与血管新生的调节。近年已基本阐明NRP-1在神经系统中的作用,其在血管新生方面的研究亦逐渐深入。NRP-1可通过依赖血管内皮生长因子(VEGF)的方式或独立的方式参与肿瘤血管新生调节,同时在肿瘤生长及转移中发挥重要作用。NRP-1生物学特性取决于其独特的分子结构。综述NRP-1结构和生物学特性、与VEGF及其受体的相互作用、对肿瘤血管新生的影响及其在妇科肿瘤中的研究。

神经纤毛蛋白-1的研究进展

神经纤毛蛋白-1(neuropilin 1,Nrp1)是单次跨膜受体,属于Neuropilin家族。它是神经轴突导向因子3(semaphorin 3,Sema3)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)的特异性受体,既可调节神经系统中轴突的生长、导向和迁移,又与心血管系统的血管新生、病理性血管损伤的修复有关。另外,有大量研究表明Nrp1对肿瘤的发展起重要作用,提示Nrp1是肿瘤治疗的潜在靶点。最近,有研究发现Nrp1与肥胖诱导的胰岛素抵抗和脓毒症相关,揭示其在急、慢性炎症中的作用。我们在本文中综述了Nrp1的研究进展,以期更好的理解Nrp1在生理和病理情况下的功能。

神经纤毛蛋白-1的原核表达及兔抗小鼠神经纤毛蛋白-1抗体免疫学活性的研究

目的:在原核系统中分段表达神经纤毛蛋白-1(Nrp1);将纯化的蛋白免疫家兔后获得特异的抗体,并将其应用于检测组织和细胞中Nrp1分子的表达。方法:提取BALB/c胎鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR分段扩增获得Nrp1基因片段,将PCR产物插入表达载体pET28a(+),获得含5个Nrp1基因片段的重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达并纯化;将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔获得针对目的蛋白的特异性多克隆抗体;利用Nrp1特异性多抗检测胎鼠脑组织和HeLa细胞中Nrp1的表达。结果:在原核系统中分段表达了Nrp1蛋白,通过Ni-NTA纯化了Nrp1蛋白片段;纯化的Nrp1蛋白免疫新西兰大白兔获得了具有免疫活性的多抗;兔抗小鼠Nrp1特异性多抗可用于检测组织、真核细胞中Nrp1的表达。结论:应用原核系统成功地表达了Nrp1蛋白,兔抗小鼠Nrp1特异性多抗可用于免疫学检测Nrp1分子的表达。

直肠癌组织中神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子的表达与微血管形成的相关性

目的探讨直肠癌组织中神经纤毛蛋白-1(NRP-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达与微血管形成的关系与直肠癌的发生机制。方法采集2013-06~2015-06在该院接受手术切除并经病理证实的直肠癌标本64例(份),以及癌旁正常组织。采用免疫组织化学法对标本组织进行染色,测定直肠癌组织的微血管密度(MVD),用实时逆转录(RT-PCR)法检测NRP-1和VEGF mRNA的表达水平,分析两者与MVD的相关性。结果与癌旁正常组织相比,直肠癌组织染色程度明显增强,范围明显扩大。直肠癌组织的NRP-1mRNA、VEGF mRNA表达水平及阳性表达率、MVD均明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.01)。直肠癌组织中,肿瘤大小≥5 cm者NRP-1 mRNA表达水平明显低于<5 cm者,浸润深度在浆膜内、有淋巴结转移、Dukes分期为C期的直肠癌组织NRP-1 mRNA表达水平明显高于浸润深度在浆膜外、无淋巴结转移、Dukes分期为A、B期者(P<0.05);低分化、浸润在浆膜内及有淋巴结转移、Dukes分期为C期的直肠癌组织VEGF mRNA表达水平明显高于高中分化、浸润在浆膜外、无淋巴结转移、Dukes分期为A、B期者(P<0.05)。NRP-1 mRNA与VEGF mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);NRP-1、VEGF mRNA分别与MVD呈正相关(P<0.05)。结论 NRP-1的高表达与直肠癌的发生和进展密切相关,其可增强VEGF的活性,促进肿瘤新血管的形成,增强直肠癌的侵袭和转移能力,故可作为评价直肠癌病情发展的生物学指标。

