脊神经结扎术后脊髓背角小胶质细胞中miR-195的表达及其对自噬水平的影响

目的 :探讨大鼠脊神经结扎术后脊髓背角小胶质细胞中微核糖核酸-195(micro RNA-195,miR-195)的表达及其对自噬水平的影响与调节机制。方法:32只成年雄性SD大鼠随机分为脊神经结扎组(SNL组)和假手术组(S组),每组16只,SNL组结扎L5段神经制备脊神经结扎模型,造模后1d、3d、5d、10d两组各处死4只大鼠,分离脊髓腰膨大,采用Percoll梯度离心法分离脊髓背角小胶质细胞,Real-time PCR检测两组各时间点脊髓背角小胶质细胞的miR-195表达水平。取12只成年雄性SD大鼠,处死后取脊髓腰膨大,分离脊髓背角小胶质细胞,分为两组,一组采用脂质体法转染miR-195模拟物,另一组加入转染试剂,检测两组小胶质细胞自噬体膜标记蛋白轻链3(light chain 3,LC3)的表达水平;再取小胶质细胞分为三组,分别将含有野生型及突变型自噬相关基因14(ATG14)3′非编码区(3′UTR)的报告基因质粒、p RL-TK质粒miR-195模拟物和对照转入HEK 293细胞培养48h,荧光显微镜下观察miR-195的直接作用靶点,并检测三组ATG14蛋白的表达。取24只健康SD大鼠脊髓腰膨大,分离脊髓背角小胶质细胞,分为三组分别转染miR-195模拟物、抑制物和转染试剂,培养48h,采用免疫蛋白印记(Western blot)法检测三组ATG14蛋白的表达水平;再取小胶质细胞分为三组,分别转染pEGFP-LC3、pEGFP-LC3+miR-195模拟物及pEGFP-LC3+miR-195模拟物+pCMV-ATG14培养48h,染色后荧光显微下观察自噬斑点数量。结果 :SNL组各时间点大鼠脊髓背角小胶质细胞中miR-195表达均明显上调,与同时间点S组比较均有显著性差异(P<0.05)。转染miR-195模拟物后,LC3的表达水平(0.61±0.07)较对照组(1.21±0.08)显著性降低(P<0.05)。转入野生型ATG14 3′UTR的报告基因质粒的HEK 293细胞的荧光强度较对照显著性减弱(0.65±0.04 vs 1.01±0.01,P<0.05),突变型与对照无显著性变化(0.99±0.03 vs1.00±0.02,P>0.05)。转染miR-195模拟物后小胶质细胞中ATG14的表达显著性降低(P<0.05);转染miR-195抑制物后ATG14的表达显著性升高(P<0.05)。转染pEGFP-LC3与pEGFP-LC3+miR-195模拟物较转染pEGFP-LC3+miR-195模拟物+pCMV-ATG14时自噬数量降低(P<0.05)。结论 :miR-195在大鼠脊神经结扎模型脊髓背角小胶质细胞中高表达,降低自噬蛋白LC3表达;ATG14蛋白受miR-195负调控,miR-195可能通过降低ATG14的表达抑制小胶质细胞自噬。

七叶皂甙钠对坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉及脊髓神经细胞凋亡的影响

目的探讨七叶皂甙钠对坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉及脊髓神经细胞凋亡的影响。方法90只SD大鼠随机分为正常对照组、坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)模型组(CCI组)和药物治疗组(药物组),每组30只大鼠。采用坐骨神经中段结扎法制作大鼠CCI模型。药物组大鼠术后给予腹腔注射0.1%七叶皂甙钠5 mg/(kg.d)治疗,CCI组给予等量生理盐水替代。各组于术前1 d取5只大鼠测定热痛觉,于术后8h、1 d、3 d、7 d、14 d及21 d时分别取5只大鼠测定热痛觉后处死。分别应用TUNEL法及免疫组化染色法检测大鼠相应损伤段脊髓组织中凋亡神经细胞数及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果各组大鼠术前1 d时热痛觉的比较差异无统计学意义。CCI组及药物组大鼠术后热痛觉均较正常对照组更敏感(均P<0.05);药物组大鼠术后热痛觉较CCI组迟钝(均P<0.05)。CCI组及药物组大鼠术后各时间点脊髓组织中凋亡细胞数均明显多于正常对照组(均P<0.05);药物组大鼠术后各时间点脊髓组织中凋亡细胞数均明显少于CCI组(均P<0.05)。CCI组大鼠术后8 h～14 d,药物组术后8 h～7 d脊髓组织TNF-α的表达均明显高于正常对照组(均P<0.05);两组TNF-α的表达均于术后8 h起逐渐增高,至术后3 d时达最高,其后逐渐减少(均P<0.05);并分别于术后21 d及14 d时降至正常对照组水平。结论结扎大鼠坐骨神经可产生神经病理性疼痛,并可诱发脊髓神经细胞凋亡。七叶皂甙钠能缓解坐骨神经结扎术后大鼠热痛觉增敏,这可能与其降低TNF-α在脊髓后角的表达及抑制神经细胞的凋亡有关。

