脂肪母细胞瘤病超声误诊为弥漫型神经纤维瘤病1例

患儿女,11岁,因“右侧臀部及下肢包块11年”入院。8年前曾行右侧臀部包块切除术,未做病理检查。患者无家族史。查体：双下肢等长,右下肢较对侧肢体粗壮,右侧臀部和足跟可见巨大包块,质软,右侧臀部可见手术瘢痕,右足第4、5趾缺如,第3趾巨趾畸形,不能自主活动。MR检查：右侧臀大肌深、浅面可见团块状脂肪信号,向内侧沿闭孔内肌进入盆腔;

神经纤维瘤病Ⅱ型误诊为双侧视网膜母细胞瘤一例

1临床资料患者,女,15岁。主因“左眼视力下降伴外斜视12年余”于2018年12月入住解放军总医院第一医学中心神经外科。患儿于2005年开始无明显诱因出现左眼视力下降伴外斜视,当时未予相关检查及治疗。上述症状持续缓慢加重,于2008年至某院眼科就诊行相关检查示:“双侧视网膜母细胞瘤、左眼球内占位、右侧视网膜前膜”,并行“双眼底肿物激光封闭术”,术后未行放化疗,治疗后患者左眼视力明显下降,仅存光感。2016年患者突然出现左侧周围性面瘫,左面部电极样疼痛,未予检查及治疗。2018年至某院眼科行检查示:“左眼白内障”,并行“左眼晶状体超声乳化吸除术”。

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法

目的 对神经母细胞瘤 (NB)进行体外培养 ,探讨神经母细胞瘤 (NB)体外建系的方法。方法 NB患儿新鲜手术标本 ,采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系 ;用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化 ;从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定 ,证实所培养细胞是否为 NB细胞。结果 两种细胞培养法均可培养出 NB细胞 ,纯化后可得形态均一的细胞系。

蛋白磷酸酯酶抑制剂冈田酸对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系tau蛋白磷酸化水平的影响

观察蛋白磷酸酯酶-1和蛋白磷酸酯酶-2A的抑制剂冈田酸(okadaicacid,OA)对人神经母细胞瘤系SK-N-SH细胞tau蛋白磷酸化水平的变化,确定tau蛋白过度磷酸化细胞模型的合适剂量和时间。用不同剂量OA与SK-N-SH细胞共温育不同时间,用显微镜观察细胞形态变化,用Western印迹法检测磷酸化tau蛋白和非磷酸化tau蛋白在Ser202位点和Ser404位点磷酸化水平的变化。10～160nmol/LOA与SK-N-SH神经细胞温育3～24h,可引起细胞形态损伤呈剂量依赖性和时间依赖性的变化,起效剂量和时间为10nmol/L和3h。10nmol/LOA与SK-N-SH细胞温育6～24h,磷酸化tau蛋白Ser199/Ser202位点和Ser404位点的表达明显增高,非磷酸化tau蛋白Ser202位点和Ser404位点的表达明显降低,总tau蛋白含量无明显变化。OA可以作为很好的研究tau蛋白过度磷酸化的工具药,10nmol/LOA与SK-N-SH神经细胞共温育6h可以作为制备细胞模型的适宜条件。

环境雌激素双酚AF诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系增殖与侵袭的体外实验

目的探讨环境雌激素双酚AF(bisphenol AF,BPAF)对神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y增殖,及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)转录活性的影响。方法 SH-SY5Y细胞转染ERE-Luc或Cat D-Luc荧光素酶报告基因后,使用0.01μmol/L、0.03μmol/L、0.1μmol/L、0.3μmol/L、1μmol/L、3μmol/L和10μmol/L浓度梯度的BPAF处理SH-SY5Y细胞,采用荧光素酶报告基因实验(luciferase)检测BPAF对ERα转录活性的影响;使用BPAF作用诱导ERα转录活性的EC_(max)浓度处理SH-SY5Y细胞,采用CCK-8实验检测细胞样品在450 nm波长的吸光度值;在ERα表达阴性的三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞系MDA-MB-231中转染ERα表达载体;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的小干扰RNA(si RNA)或使用ERα的拮抗剂ICI-182780(100 nmol/L)预处理SH-SY5Y细胞后,检测BPAF对ERα转录活性的诱导作用或对SH-SY5Y细胞增殖/侵袭的促进作用。结果 BPAF能够剂量依赖性地(R^2=0.94,P=0.007 6)在SH-SY5Y细胞中提高ERα的转录活性,其EC_(50)值为(0.44±0.09)μmol/L,EC_(max)值为3μmol/L;在SH-SY5Y细胞中转染ERα的si RNA载体,或使用ERα的拮抗剂(100 nmol/L ICI-182780)处理SH-SY5Y细胞能够显著下调BPAF诱导的ERα转录活性(抑制率分别为76.97%和77.75%),及其对SH-SY5Y细胞增殖(抑制率分别为77.42%和86.76%)、侵袭的促进作用(抑制率分别为95.87%和105.56%)。结论 BPAF可能通过诱导ERα的转录活性,促进神经母细胞瘤细胞系的增殖与侵袭。