血管内皮生长因子A和神经纤毛蛋白-1可预测贝伐单抗在晚期胃癌的疗效

Cutsem等通过检测入组AVAGAST研究的712例晚期胃癌患者治疗前血浆的血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGF—A）和肿瘤组织的神经纤毛蛋白-1、血管内皮生长因子受体1（vascular endothelial growth factor receptor 1，VEGFR-1）、VEGFR-2等分子标志物的表达水平，采用Cox比例风险模型进行评价。

神经纤毛蛋白-1过表达对异丙肾上腺素诱导心衰大鼠的保护作用研究

目的:探究神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1)过表达对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心衰大鼠心脏功能及心肌组织损伤的保护作用。方法:构建neuropilin-1过表达的腺病毒载体(Ad-neuropilin-1),采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)结合Western blot检测过表达效率;选取60只SD大鼠,随机分为对照(control)组、ISO组、ISO+Ad(阴性对照)组和ISO+Ad-neuropilin-1组,除control组外各组采用皮下注射ISO制成心衰大鼠模型,检测各组大鼠心脏功能,采用RT-PCR和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠心损标记物、炎性因子水平,HE染色、缺口末端标记法(TdT-medated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡情况,Western blot检测增殖细胞相关抗原Ki-67和半胱天冬酶(cysteine aspartase-3,Cas3)的表达。结果:相比control组,ISO+Ad-neuropilin-1组neuropilin-1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);相比control组,ISO组大鼠心率(heart rate,HR)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)、neuropilin-1、Ki-67蛋白表达水平均明显降低,血清心肌肌钙蛋白(cardiac troponin,c TnI)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CKMB)、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)mRNA水平、心肌细胞凋亡率、cleaved caspase-3/Cas3水平明显升高(P<0.05);相比ISO组,ISO+Ad-neuropilin-1组HR、LVFS、LVEF、neuropilin-1、Ki-67蛋白相对表达明显升高,cTnI、CK、CK-Mb、i NOS、IL-10 mRNA及外周血含量、心肌细胞凋亡率、cleaved caspase-3/Cas3水平均明显降低(P<0.05)。结论:neuropilin-1过表达可抑制ISO诱导的心衰大鼠心肌细胞凋亡及炎症反应,改善其心脏功能。

强化训练对脑缺血再灌注大鼠臂板蛋白3A及其受体神经纤毛蛋白-1表达的影响

目的观察不同强度运动训练对脑缺血再灌注大鼠脑内臂板蛋白3A（Sema3A）及其受体神经纤毛蛋白-1（NP．1）的表达以及缺血侧脑细胞凋亡的影响，探讨强化运动训练促进脑缺血再灌注大鼠运动功能恢复的可能机制。方法采用线栓法建立左侧大脑中动脉阻塞（MCAO）2h再灌注动物模型。60只造模成功的雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为训练1组、训练2组、训练3组、对照组（各15只鼠）。训练1组大鼠每天游泳1次，每次5min；训练2组大鼠每天游泳1次，每次10min；训练3组大鼠每天游泳2次，每次10min；对照组大鼠不做任何训练；另15只鼠为假手术组不阻塞大脑中动脉血流，不训练。采用Garcia神经功能缺损评分评价神经功能缺损情况。采用TUNEL染色观察缺血区大脑皮质细胞凋亡情况。应用免疫组织化学法对脑缺血后脑内神经生长抑制因子Sema3A及其受体NP-1的表达进行分析。结果假手术组神经行为功能正常。对照组各时间点的Garcia神经行为功能评分与假手术组同时间点比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；各训练组游泳训练7和14d后的Garcia神经功能评分明显优于同时间点对照组（P〈0．01），且训练3组神经功能评分提高最明显，其游泳训练3、7和14d后的Garcia神经功能评分分别为（12．80±0．45）、（15．204-0．45）和（16．80-4-0．45）分。游泳训练3、7和14d后，训练1组、训练2组、训练3组的Sema3A、NP-l及TUNEL各指标阳性细胞的表达均明显低于对照组相同时间点（P〈0．01），以训练3组更为明显。训练3组游泳训练3、7和14d后，TUNEL阳性细胞率分别为（29．43±1．38）％、（22．30±1．21）％和（17．58±1．70）％；Sema3A阳性细胞率分别为（19．64±1．17）％、（9．73-4-3．83）％和（8．24-t-O．87）％；NP-1阳性细胞率分别为（33．95-4-6．86）％、（27．95±1．29）％和（18．90±1．44）％，较其他各训练组的阳性细胞表达减少更明显（P〈0．01或0．05）。结论康复训练可减少脑缺血再灌注大鼠Sema3A、NP-1及TUNEL阳性细胞表达，促进其运动功能的恢复及神经功能重塑，强化运动训练的效果更明显。

