苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。

VEGF和NRP1/2在神经胶质瘤中的相关性

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）和神经纤维网蛋白（NRP）1／2在正常脑组织和神经胶质瘤组织中的相关性。方法利用免疫组织化学方法检测VEGF和NRP1／2在正常脑组织和不同神经胶质瘤病理组织切片中的相关性分析。结果 VEGF、NRP1、NRP2在正常脑组织中均表达为1例弱阳性，在神经胶质瘤中的阳性表达率分别为74．00％（51／69）、77．00％（53／69）、72．00％（50／69），明显高于正常脑组织组（ P＜0．05）。低恶性度组（Ⅰ～Ⅱ级）和高恶性度组（Ⅲ～Ⅳ级）中VEGF、NRP1、NRP2的阳性表达率分别为69．00％（20／29）、76．00％（22／29）、72．00％（21／29）；80．00％（32／40）、83．00％（33／40）、78．00％（31／40）；即随肿瘤分级增加而增强（与胶质瘤恶性程度呈正相关）（P＜0．05）。 VEGF 和NRP1／2在神经胶质瘤的表达三者呈正相关（r＝0．795）。结论 VEGF和NRP1／2在神经胶质瘤的发生发展进程中及判断预后三者具有相关性。

Survivin、NRP1在胃癌中的表达及其对胃癌预后的影响

目的探讨存活素(Survivin)、神经纤维网蛋白1(NRP1)在胃癌中的表达及其对胃癌预后的影响。方法应用免疫组化法测定60例胃癌组织及60例正常胃黏膜组织中Survivin、NRP1表达情况,应用Kaplan-Meier计算Survivin阳性、NRP1阳性患者5年生存率,以Cox风险模型分析影响胃癌患者预后的危险因素。结果胃癌组织中Survivin阳性表达率为86.67%,NRP1阳性表达率为83.33%,而在胃正常黏膜组织中的表达分别为6.67%、5.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。Survivin阳性表达率与TNM分期、累及浆膜层、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。NRP1阳性表达率与TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05)。60例胃癌患者术后随访5年,共56例获得随访,5年存活为25例,5年存活率为44.64%,其中Survivin阳性存活率35.42%(17/56),NRP1阳性存活率为32.61%(15/56)。经Cox风险分析可知,Survivin阳性、NRP1阳性是影响胃癌预后的独立危险因素。结论Survivin、NRP1可能与胃癌发生及进展相关。Survivin、NRP1表达状态是胃癌预后的独立预测因素,其阳性表达可提示患者预后不良。

靶向肿瘤血管诱发血栓栓塞体系的建立及活性鉴定

目的建立一种新型的靶向高效诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子(MF-A6-SA:B-tTF)。方法化学交联技术制备神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素、磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素和生物素-短截型组织因子交联物,凝血因子X活化实验鉴定复合体系活化凝血因子X的活力,荧光显微镜技术和普鲁士蓝染色法同时观察施加外界磁场后复合体系的靶向作用,凝血实验直接观察复合体系引入链霉亲和素:生物素的生物放大效应,体内生物分布实验观察复合体系的安全性。结果成功制备磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素及生物素-短截型组织因子,磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子体系保留有高效激活凝血因子X的活性,与靶点的结合具有靶向性及高效富集性,体内实验证实能安全有效诱发肿瘤血管栓塞。结论成功制备的具有靶向诱发肿瘤血管血栓栓塞体系磁流体-神经纤维网蛋白1抗体A6-链霉亲和素:生物素-短截型组织因子为进一步探索肿瘤血管的靶向治疗奠定基础。