蔷薇红景天总黄酮提取物对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其活性部位筛选

目的考察蔷薇红景天总黄酮提取物(TFE)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35))诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其活性部位筛选。方法采用20μmol·L^(-1)Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤,经AB-8大孔吸附树脂色谱法分离蔷薇红景天TFE,得水及20%、40%、60%、80%、95%乙醇洗脱物(即TFE-0%、TFE-20%、TFE-40%、TFE-60%、TFE-80%和TFE-95%)。计算不同体积分数乙醇洗脱物浸膏得率(赋予0.3权重),紫外分光光度法检测不同体积分数乙醇洗脱物总黄酮含量(赋予0.7权重),综合评价不同体积分数乙醇洗脱物。MTT法检测不同体积分数乙醇洗脱物对损伤后PC12细胞活力的影响;采用倒置显微镜观察细胞形态;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;酶联免疫测定(ELISA)法分别检测细胞上清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)和白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌水平。结果TFE-40%总黄酮浓度和浸膏得率的综合得分高于其他不同体积分数乙醇洗脱物。与空白组比较,模型组细胞间隙变大,数目减少,出现细胞碎片,突触明显减少,存活率和SOD水平明显降低(P<0.05),LDH水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,TFE-40%、TFE-60%洗脱物和盐酸多奈哌齐组细胞形态均有一定程度改善,数目增多,突触增加,细胞形态较完整;TFE-40%、TFE-60%、TFE-80%及TFE-95%组的细胞上清液中IL-6、TNF-α、COX-2和IL-1β的水平均明显降低(P<0.05)。结论蔷薇红景天TFE-40%洗脱物对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞损伤具有较好保护作用,为最佳活性部位,其机制可能与拮抗Aβ_(25-35)的神经毒性和抑制细胞炎症的发生有关。

石榴补血糖浆对东莨菪碱诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的:探讨石榴补血糖浆对东莨菪碱诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤(PC12)细胞凋亡保护作用,探究石榴补血糖浆体外改善认知功能障碍的保护作用机制。方法:将不同浓度的石榴补血糖浆冻干粉细胞培养液作用于PC12细胞,采用CCK-8法检测细胞活性,根据细胞活性结果将后续实验分为空白对照组(NC)、模型组(SC)、石榴补血糖浆低、中、高剂量组(L、M、H:25、50、100μg/ml)、多奈哌齐对照组(D,10μmol/L);利用ELISA试剂盒检测细胞乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、超氧化物歧化酶(SOD)和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的水平,流式凋亡术检测活性氧自由基(ROS)及细胞凋亡情况;Westernblot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3等蛋白的表达情况。结果:石榴补血糖浆可显著增加PC12细胞的存活率,增加Ach、SOD的水平,降低ROS、MDA及AchE的水平,降低Bax/Bcl-2的比值和Cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白的表达。结论:石榴补血糖浆可通过Bax/Bcl-2信号通路抑制细胞凋亡,减轻氧化应激,影响细胞内神经递质的水平发挥神经保护作用。

玉米肽对酒精损伤PC12细胞的保护作用及机制

在细胞水平上探讨玉米肽对酒精损伤PC12细胞的保护作用及可能机制。首先建立酒精损伤细胞模型,对玉米肽的作用剂量进行筛选;采用酶联免疫吸附试剂盒法测定玉米肽预处理后PC12细胞中氧化应激指标(谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA))、炎症相关因子(肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB))、神经营养因子(神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF))、突触可塑性相关蛋白(突触后致密物质-95(postsynaptic density-95,PSD-95)、生长相关蛋白-43(growth-associated protein-43,GAP-43)、突触素(synaptophysin,SYN))等指标。通过细胞存活率和形态变化,选择400 mmol/L为酒精损伤的最适浓度,确定玉米肽剂量低、中、高质量浓度为25、100、400μg/mL;实验结果表明3个剂量组的玉米肽对酒精损伤的PC12细胞存活率都具有显著的提高作用;氧化应激指标发现玉米肽可提高酒精损伤PC12细胞中GSH和SOD含量、抑制MDA的生成;炎症相关指标测定结果表明玉米肽可降低酒精损伤PC12细胞中炎症因子TNF-α和IL-6的水平,抑制乙醇导致的NF-κB含量升高;对神经营养因子含量的测定表明玉米肽还可提高酒精损伤细胞中NGF和BDNF的含量;此外玉米肽还可以增加突触可塑性相关蛋白PSD-95和GAP-43的含量,但对SYN无改善作用。总体来看,玉米肽对酒精损伤PC12细胞具有保护作用,其保护作用机制为多种途径共同作用的结果。