含神经纤毛蛋白-1靶向序列的细胞穿透肽的合成及其与非小细胞肺癌的特异性结合研究

目的设计一类具有C末端基序的新型肿瘤穿透肽YCCS,并检测其对非小细胞肺癌的靶向结合能力。方法设计了融合肺癌靶向肽段CS及神经纤毛蛋白-1靶向肽段CRMP-1的新型多肽YCCS,采用Fmoc固相合成法合成多肽,并在多肽上标记荧光素FITC,以神经纤毛蛋白-1阳性的非小细胞肺癌A549、人乳腺癌MDAMB-231,以及神经纤毛蛋白-1阴性的正常人肺成纤维细胞HBE135-E6E7、正常人肝细胞HL-7702为研究对象,观察荧光标记的多肽与A549细胞的特异性结合能力。结果成功设计并合成了肿瘤穿透肽FITC-YCCS用于细胞结合研究,荧光细胞结合实验证实,在5μmol/L浓度下,YCCS多肽能特异性的与非小细胞肺癌A549结合,而基本不与乳腺癌细胞及正常细胞结合。随多肽浓度升高,在20μmol/L浓度下,YCCS多肽与乳腺癌细胞MDA-MB-231和肝细胞HL-7702出现少量结合。结论本研究设计的肿瘤穿透肽YCCS在5μmol/L浓度下,可检测到对非小细胞肺癌A549具有特异性结合能力。

神经纤毛蛋白-1和CD4＋CD25＋Treg在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的 研究神经纤毛蛋白-1（NRP-1）与CD4＋ CD25＋调节性T细胞（CD4＋ CD25＋Treg）在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义.方法 收集人脑胶质瘤标本41例,其中Ⅰ级11例,Ⅱ级8例,Ⅲ级12例,Ⅳ级10例（胶质母细胞瘤）.另取11例因颅脑创伤行内减压术患者的正常脑组织标本作为对照组.应用RT-PCR技术检测人脑胶质瘤组织和正常脑组织NRP-1的mRNA表达.流式细胞术检测上述组织中CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比率.结果 NRP-1 mRNA在胶质瘤和正常脑组织中均有不同程度表达,但在胶质瘤中的表达量明显高于正常脑组织,且在胶质瘤中表达程度随其病理分级的增高而增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;胶质瘤组织CD4＋ CD25＋ Treg细胞比率明显高于正常脑组织（P＜0.01）,在胶质瘤组织中CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比率随肿瘤病理分级增高而增高,差异有统计学意义（P ＜0.05）;NRP-1 mRNA表达程度和CD4＋ CD25＋ Treg细胞比率呈显著正相关（r=0.723,P＜0.05）.结论 NRP-1和CD4＋ CD25＋ Treg在脑胶质瘤中高表达,二者表达程度均与肿瘤的病理分级密切相关,NRP-1和CD4＋ CD25＋ Treg表达上调可能与肿瘤微环境的免疫耐受有关.