经眶筛前神经结扎术治疗血管运动性鼻炎

目的 探讨经眶筛前神经结扎术治疗血管运动性鼻炎的疗效。方法 对 32例血管运动性鼻炎患者行筛前神经结扎术 ,观察近期和远期效果 ,并与同期行鼻内筛前神经灼断术患者 2 5例 2a的疗效进行比较。结果 观察组与对照组疗效差异显著 (P <0 .0 1)。观察组术后各种临床症状均明显减轻 ,1a有效率 90 % ,2a有效率 87.5 % ,合并哮喘者术后哮喘症状改善。结论 经眶筛前神经结扎术是治疗血管运动性鼻炎有效、可行的方法。

单侧坐骨神经完全结扎术后Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体在大鼠腰髓、背根神经节和结扎远侧端神经干内表达的变化(英文)

目的 研究单侧坐骨神经结扎对大鼠腰 4～ 5脊髓节段和相应的背根神经节 (DRGs)内VGluT1样免疫阳性反应产物表达的影响以及VGluT1通过轴浆流向外周转运的情况。 方法 采用免疫组织化学方法观察单侧坐骨神经结扎后不同时间内腰 4～ 5脊髓节段、DRGs和结扎部位的近、远侧端神经干内VGLuT1样免疫阳性反应强度的变化。结果 (1)坐骨神经结扎后第 1和第 2天 ,VGluT1样免疫阳性产物在结扎的同侧腰 4～ 5脊髓节段和相应节段的DRGs内未检测到明显变化 ;但自术后第 4天开始 ,可观察到VGluT1样免疫阳性产物的表达在上述部位逐渐减弱 ;VGluT1样免疫阳性产物表达的降低在上述部位所出现的时间和程度相平行。 (2 )结扎后第 1天即可观察到VGluT1样免疫阳性产物在坐骨神经结扎部位近侧端的表达有所升高 ,但自术后第 4天开始逐渐降低 ;而VGluT1样免疫阳性产物在坐骨神经结扎部位远侧端的表达自结扎后第 1天起就逐渐降低 ,至第 4周时已完全消失。结论 (1)DRG神经元合成VGluT1,并通过轴浆流将VGLluT1向中枢突和周围突运输 ,故腰髓内部分VGluT1样阳性末梢起源于DRG神经元 ;(2 )

腰4/5脊神经结扎大鼠慢性神经病性痛模型的建立

目的建立腰4/5脊神经结扎大鼠慢性神经病性痛模型.方法成年雄性Wistar大鼠26只,随机分为三组:实验组行左侧腰4/5脊神经结扎术(n=10);假手术组则暴露同侧腰4/5脊神经而不结扎(n=10);正常对照组不予处理(n=6).观察大鼠行为变化,并从术后3d始采用电击试验和甩尾试验分别测定大鼠痛阈与反应潜伏期,连续测定10周,1次/周.结果实验组大鼠术后行为异常;术后各时点电痛痛阈与甩尾反应潜伏期低于术前值、及假手术组、正常对照组相应时点值(P<0.05).结论大鼠结扎腰4/5脊神经后,可引出持久而明显的自发痛和诱发痛,作为一种慢性神经病性痛模型系成功的.