发酵茶叶水浸出物对PC12神经细胞保护作用

采用高效液相色谱(HPLC)分析普洱茶、乌龙茶、绿茶和红茶连续三次水浸泡物中茶多酚类及嘌呤类生物碱的含量。利用PC12神经细胞损伤模型比较四种茶叶提取物对于PC12神经细胞的保护作用。采用热90℃,30 min/次,25倍量水,连续3次浸泡4种茶叶,第1次和第2次提取能够获得茶叶中的主要多酚类物质。普洱茶、乌龙茶、绿茶和红茶中前两次总多酚类成分的提取率为99.38%、94.50%、87.49%、99.15%,而嘌呤类生物碱的提取率为97.57%、95.81%、88.01%、97.95%。PC12神经细胞活性测试结果显示各种茶叶提取物对谷氨酸导致的神经细胞兴奋性毒性损伤具有较好的保护作用,而对过氧化氢以及BSO导致的细胞损伤并无显著影响。

异丙酚对可卡因抑制PC12神经细胞增殖的保护作用

目的·· :研究异丙酚对可卡因抑制PC12神经细胞增殖的细胞毒性的影响。方法··:应用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度可卡因对PC12细胞增殖的毒性作用 ,以及异丙酚对可卡因所致细胞增殖毒性的影响 ,并观察细胞形态学改变。结果·· :可卡因作用于PC12细胞72h后 ,细胞光密度(OD)值呈剂量依赖性下降 ;单独应用可卡因160μmol·L-1 组和320μmol·L-1 组OD值明显降低 (P<0.01) ,而同时给予异丙酚50μmol·L-1 后 ,可卡因160μmo·L -1组PC12细胞OD值明显增加 (P<0.01) ,但可卡因320μmol·L -1组同时给予异丙酚后未见OD值显著改善 (P>0.05)。

基于抗氧化的大豆异黄酮对PC12细胞的神经保护作用

实验研究了20.00μg/mL的单一染料木黄酮(GEN)、大豆黄素(DAI)及其混合溶液(GEN-DAI)对PC12细胞的存活率、形态、线粒体膜电位以及超氧化物歧化酶活力和抑制率的影响。结果表明:3种溶液对上述指标均没有显著影响,但GEN提高了活性氧水平,相对荧光强度和丙二醛含量有所升高;DAI和GEN-DAI溶液显著地降低了乳酸脱氢酶漏出率,谷胱甘肽含量分别增加到(297.27±9.47)μmol/(g·prot)、(269.90±0.00)μmol/(g·prot);GEN-DAI混合溶液综合增强了胆碱系统的代谢,提高了乙酰胆碱含量。GEN-DAI混合溶液比两种单一组分溶液能够更有效地提高PC12细胞抗氧化系统活力。

神经细胞生长因子诱导的神经元化对PC12细胞紫外线耐受量的影响

目的评估神经细胞生长因子(NGF)诱导的神经元化对PC12细胞紫外线耐受量的影响。方法采用10、30、60、80、100、200 mJ/cm2紫外线分别照射经NGF诱导的PC12细胞(研究组)和未经NGF诱导的正常PC12细胞(对照组),照射后继续培养24 h,MTT测定细胞存活率。结果对照组细胞在辐射强度30 mJ/cm2时开始出现明显的细胞凋亡,研究组细胞在辐射剂量100 mJ/cm2时才出现明显凋亡。结论NGF诱导的神经化可提高PC12细胞的紫外线耐受量。