小干扰RNA介导神经纤毛蛋白-1对西地尼布治疗脑胶质细胞瘤细胞学功能的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)介导神经纤毛蛋白-1(NRP-1)对西地尼布(Ced)治疗脑胶质细胞瘤细胞学功能的影响,为脑胶质细胞瘤患者的个体化诊疗提供依据。方法选取3种恶性程度不同的人脑胶质细胞瘤细胞系U87、U251和H4进行研究。用细胞计数法(CCK-8)检测4个不同浓度梯度(0,3,6,9 mg·mL^(-1))西地尼布处理后3种胶质细胞瘤细胞系增殖能力以筛选其最适治疗浓度。本研究共3种细胞类型,每种细胞类型分为4组。NRP-1-siRNA组:NRP-1-siRNA序列分别转染脑胶质瘤细胞; Ced-NRP-1-siRNA联合组:在NRP-1-siRNA组基础上加入最适治疗浓度西地尼布;西地尼布组:最适治疗浓度西地尼布处理;空白对照组:未做任何处理。用CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组细胞增殖和凋亡能力;用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测各组细胞中NRP-1mRNA和血管内皮细胞生长因子受体-1(VEGFR-1)蛋白表达水平。结果 U87细胞的空白对照组、西地尼布组、NRP-1-siRNA组和Ced-NRP-1-siRNA联合组在第4天细胞凋亡率分别为(6. 46±0. 56)%,(10. 81±1. 19)%,(20. 16±1. 89)%和(32. 48±1. 77)%;U251细胞的空白对照组、Ced组、NRP-1-siRNA组和Ced-NRP-1-siRNA联合组在第4天细胞凋亡率分别为(9. 12±0. 62)%,(13. 68±1. 08)%,(15. 45±0. 75)%和(22. 34±1. 64)%;与U251细胞比较,U87细胞各组细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。与U251细胞比较,U87细胞各组细胞NRP-1 mRNA和VEGFR-1蛋白表达水平增高,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论 NRP-1在U87中表达水平高于U251和H4,靶向敲除其可增强西地尼布治疗脑胶质瘤疗效,以高恶性U87更为明显,为脑胶质瘤的个体化靶向治疗奠定了基础。

神经纤毛蛋白-1在大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移中的功能作用和潜在机制研究

目的探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP1)在静脉桥失效进程中的功能作用和潜在机制。方法在大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)体外功能研究中,实验组与对照组VSMCs分别转染负载NRP1-shRNA的腺病毒和阴性对照腺病毒。运用cell counting kit-8实验、流式细胞术、Transwell实验及Western blot研究NRP1下调后分别对VSMCs增殖活力、凋亡、迁移能力及其下游信号通路蛋白表达的影响。结果下调NRP1表达可抑制大鼠VSMCs的增殖活力和迁移能力,促进其凋亡,并且下游信号通路蛋白Akt及NF-κB的磷酸化水平显著降低,但对ERK1/2信号通路蛋白的活化无明显影响。结论NRP1可能通过PI3K/Akt和NF-κB介导通路促进VSMCs的增殖与迁移,在静脉桥增殖重构进程中发挥潜在的促进作用,但尚需进一步的动物模型验证。

靶向神经纤毛蛋白-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及对人T淋巴瘤细胞靶基因沉默作用

目的 构建靶向神经纤毛蛋白-1（NRP-1）基因的RNA干扰慢病毒表达载体[pLB-NRP-1/短发卡RNA（shRNA）],并观察其对人T淋巴瘤Jurkat细胞靶基因NRP-1的沉默效应.方法设计、合成3对人NRP-1的特异性干扰序列（NRP-1/shRNA1-3）和1对非特异性对照序列（NRP-1/shRNA4）,分别亚克隆至经Hpa Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切线性化的慢病毒载体pLB中,得到pLB-NRP-1/shRNA重组慢病毒质粒;经酶切和测序鉴定成功后,与包膜质粒pCMV△8.91、被摸蛋白质粒pMD.G重组并包装成为慢病毒表达载体;将其感染至Jurkat细胞;分选阳性细胞后应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测对NRP-1 mRNA和蛋白表达的沉默效应.结果 酶切和测序结果证实3个靶向NRP-1基因的慢病毒载体构建成功,包装成慢病毒滴度可达108 IU/ml;感染Jurkat细胞后,NRP-1 mRNA表达量分别下降了95.9％、92.3％、87.1％,NRP-1蛋白的表达量分别下降了33.8％、29.7％、17.9％,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,shRNA1为最佳干扰靶序,pLB-NRP-1/shRNA1为最佳干扰靶序列慢病毒表达载体.结论 成功构建慢病毒表达载体可高效感染体外培养的人Jurkat细胞株,并可显著抑制靶基因NRP-1 mRNA和蛋白的表达.