芡实提取物对SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及体外抗氧化活性研究

目的观察芡实80%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用及其体外抗氧化活性。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒法检测以上不同浓度芡实提取物对H2O2诱导损伤的SH-SY5Y神经细胞活力的影响,计算抑制率。用体外抗氧化实验方法检测芡实3种提取物清除DPPH、ABTS自由基及还原铁的能力。结果芡实80%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物在含生药量10～30mg/mL浓度范围内,均表现出明显的抑制H2O2对SH-SY5Y神经细胞氧化损伤的作用(P<0.05,P<0.01),且对DPPH、ABTS自由基及三价铁离子有很好的清除作用及还原能力,其中芡实正丁醇提取物的作用最强。结论芡实具有保护SH-SY5Y神经细胞免受H2O2氧化损伤的作用,有着很好的抗氧化活性,其中正丁醇提取物的抗氧化活性最强。

干扰mTOR对HHV-8感染的神经细胞SH-SY5Y的增殖和迁移能力的影响

目的研究干扰mTOR对人类疱疹病毒8(HHV-8)感染的神经细胞SH-SY5Y的增殖和迁移能力的影响。方法通过Western blot实验和qRT-PCR法验证HHV-8感染的SH-SY5Y神经细胞的mTOR表达水平。采用Lipofectamine 2000分别将si-mTOR与si-NC转染进KSHV感染的SH-SY5Y细胞中,采用Western blot和qRT-PCR技术检测转染效率;qRT-PCR检测HHV-8病毒相关因子LANA、RTA、K8.1的mRNA表达水平;采用CCK-8法和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;利用PI染色结合流式细胞术检测细胞周期;采用Western blot检测周期相关蛋白cyclin D1和p27的表达。结果Western blot和qRT-PCR结果显示HHV-8感染的SH-SY5Y细胞中mTOR的表达水平高于SH-SY5Y细胞(P<0.05)。在干扰mTOR的HHV-8感染的SH-SY5Y细胞中,HHV-8病毒相关因子LANA、RTA、K8.1的表达水平均降低(P<0.05)。CCK-8和划痕实验结果表明干扰mTOR组细胞增殖、迁移能力低于对照组(P<0.05)。流式细胞术结果提示干扰mTOR组的细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05)。Western blot结果显示cyclin D1表达水平降低,p27表达水平升高(P<0.05)。结论干扰mTOR能够降低HHV-8感染的SH-SY5Y细胞的增殖和迁移能力,并将其细胞周期阻滞在G0/G1期,针对mTOR的靶向调控在治疗HHV-8感染引起的神经系统疾病有一定的作用。

神经生长抑制因子在体外可抑制嗜铬细胞瘤株PC12

神经生长抑制因子(GIF)又名金属硫蛋白-Ⅲ, 是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白. 采用MTT还原测定法测定了重组GIF对嗜铬细胞瘤株PC12和成神经细胞瘤株SY5Y生长的影响: 重组GIF在体外可抑制PC12的生长; 在浓度为100 mg/L时, 对PC12的抑制率约为25%; 而当浓度为300 mg/L时, 对PC12的抑制率达到约50%. 表明PC12可作为神经元模型来测定GIF的神经元生长抑制活性. GIF在体外不能抑制常用作神经细胞瘤株模型的SY5Y, 表明GIF并不具有广谱的抑制神经细胞瘤株的作用; GIF抑制PC12可能就是针对它所具有的胆碱能神经元的某些特性. 这对于揭示GIF的神经元生长抑制活性的作用机制有着重要意义.