桑园常用杀菌剂多菌灵诱导鼠源神经细胞PC12凋亡的研究

多菌灵是桑园病虫害防治的常用农药,并用于家蚕微粒子病的防治。研究多菌灵对哺乳动物神经系统的毒性损伤作用及可能的作用机制,为避免蚕区桑园用药污染环境的危害提供理论依据。采用MTT法、流式细胞计数法测定用质量浓度为50、100和200μg/m L的多菌灵药液分别与鼠源神经细胞PC12共同孵育48 h后,可极显著抑制PC12细胞的增殖（P〈0.01）,诱导PC12细胞凋亡,特别是早期凋亡（P〈0.01）。实时荧光定量PCR检测经50μg/m L多菌灵药液处理后培养48 h的PC12细胞内,促凋亡蛋白基因Bax和凋亡相关基因Cyt-C、Fas、Caspase-8、Caspase-9的表达水平极显著上调（P〈0.01）;同时检测50μg/m L多菌灵药液处理组PC12细胞中Caspase-3的酶活性也极显著提高（P〈0.01）。研究结果显示50~200μg/m L多菌灵药液对哺乳动物神经细胞具有一定的毒性作用,推测其可能通过启动死亡受体介导途径和线粒体介导途径诱导神经细胞凋亡,因此在桑园施用多菌灵时,应注意防护以及远离居住区。

NGF诱导PC12细胞分化的神经细胞行为观察

目的 :观察PC12细胞分化的神经细胞的分裂、突起延伸、迁徙和分化等细胞行为。方法 :采用Giemsa、甲绿 派郎宁染色和增殖细胞核抗原 (PCNA)免疫组织化学染色方法观察培养的PC12细胞。结果 :培养分化的神经细胞呈现横裂、纵裂等不同方式的无丝分裂像 ;分裂中的神经细胞可呈现形态及化学不对称性 ;分化的神经细胞有明显的细胞迁徙运动和突起延伸。结论 :NGF诱导PC12细胞分化的神经细胞能以无丝分裂方式增殖 ;分化神经元可以通过细胞迁徙、突起延伸及共同胞质桥等方式相连接。

bcl-2基因转染PC12细胞及其神经保护作用的研究

目的 研究基因bcl 2对神经元的生物活性作用。 方法 构建真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞 ,Westernblot和原位免疫组织化学检测外源基因表达 ;10 μmol L、5 0 μmol L和10 0 μmol L顺铂处理转染重组质粒的实验A组细胞 ,同样条件处理转染空质粒的对照B组细胞 ,72h后比较两者存活的细胞数 ;流式细胞仪检测分析两者的细胞周期指数。 结果 成功构建了真核表达载体pcDNA3 bcl 2 ,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达Bcl 2的细胞克隆 ;10 μmol L、5 0 μmol L和 10 0 μmol L顺铂处理后 ,实验A组存活的细胞数分别为 2 76± 13、185± 11和 10 8± 10 ,而对照B组中存活的细胞数分别为 10 0± 9、12± 3和 2± 2 ,两者相比有显著性差异 ;流式细胞仪检测显示 ,实验A组S期细胞所占百分比为 8 81% ,比对照B组 2 5 79%明显减少。 结论 bcl 2能够拮抗顺铂对神经元的损害作用 ,促进神经细胞存活 。

7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨7,8-二羟基-4-甲基香豆素(Dhmc)对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤凋亡模型,给予Dhmc处理后,MTT法检测细胞增殖;化学检测法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;采用荧光法检测活性氧(ROS)的生成;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 Dhmc可显著降低由谷氨酸诱导的细胞损伤,提高了细胞存活率,减少LDH漏出量,降低MDA含量,增加SOD活性,抑制ROS的生成,维持线粒体膜电位水平,下调Bcl-2/Bax比率,减少Cyt C的释放,降低Caspase-3活性。结论 Dhmc具有减轻由谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化应激和减轻线粒体损伤有关。