丙泊酚通过促进小泛素化相关修饰蛋白1表达增加抑制神经母细胞瘤细胞系钙内流水平变化

目的立足于小泛素化相关修饰蛋白（SUMO）化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度，通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系（SHSYSY）SUM01化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶（SENP）1导入3×Flag—SUMOlSHSY5Y细胞系降低SUM01化水平，以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo一3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50“mol／L丙泊酚分别孵育3×Flag—SUM01一SHSY5Y细胞系0、30、60、120rain，随着处理时间的延长，SUMO化水平升高，且与蛋白结合状态的SUMO增加，游离态SUMO减少。以5、10、25、50ffmol／L丙泊酚孵育细胞60rain，细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚（50Ⅱtool／L）引起细胞钙内流呈双向性变化，在加入丙泊酚的最初数分钟，细胞内钙离子迅速增加，约10～15min达到峰值，后逐渐降低，以45～60min为转折点，随后逐渐低于对照组，与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0umol／L相比，50、37．5、25ffmol／I。丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低（P值均d0．05），细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENPl的细胞中丙泊酚（50~mol／L）对其钙内流影响的双向性消失，细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义（P〉O．05）；而在表达突变体SENPl和空载体的细胞中，丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在，细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组（P值均d0．05）。结论丙泊酚通过诱导3×Flag—SUM01一SHsY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化，这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。

LRRC4基因表达能降低胶质母细胞瘤细胞系U251的生长和成瘤潜能(英文)

背景与目的:LRRC4是作者最近克隆的一个新基因,该基因在原发性脑肿瘤活检标本中明显表达下调。本研究旨在研究LRRC4基因是否具有抑制脑肿瘤生长的能力。方法:LRRC4基因的全长编码区被亚克隆至表达载体pcDNA3.1中,应用脂质体转染的方法将重组的质粒载体导入胶质母细胞瘤细胞系U251,经G418筛选,建立稳定表达LRRC4基因的U251的细胞系。采用细胞增殖实验、软琼脂实验、肿瘤形成实验来考察LRRC4基因表达对于细胞生长和肿瘤形成的影响。结果:经过脂质体转染和筛选,建立了稳定表达LRRC4全长编码区的U251细胞系,用于进一步实验。比较未转染组和转染空白载体组,Northernblot实验证实转染了LRRC4基因的细胞LRRC4mRNA的表达增强。细胞增殖一定时间后,转染LRRC4基因的细胞较未转染细胞的生长速度明显减慢,克隆形成率明显降低。将这些细胞注射入无胸腺裸鼠体内,40天后处死裸鼠,测量肿瘤大小,结果显示转染LRRC4基因的细胞形成的肿瘤明显小于对照组。结论LRRC4基因可转染于人脑胶质母细胞瘤细胞系U251。LRRC4在U251细胞的表达有抑制瘤细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤的形成和生长的作用。

人脑恶性胶质母细胞瘤体外细胞系TJ899及TJ905的建立及其特征

笔者建立了来源于人脑颞枕部和顶部的两个胶质母细胞瘤的体外细胞系,目前已分别存活5年,传500余代。 方法与结果 一、细胞系的建立:1.材料来源:TJ899细胞系取材于1例男性在颞枕部胶质瘤患者的手术切除标本。TJ905体外细胞系取材于1例男性顶部胶质瘤患者。二者均经病理组织学诊断为多形性胶质母细胞瘤。2.建系经过:在无菌条件下,用Hanks液漂洗瘤组织,除去血液及肉眼可见的电灼及坏死组织。机械离碎,将组织块接种于25cm^2培养瓶内,加入含15％胎牛血清(FCS)的Way Mouth MAB 87/3(Gibco Lab,USA)培养液,37℃、5％CO_2孵育72小时。大多数组织块均有不同程度细胞移出,胞体较小,1周后多数培养瓶壁已长满细胞。经0.

