苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值

目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于该模型诊断。

双期透明样沙粒体性肾细胞癌1例报告并文献分析

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)独特的形态学特征与特定的基因改变相关。双期透明样沙粒体性肾细胞癌(biphasic hyalinizing psammomatous renal cell carcinoma,BHPRCC)是一种新近描述的尚未分类的肾细胞癌,由ARGANI等人[1]第一次报道,与TFEB无关但具有类似于TFEB基因融合或t(6;11)型肾细胞癌的双相结构,较大的外周细胞和较小的细胞聚集在具有沙粒小体的基底膜样物质周围。神经纤维蛋白2(neurofibromin 2,NF2)基因的改变出现在所有的病例中,并被推测为肿瘤发生的原始因素。我们提出一个BHPRCC的病例报告,在此之前,没有相关的中文报道。

银杏双黄酮抑制PIK3CA突变驱动的淋巴管畸形的研究

目的探究银杏双黄酮对磷脂酰肌醇3-激酶(PIK3CA)突变驱动的儿童淋巴管畸形(LM)的影响及其机制。方法实验分为淋巴管内皮细胞(HD-LEC)组(不做处理)、淋巴管畸形-淋巴内皮细胞(LM-LEC)组(不做处理)、银杏双黄酮组(7.5μmol·L^(-1)银杏双黄酮处理LM-LEC细胞)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)抑制药组(Sozinibercept组,1μmol·L^(-1)VEGF-C抑制药处理LM-LEC细胞)。观察各组细胞管腔数量和管分枝数量,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-qPCR)检测VEGF-C相对表达水平,用蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)、神经纤维蛋白-2(NRP2)、蛋白激酶B(Akt)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白相对表达水平,用免疫荧光法检测细胞VEGFR3和NRP2阳性表达。结果LM-LEC组和HD-LEC组中VEGF-C mRNA相对表达水平分别为5.42±1.09和1.00±0.08,VEGFR3蛋白相对表达水平分别为2.79±0.54和1.00±0.10,NRP2蛋白相对表达水平分别为2.58±0.47和1.00±0.07,Akt S473磷酸化水平分别为5.62±0.84和1.00±0.01,ERK磷酸化水平分别为2.37±0.62和1.00±0.05;银杏双黄酮组、Sozinibercept组和LM-LEC组中VEGFR3阳性表达分别为0.35±0.08、0.29±0.08和1.00±0.16,NRP2阳性表达分别为0.33±0.07、0.31±0.05和1.00±0.09。LM-LEC组的上述指标与HD-LEC组比较,银杏双黄酮组和Sozinibercept组的上述指标与LM-LEC组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论银杏双黄酮可能通过阻断VEGF-C/VEGFR-3信号通路,抑制VEGF-C的表达水平,从而抑制PIK3CAH1047R突变引起的淋巴管畸形。

和厚朴酚在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用研究

目的探讨和厚朴酚对乳腺癌上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法将MDA-MB-231细胞随机分为对照组(正常培养)、低剂量组(40μmol·L^(-1)和厚朴酚)、中剂量组(50μmol·L^(-1)和厚朴酚)、高剂量组(60μmol·L^(-1)和厚朴酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-NF2组(转染si-NF2)、DMSO组(等剂量二甲基亚砜处理)、抑制药组(12μmol·L^(-1)Hippo通路抑制药Verteporfin)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞存活情况;用Transwell实验检测细胞迁移情况;用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白的表达水平。将BALB/c雌性小鼠随机分为模型组(构建移植瘤模型)、低剂量实验组(建模后灌胃给予100 mg·kg^(-1)和厚朴酚)、高剂量实验组(建模后灌胃给予200 mg·kg^(-1)和厚朴酚),每组10只。治疗结束后检测肿瘤体积和质量,并用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白的表达水平。结果对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的细胞存活率分别为(100.00±4.02)%、(80.14±6.51)%、(64.05±6.21)%和(53.70±5.19)%,细胞迁移数量分别为(276.30±14.77)、(219.40±12.50)、(162.20±9.53)和(100.10±6.50)个,神经纤维蛋白2(NF2)相对表达水平分别为0.52±0.04、0.60±0.06、0.65±0.07和0.78±0.10,细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)蛋白相对表达水平分别为0.70±0.06、0.47±0.04、0.41±0.05和0.36±0.03。低、中、高剂量组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组、低剂量实验组、高剂量实验组小鼠的肿瘤体积分别为(922.02±109.61)、(743.04±64.04)和(605.00±72.63)mm^(3),肿瘤质量分别为(0.87±0.10)、(0.66±0.10)和(0.53±0.11)g,PD-L1蛋白相对表达水平分别为0.74±0.08、0.51±0.05和0.42±0.05,N-钙黏着蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平分别为0.75±0.07、0.60±0.10和0.51±0.04。低、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论和厚朴酚可能通过调节NF2-Hippo信号通路作用于PD-L1抑制乳腺癌细胞EMT。

NF2/Merlin的生物学功能及其在肿瘤发生中的作用

神经纤维蛋白2基因(NF2)最初从Ⅱ型神经纤维瘤病患者中被克隆并鉴定,其编码抑癌蛋白Merlin(Moesin-Ezrin-Radixin-like protein),介导细胞连接,参与Hippo、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、Wnt/β-catenin和受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTKs)等信号通路的调控,从而调控细胞生命活动。NF2基因突变或Merlin蛋白功能异常除引发神经鞘瘤、脑膜瘤和室管膜瘤等神经系统肿瘤外,还与肝癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤相关。该文在简单介绍NF2基因及其编码蛋白Merlin的结构、变异和活性修饰等基础上,详细综述NF2/Merlin的生物学功能及其在肿瘤发生中的作用机制等研究进展。