大蒜素对MPP+所致的PC12细胞损伤的保护作用研究

目的通过大蒜素(allicin)对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用,探究体外大蒜素对帕金森病(parkinson’s disease,PD)的保护效应与机制。方法以MPP+损伤PC12细胞建立体外的PD细胞模型,给予不同剂量大蒜素(0.01、0.1、1μg/mL)处理,MTT法测定其细胞增殖活性,用流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用试剂盒检测抗氧化酶活性,包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的活性,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测各组细胞的Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3及Cyt C的蛋白表达水平。结果与对照组相比,MPP+显著降低PC12细胞的增殖率,且呈剂量依赖性(P<0.05)。0.01、0.1和1μg/mL浓度的大蒜素对PC12细胞无毒性作用,而10μg/mL大蒜素显著降低细胞活性(P<0.05)。MPP+显著降低PC12细胞SOD的产生(P<0.05),显著增加细胞凋亡率(P<0.05)、MDA(P<0.05)和ROS的产生(P<0.05),并显著降低了Bcl-2和Cyt C的蛋白水平,同时增加了Bax和Cleaved-caspase 3的蛋白水平(P<0.05)。与MPP+诱导组比较,大蒜素剂量依赖性提高PC12细胞的增殖率(P<0.05),缓解MPP+诱导的细胞凋亡(P<0.05),降低ROS的产生以及MDA的表达(P<0.05),增加SOD的表达,并显著增加了Bcl-2和Cyt C的蛋白水平,同时降低了Bax和Cleaved-caspase 3的表达(P<0.05)。结论大蒜素能够减轻MPP+诱导的PC12细胞的氧化应激损伤,使细胞凋亡减少、存活率升高,从而说明大蒜素在帕金森病的预防和治疗中具有重要的神经保护作用。

高良姜提取物对PC12细胞的神经保护作用

通过建立H2O2介导的PC12细胞损伤模型;采用MTT法检测细胞存活率,利用荧光显微镜观察细胞形态;检测细胞中乳酸脱氢酶漏出率,丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GGSH-Px)活性,评价高良姜提取物对H2O2介导的PC12细胞损伤的保护作用。结果表明,高良姜提取物能明显降低细胞内乳酸脱氢酶漏出率,降低细胞内MDA含量,提高SOD和GGSH-Px的活性,且具有浓度依赖性,由此推断,高良姜提取物对H2O2介导的PC12细胞损伤有明显保护作用。

布南色林对H_2O_2引起的PC12细胞损伤的神经保护作用研究

目的探讨布南色林对H_2O_2引起的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞损伤的保护作用。方法取对数生长期PC12细胞,接种于96孔板,每孔加入终浓度为分别为0、5、10、20、40、80及160μmol·L^(-1)的布南色林,观察不同浓度布南色林对PC12细胞增殖的影响。另取细胞,分为空白细胞对照(C)组,H_2O_2处理(H)组,布南色林-H_2O_2处理(B)组,阳性对照(维生素E-H_2O_2处理,E)组)。MTT法检测各组细胞的活性变化。用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况;倒置显微镜直接观察法以及Hoechst33258染色法观察氧化损伤细胞的形态变化;生化法测定各组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量的改变。结果合适浓度的布南色林(0~20μmol·L^(-1))能促进PC12细胞的生长。与C组比较,H组的细胞活性下降,凋亡指数增加(P<0.05);细胞碎片增多,细胞损伤明显;细胞内的SOD活性减低,MDA水平增高(P<0.05)。与H组比较,B组的细胞活性增强,凋亡指数下降(P<0.05);细胞形态部分恢复;细胞内的SOD活性增强,MDA含量降低(P<0.05)。结论布南色林对H_2O_2引起的神经损伤有保护作用。