上调microRNA-383对人髓母细胞瘤D341细胞系中PRDX3表达的影响

目的探讨microRNA-383(miR-383)对人髓母细胞瘤D341细胞系中PRDX3基因的表达及细胞增殖活性与凋亡等细胞功能学的影响。方法应用实时荧光定量PCR法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中miR-383及PRDX3 mRNA表达水平;采用Western blot法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中PRDX3基因、蛋白表达水平;人工合成miR-383模拟体(mimics)转染MBD341细胞系,采用cck-8法、流式细胞术等实验方法检测转染人髓母细胞瘤D341细胞系后各组D341细胞增殖与凋亡、细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平的变化。结果人髓母细胞瘤BD341细胞系中miR-383表达水平为正常脑组织的0.524倍,明显下调。而PRDX3基因mRNA表达水平为正常脑组织的5.214倍,蛋白表达水平较正常脑组织明显上调。miR-383 mimics转染D341细胞系24、48 h,实验组miR-383表达水平均明显高于空白对照组,且48 h作用更加明显;而PRDX3基因mRNA、蛋白表达水平48 h较空白对照组降低。cck-8法检测提示实验组中细胞增殖率降低(P<0.05)。An-nexinV-FITC法检测转染后24、48 h细胞凋亡结果显示miR-383 mimics实验组细胞早期凋亡率明显增高,且24 h作用较明显(P=0.000)。细胞内活性氧水平和线粒体膜电位水平检测结果分别显示,转染后24、48 h实验组较对照组细胞内活性氧水平明显升高,而线粒体膜电位水平较对照组明显降低。结论与正常脑组织相比,miR-383在人髓母细胞瘤D341细胞系中表达降低,PRDX3基因表达升高。上调miR-383可敲低D341细胞系中PRDX3基因表达,并可抑制D341细胞增殖活性,促进D341细胞凋亡,出现D341细胞内活性氧水平升高、线粒体膜电位水平降低的细胞功能学变化。

汉防己甲素和长春新碱对人视网膜母细胞瘤细胞系HXO－Rb_（44）生长的抑制作用

用汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，ＴＤＲ）、长春新碱（ｒｉｎｃｒｉｓｌｉｎｅ，ＶＣＲ）分别对人视网膜母细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ＿（４４）生长的影响进行观察，结果显示：ＴＤＲ在１～４０μｇ／ｍｌ范围内对ＨＸＯ－Ｒｂ＿（４４）细胞有明显抑制作用（Ｐ＜０．０５），半数抑制浓度ＩＣ５０为２．４５μｇ／ｍｌ；ＶＣＲ对该细胞系也有较强的抑制作用，ＩＣ５０为０．３１μｇ／ｍｌ。提示ＴＤＲ与ＶＣＷ一样，在体外对Ｒｂ细胞有较强的抑制作用，可能成为治疗视网膜母细胞瘤的新药。

芳香化酶在胶质母细胞瘤细胞系SHG-44细胞中的表达及调控

目的 研究芳香化酶细胞色素P45 0 (AROM)及雌激素受体 (ER α)在胶质母细胞瘤细胞系SHG 4 4细胞中的基因表达。 方法 细胞培养、免疫细胞化学染色、原位杂交染色及RT PCR技术。 结果 在SHG 4 4细胞中分别检测到AROM及ER α的表达 ,进一步发现SHG 4 4细胞中AROM的表达是由多个组织特异性启动子驱动基因的转录。 结论 可能为中枢神经系统肿瘤发生的激素调节提供新的资料。

组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究

目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。

p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞Connexin 43表达影响

目的探究p53基因突变对胶质母细胞瘤细胞连接蛋白43(Connexin 43)表达的影响。方法培养胶质母细胞瘤U87细胞(p53野生型)与U251细胞(p53突变型),采用Western blotting方法分别检测两种细胞中p53蛋白与Connexin 43蛋白的表达水平。结果胶质母细胞瘤U251细胞中p53基因发生突变,与U87细胞相比,p53蛋白表达水平降低(t=2.948,P<0.05);U251细胞中Connexin 43蛋白的表达水平显著高于U87细胞(t=2.771,P<0.05)。结论在胶质母细胞瘤细胞中,p53基因突变可能会提高Connexin 43蛋白的表达量。

人视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系单克隆方法探索

目的:为了使培养细胞的遗传性状、生物学特性相似,利于多种实验研究,而对视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系进行克隆。方法:用多孔塑料板克隆细胞法,对SO-Rb_(50)细胞进行克隆及分离培养。结果:没有菊花团形成的Rb细胞克隆成功,而有菊花团的Rb细胞、连续三次克隆均不能成功。结论:提示分化好的Rb细胞难以克隆成功。眼科学报 1996;12:79—82。