P物质抗血清对外周神经损伤性痛觉过敏的预防作用

本文探讨耗竭脊髓背角P物质(Substance P,SP)对外周神经损伤所引起的痛觉过敏的影响,结果表明给新生大鼠皮下注射SP抗血清,成年后脊髓背角SP明显耗竭(SP含量下降48.9％)的动物对损伤坐骨神经所造成的痛觉过敏较注射正常兔血清的对照组明显减轻(P<0.05),且背角SP含量越低,痛觉过敏表现也越轻。此外,还对SP参与调节外周神经损伤性痛觉过敏的机制进行了讨论。

脂氧素受体激动剂BML-111对慢性神经病理性疼痛大鼠治疗的研究

目的：观察脂氧素受体激动剂BML-111对L5/6脊神经结扎术后大鼠的镇痛效果。方法选择Wistar大鼠作为实验动物，建立L5/6脊神经结扎动物模型。观察鞘内给予不同剂量的BML-111对机械痛和热痛的抑制作用。鞘内给予100μg/kg BML-111并检测对患侧脊髓腰膨大部位IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响。结果 BML-111剂量依赖性抑制对L5/6脊神经结扎所导致的神经病理性疼痛；其机械痛和热痛最大抑制率分别是67%和69%；半数有效量分别为16μg/kg和22μg/kg。鞘内给予100μg/kg BML-111可有效降低患侧脊髓腰膨大部位IL-1β，IL-6， TNF-α含量（P〈0.05）。结论脂氧素受体激动剂BML-111可有效减轻L5/6脊神经结扎术后大鼠神经病理性疼痛，其机制可能与抑制脊髓背角炎症反应有关。

盐酸布比卡因对大鼠神经病理性疼痛的早期阻滞作用

目的:探讨盐酸布比卡因对大鼠L5脊神经结扎术(SNL)引起的神经病理性疼痛的早期阻滞作用。方法:雄性SD大鼠随机分为3组:L5SNL组:包括L5SNL手术组和L5SNL假手术组;L5脊神经背根切断术(DR)组:包括L5DR联合L5SNL组、L5DR假手术联合L5SNL组、L5DR联合L5SNL假手术组;L5背根节(DRG)节外注射盐酸布比卡因组:包括L5SNL术后L5DRG节外盐酸布比卡因注射组或HEPES缓冲液注射组。采用von Frey丝测试各组大鼠术侧及对侧后肢足底L4脊神经支配皮肤区域特异性的疼痛反应;用免疫荧光组织化学染色技术检测大鼠L5脊髓节段Iba-1的表达。结果:L5SNL术后大鼠术侧50%爪缩阈值(PWT)降低(P<0.05),并维持至第14 d;成功建立L5SNL疼痛模型。L5DR与L5SNL联合作用下,术侧50%PWT降低(P<0.05),其疼痛阈值水平及时程变化与仅进行L5SNL手术无差异(P>0.05)。L5SNL术后L5DRG节外盐酸布比卡因注射组和HEPES缓冲液注射组的大鼠术侧50%PWT均降低(P<0.05),但盐酸布比卡因注射组降低程度明显小于HEPES缓冲液注射组(P<0.05),且术侧脊髓第5腰椎节段内小胶质细胞基本无活化,与正常对照大鼠相比,无统计学差异(P>0.05),但与HEPES缓冲液注射组有明显差异(P<0.05)。结论:L5DR并不能阻断或减轻大鼠脊神经损伤引起的神经病理性疼痛,而L5DRG节外注射盐酸布比卡因可有效阻滞大鼠脊神经损伤引起的神经病理性疼痛行为反应和相应脊髓节段小胶质细胞的活化。

依达拉奉对L_5脊神经结扎神经性疼痛的影响及其治疗作用

目的:观察腹腔注射依达拉奉对L5脊神经结扎大鼠神经性疼痛的影响及其治疗作用。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为3组(n=10),即假手术+依达拉奉组(Ⅰ组)、手术组+生理盐水对照组(Ⅱ组)、手术组+依达拉奉治疗组(Ⅲ组),所有大鼠均在术前一天,术后第0,1,2,3,5,7天,用vonFrey细丝法分别测定大鼠机械刺激撤足反射阈值。结果:各组术前撤足反射阈值之间无明显差异,其平均值分别为(16.7±0.5),(16.2±0.7),(16.9±0.4)g。Ⅰ组大鼠术前和术后各时间点撤足反射阈值无显著性差异;Ⅱ组大鼠在术后术侧后足出现机械痛敏,以第1天最明显并持续至术后第7天;Ⅲ组机械痛敏较Ⅱ组明显降低(P<0.05),神经性疼痛明显减轻。结论:依达拉奉能减轻L脊神经结扎术诱导的神经性疼痛。