细胞因子刺激下PC12神经细胞中诱导型NO合酶及精氨酸循环相关酶的表达

①目的 研究PC1 2神经细胞在炎症因子的刺激下 ,一氧化氮合酶 (NOS)底物精氨酸的来源 ,探讨减轻一氧化氮 (NO)介导的炎症反应途径。②方法 用神经生长因子 (NGF)处理PC1 2细胞使之分化成神经细胞 ,用IFNγ/TNFα激活 ,利用Northern及Western方法检测诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)、精氨酸代琥珀酸合成酶 (AS)、精氨酸代琥珀酸裂解酶 (AL)、正性氨基酸转移酶 1和 2 (CAT 1、CAT 2 )mRNA及其酶蛋白的表达。同时检测地塞米松或dibutyrylcAMP对上述各种酶表达的影响。 ③结果 iNOSmRNA、ASmRNA和其酶蛋白明显被诱导 ;ALmRNA和其酶蛋白少量被诱导 ,同时产生大量的NO ;CAT 1和CAT 2没有被诱导。地塞米松或dibutyrylcAMP抑制iNOS的诱导及NO的合成 ,两者共同作用时 ,其抑制作用更明显。④结论 在细胞因子活化的PC1 2神经细胞中iNOS被诱导 ,产生大量的NO ;此时其底物精氨酸主要来源于精氨酸的再生系———瓜氨酸

脑力智宝对乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的影响

目的:从细胞学角度研究脑力智宝在维持神经元存活和促进神经突起生长方面的保护作用。方法:将SD大鼠分为脑力智宝提取物高剂量组(0.63g/L)、低剂量组(0.04g/L)和对照组,连续给药7次后眼球取血制备含药血清,用MTT法检测脑力智宝对原代培养神经细胞生长发育的影响;用分散培养法培养PC12细胞,测定加入不同浓度脑力智宝提取物(0.63和0.04g/L)、脑力智宝含药血清(6和3g/kg)、神经生长因子后PC12细胞在24,48和72h的突起阳性细胞百分比。结果:脑力智宝对PC12细胞具有营养作用,使细胞突起增加增长,阳性细胞数增多,48h时0.63g/L脑力智宝提取物可使阳性细胞百分数从模型组的17.2%提高到38.4%(t=4.89,P<0.01),3g/kg脑力智宝含药血清可使阳性细胞百分数达到69.0%(t=9.37,P<0.01),并可促进原代培养鼠脑皮质神经细胞的生长发育,MTT法检测A值明显增加,尤以0.63g/L脑力智宝提取物(t=4.79,P<0.01)和3g/kg脑力智宝(P<0.01,t=8.81)组作用明显。0.63g/L脑力智宝提取物可显著促进PC12细胞增殖,在2,4和6d时分别可使PC12细胞数目较对照组分别增加1.56,1.85和2.96倍,差异均有显著性意义(t=2.67,5.27,3.12;P<0.05～0.01),均与对照组比较有显著性差异;6g/kg含药血清组亦显著增加。脑力智宝提取物和含药血清均可促进无血清培养神经?

Genistin对Aβ_(1-42)诱发的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨Genistin对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为:正常对照组、Aβ1-42处理组和Genistin预处理组。Aβ1-42处理组用Aβ1-42处理细胞,Genistin预处理组在用Aβ1-42处理前2h加入Genistin。使用细胞形态学方法、LDH法和MTT法观察Genistin的神经保护作用。结果单纯Aβ1-4210滋mol/L处理细胞24h,MTT吸光值减小,LDH释放量明显增加,与正常对组比较差异有显著性(P<0.01);细胞形态发生明显改变。用25mmol/LGenistin预处理PC12细胞2h,MTT吸光值与Aβ1-42处理相比明显增加,LDH释放量显著降低,与Aβ1-42处理组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论Genistin在体外抑制Aβ1鄄42对细胞的毒性作用。

芡实正丁醇部位分离组分对H_2O_2诱导的PC12细胞的神经保护作用及其机制研究

目的研究芡实正丁醇部位的聚酰胺柱分离组分对H_2O_2损伤的PC12细胞的神经保护作用,探讨其对阿尔茨海默病潜在的预防治疗作用及其可能的机理。方法体外培养PC12细胞株,加入浓度为200μmol/L的H_2O_2损伤细胞8h,建立氧化损伤模型,将芡实不同浓度的乙醇提取物分别作用于细胞后,采用MTT法检测各组分对细胞存活率的影响,用试剂盒测定细胞液中SOD活力、MDA含量,RT-PCR检测细胞内APP、BACE-1、GSK-3β的mRNA表达水平。结果与模型组相比,芡实正丁醇部位50%、70%、95%乙醇的洗脱物均能显著改善H2O2损伤的PC12细胞的存活率(P<0.05),70%、95%乙醇的洗脱物均能显著增加细胞液中SOD酶的活力,减少MDA的释放(P<0.05),下调GSK-3βmRNA表达量(P<0.01)。结论芡实正丁醇聚酰胺柱70%、95%的乙醇洗脱物对氧化应激损伤的PC12细胞具有显著的保护作用,其作用机制可能与增加SOD酶活力、减少MDA释放、抑制Aβ累积相关的GSK-3β基因表达有关。