胶质母细胞瘤细胞系GL15生物学特性的实验研究

目的明确GL15细胞系的生物学特征并探讨表皮生长因子(EGF)对GL15细胞系生物学特征的影响。方法观察GL15细胞的形态和生长增殖特性,Giemsa染色分析核型,免疫细胞化学行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)染色,流式细胞仪分析细胞周期,Transwell、MTT法检测EGF对GL15细胞生物学特征的影响,与U251MG和U373MG细胞系进行比较。结果GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤形态,核型分析显示多条染色体均有扩增,其中EGF受体所在的7号染色体数目增加较为明显(4条7号染色体)。GFAP和PCNA分别在胞浆和胞核呈阳性表达。EGF可双向调节细胞增殖活性、侵袭性及GFAP蛋白表达。结论GL15细胞系保持了胶质母细胞瘤的生物学特征,是研究胶质母细胞瘤理想的细胞平台。该细胞系的生物学特性与EGF受体有紧密关系。

神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化研究

神经生长因子是分子量26 000道尔顿的多肽。在神经元的发育,分化及生存中起着重要的作用。神经母细胞瘤的发生可能为神经母细胞的分化受到某种阻滞的结果。因而有人推测神经生长因子可能诱导神经母细胞瘤的细胞分化,但世界范围内尚无肯定的结论。我们应用18个神经母细胞瘤系系统研究了神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的规律和特点。

神经母细胞瘤1例并临床分析

神经母细胞瘤(neuroblastoma),又称神经细胞瘤,是儿童常见的恶性肿瘤,是儿童肿瘤的10%[1],占儿童腹部恶性肿瘤的第二位[2]。神经母细胞瘤起源于交感神经节和肾上腺髓质的恶性肿瘤。

5-氮杂胞苷增强阿霉素对神经母细胞瘤细胞的抗瘤活性

目的许多神经母细胞瘤细胞系及肿瘤组织标本中caspase-8表达缺失,caspase-8基因沉寂的主要原因是其启动子区域高度甲基化。该文探讨去甲基化药物5-氮杂胞苷对caspase-8表达及对化疗药阿霉素抗人神经母细胞瘤细胞作用的影响及其影响机制。方法应用RT-PCR方法检测5-氮杂胞苷作用前后SH-SY5Y细胞中caspase-8 mRNA水平变化。MTT分析研究5-氮杂胞苷与化疗药阿霉素联合应用前后人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率,以及加入caspase-8活性抑制剂后存活率的变化。结果RT-PCR方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8 mRNA,5-氮杂胞苷作用3d后可检测到caspase-8 mRNA表达,5d后表达较第3天增加;5-氮杂胞苷与不同浓度阿霉素(0.05,0.1,0.25,0.5μg/mL)联合应用后SH-SY5Y细胞存活率为(77.61±7.30)%,(57.35±6.64)%,(46.25±4.46)%,(35.59±5.12)%,同一浓度单独应用阿霉素组细胞存活率为(94.89±4.15)%,(80.60±8.50)%,(64.48±4.92)%,(52.32±6.71)%,5-氮杂胞苷与阿霉素联用组细胞存活率明显低于单用阿霉素组,差异均有显著性。caspase-8抑制剂组与同一浓度的5-氮杂胞苷+阿霉素组比较,细胞存活率明显增加,依次为(92.95±3.48)%,(78.39±4.28)%,(62.31±6.50)%,(49.92±5.77)%,差异均有显著性。结论阿霉素对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y具有增殖抑制作用,5-氮杂胞苷可以增强阿霉素的抗瘤活性。其发生机制可能是通过上调caspase-8 mRNA的表达而实现的。

1株RB1^(+/+)的中国汉族人视网膜母细胞瘤细胞系的建立与基因组特征研究

目的·建立1株新的中国汉族人视网膜母细胞瘤细胞系,并研究其基本特征。方法·在无菌环境中,从1例视网膜母细胞瘤患者瘤体标本中分离原代肿瘤细胞,进行培养、纯化与传代。通过细胞免疫荧光、免疫组织化学染色、DNA短片段重复序列(short tandemrepeat,STR)检测、核型分析和全外显子测序等方法,观察并鉴定该细胞系和肿瘤组织形态学特征、遗传学特征及表面标志物。结果·将该细胞系命名为SNPH-Rb-C24,其主要特征为神经起源的肿瘤细胞,表达神经细胞黏附分子1和突触素;STR分型与原肿瘤组织个体来源一致;染色体核型发生复杂改变,但未发现13号染色体长臂改变;与原肿瘤组织皆表现为RB1^(+/+)特征,且基因突变谱相似;具有体内成瘤能力。结论·成功建立1株起源于RB1^(+/+)中国汉族人视网膜母细胞瘤细胞系SNPH-Rb-C24,该细胞系保留了原肿瘤组织的生物学和遗传学特征。