羟基酪醇对H_2O_2损伤的神经细胞株PC12凋亡影响及其机制

目的观察羟基酪醇对过氧化氢(H_2O_2)损伤的神经细胞株PC12凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将第5代对数期PC12细胞分为对照组、H_2O_2组、观察组进行培养;对照组不加H_2O_2和羟基酪醇,H_2O_2组加H_2O_2,观察组加H_2O_2及羟基酪醇。细胞培养24 h,采用CCK8比色法测算各组细胞存活率,同时测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)和ROS,Hoechst 33258荧光染色法测算细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测各组细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA,免疫印迹试验检测各组NF-κB、p-NF-κB Ser536蛋白,酶联免疫吸附测定法测定各组IL-1β和TNF-α。结果与对照组相比,H_2O_2组细胞存活率降低(P<0.05)、细胞凋亡率上升(P<0.05);与H_2O_2组相比,观察组细胞存活率上升(P<0.05)、细胞凋亡率降低(P<0.05)。与对照组相比,H_2O_2组LDH释放率和ROS水平升高(P均<0.05);与H_2O_2组相比,观察组LDH释放率和ROS水平降低(P均<0.05)。与对照组相比,H_2O_2组Bax mRNA相对表达量升高(P<0.05)、Bcl-2 mRNA相对表达量降低(P<0.05)、Caspase-3 mRNA相对表达量升高(P<0.05);与H_2O_2组相比,观察组Bax mRNA相对表达量降低(P<0.05)、Bcl-2 mRNA相对表达量升高(P<0.05)、Caspase-3 mRNA相对表达量降低(P<0.05)。与对照组相比,H_2O_2组NF-κB、p-NF-κB Ser536蛋白表达量增加(P均<0.05);与H_2O_2组相比,观察组NF-κB、p-NF-κB Ser536蛋白表达量减少(P均<0.05)。与对照组相比,H_2O_2组TNF-α和IL-1β的水平升高(P均<0.05);与H_2O_2组相比,观察组TNF-α和IL-1β的水平降低(P均<0.05)。结论羟基酪醇可抑制H_2O_2损伤的PC12细胞凋亡,其作用机制是防止LDH从细胞中释放并清除ROS、反向调节相关凋亡基因的表达,同时减少炎症靶蛋白和炎症因子的表达。

活血荣络方含药血清对氧糖剥夺/复氧糖损伤PC12细胞线粒体自噬的影响及机制研究

目的基于氧糖剥夺/复氧糖(OGD/R)损伤的PC12细胞模型观察活血荣络方含药血清对线粒体自噬的影响及作用机制。方法采用OGD/R损伤PC12细胞模拟体外脑缺血再灌注损伤模型,将细胞分为正常对照组、模型组、空白血清组、活血荣络方含药血清组和雷帕霉素组,采用相应血清进行干预,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MMP),免疫荧光染色检测线粒体-LC3B共定位、线粒体-PINK1-Parkin共定位,Western blot检测微管蛋白1轻链3B(LC3B)、p62、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型组细胞MMP明显降低(P<0.01),线粒体-LC3B共定位无明显变化,线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高,p62、TOMM20蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,活血荣络方含药血清组细胞MMP明显升高(P<0.01),线粒体-LC3B共定位和线粒体-PINK1-Parkin共定位增强,LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),p62、TOMM20蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论活血荣络方含药血清可减轻OGD/R诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与调控PINK1/Parkin通路,增加Parkin蛋白的线粒体转位,上调LC3B,下调p62、TOMM20蛋白表达,激活线粒体自噬相关。