布托啡诺通过下调布托啡诺调节音猬因子/胶质瘤相关癌基因同源物1通路抑制胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的探讨布托啡诺调节音猬因子(SHH)/胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI1)信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将胶质瘤LN229细胞分为对照组、布托啡诺低剂量组、布托啡诺中剂量组、布托啡诺高剂量组以及布托啡诺高剂量+pc DNA3.1组、布托啡诺高剂量+pc-SHH组。MTT和Edu实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测Ki-67、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、裂解的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspase-3)、SHH和GLI1蛋白表达水平。结果布托啡诺可降低LN229细胞活力、增殖率,减少细胞迁移和侵袭个数(P<0.05)。布托啡诺可降低LN229细胞中SHH mRNA、GLI1 mRNA表达水平及Ki-67、MMP-2、SHH和GLI1蛋白表达,促进细胞凋亡和增高Cleaved-Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。过表达SHH可部分逆转布托啡诺对LN229细胞的抑制作用(P<0.05)。结论布托啡诺可以抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为,其机制可能与抑制SHH/GLI1信号通路有关。

超音刺猬蛋白 转录因子叉头框转录因子M1及神经胶质瘤相关癌基因同源物1在宫颈癌中的表达与临床意义

目的探究刺猬因子(Hedgehog)信号通路分子超音速刺猬蛋白(Shh)及其下游转录因子叉头框转录因子M1(FoxM1)和神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)在宫颈癌中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法选取遂宁市中心医院2016年1月至2016年8月收治的50例宫颈癌患者宫颈黏膜组织作为观察组,选取30例同期收入的宫颈黏膜组织正常的阴道炎患者作为对照组,应用免疫组化检测两组对象宫颈黏膜组织中Shh、FoxM1、Gli1的表达情况,分析宫颈癌组织中Shh、FoxM1、Gli1蛋白表达与临床病理特征之间的关系。结果 Shh、FoxM1、Gli1蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率分别为86%、90%、92%,较正常宫颈组织升高,差异有统计学意义(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1蛋白与患者年龄、肿瘤大小、浸润深度均无显著相关性(P>0.05);Spearman相关性分析显示,Shh在宫颈癌中的表达与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05);FoxM1只与淋巴结转移相关(P<0.05);Gli1的表达水平与宫颈癌组织的分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05);Shh、FoxM1、Gli1三者之间互为正相关(P<0.05)。结论 Shh、FoxM1、Gli1在宫颈癌组织中呈高表达状态,Shh和Gli1蛋白与宫颈癌组织分化程度有关,而FoxM1蛋白只与宫颈癌是否发生淋巴结转移有关,此三者的检测,有助于宫颈癌的早期诊断,可作为预测宫颈癌发生发展的指标。

非小细胞肺癌组织中胶质瘤相关癌基因同源蛋白2、TGF-β_1的表达变化

目的观察非小细胞肺癌组织中胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)与转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达变化。方法非小细胞肺癌患者89例,术中留取肺癌组织和癌旁正常余肺组织,采用免疫组化SP法检测Gli2、TGF-β1,分析二者表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系。结果非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Gli2阳性表达率分别为94.4%、13.5%,TGF-β1阳性表达率分别为100.0%、30.3%,两者相比,P均<0.05。不同肿瘤分期、淋巴结转移情况及血管侵犯情况的非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Gli2阳性表达率相比,P均<0.05;不同肿瘤直径、淋巴结转移情况和血管转移情况的非小细胞肺癌患者肿瘤组织中TGF-β1阳性表达率相比,P均<0.05;非小细胞肺癌组织中Gli2、TGF-β1的表达呈正相关关系(r=0.438,P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中Gli2、TGF-β1阳性表达率较高,二者可能共同参与了非小细胞肺癌的发生、发展。

信号转导及转录激活因子3、垂体同源框1及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为预后良好及预后不良。采用免疫组化法检测STAT3、PITX1、Gli-1蛋白表达情况,分析皮肤恶性黑色素瘤患者预后的影响因素。结果肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,PITX1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良患者肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均高于预后良好患者,PITX1阳性表达率低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤直径≥5 cm、STAT3阳性、PITX1阴性、Gli-1阳性均为皮肤恶性黑色素瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论STAT3、PITX1及Gli-l蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中存在异常表达,通过检测其水平能为临床治疗及预后提供新的思路与依据。

卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1和胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1的表达与患者临床病理特征和预后的关系

目的探究卵巢高级别浆液性癌组织中叉头框转录因子M1(forkhead box M1,FOXM1)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(glioma-associated oncogene homoglog-1,Gli-1蛋白)的表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2009年1月至2013年9月中国人民解放军中部战区总医院妇产科收治的经手术病理证实为卵巢高级别浆液性癌的82例患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测石蜡标本中FOXM1和Gli-1蛋白的表达情况;收集患者临床资料,分析FOXM1和Gli-1蛋白表达与患者临床病理特征和预后的关系。结果临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高(均P<0.05)。FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的20、40、60个月生存率均显著低于阴性表达患者(均P<0.05),累计存活时间均显著短于阴性表达患者(均P<0.05)。结论临床分期Ⅲ~Ⅳ期、高中分化和伴腹水的卵巢高级别浆液性癌患者FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达率均显著升高,且FOXM1和Gli-1蛋白阳性表达患者的生存率均下降。

组蛋白H2A去泛素化酶BAP1对恶性胶质瘤细胞发生发展的作用及临床应用价值研究

目的探索乳腺癌/卵巢癌易感基因1相关蛋白1(breast/ovarian cancer susceptibility gene 1 associated protein 1,BAP1)对人源恶性胶质瘤发生、发展的作用与BAP1作为恶性胶质瘤临床诊断标志物的可行性。方法基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)的子数据集GSE4290,GSE90598,分析BAP1在正常组织及胶质瘤组织中的差异性表达情况;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析BAP1对恶性胶质瘤的早期诊断价值;选取自主收集的非配对28例恶性胶质瘤患者的原发灶组织、5例颅脑外伤患者内减压术切除的非瘤脑组织,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测BAP1的表达水平;利用靶向BAP1的特异性小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)瞬时转染U251细胞系,进一步检测其干涉效率;基于流式细胞仪分析BAP1下调的U251细胞系,其细胞周期、凋亡的变化情况。结果生物信息学结果显示,BAP1在恶性胶质瘤组织中的表达水平均低于正常脑组织(GSE4290:1209±18.49 vs 1476±53.90;GSE90598:5.19±0.10 vs 5.65±0.21),差异具有统计学意义(t=5.115,2.267,均P<0.05)。ROC曲线显示,BAP1可高效区分恶性胶质瘤组织与正常脑组织(GSE4290:AUC=0.78;GSE90598:AUC=0.75,均P<0.05)。临床标本结果显示,BAP1在恶性胶质瘤原发灶组织中的表达水平显著低于非瘤脑组织(0.27±0.04 vs 1.06±0.07),差异具有统计学意义(t=10.22,P<0.001)。在U251细胞系中下调BAP1的表达,其细胞周期中S期细胞比例明显增多,由17.59%分别增至27.21%(siBAP1-1)和25.79%(siBAP1-2),差异具有统计学意义(t=6.576,6.642,均P<0.01),而细胞凋亡水平则有所下降,由10.17%分别降至2.70%(siBAP-1)和3.00%(siBAP-2),差异具有统计学意义(t=10.31,9.428,均P<0.01)。结论组蛋白H2A去泛素化酶BAP1能够通过抑制恶性胶质瘤细胞周期快速进展并促进其凋亡,进而发挥肿瘤抑癌基因的功能,可作为潜在的恶性胶质瘤临床诊断标志物。

胶质瘤相关癌基因蛋白-1预测乳腺癌复发转移的价值

目的:探讨乳腺癌病灶中胶质瘤相关癌基因蛋白-1(glioma oncogene protein-1,GLI-1)的表达水平与乳腺癌临床病理学特征及术后复发转移的关系。方法:分析221例有完整随访资料的乳腺癌患者的临床资料,在随访过程中出现转移、复发的42例患者作为复发转移组;从其余患者中随机抽取42例患者作为无复发生存组;另取确诊为良性乳腺肿瘤患者30例作对照组。用免疫组织化学技术检测乳腺癌和良性乳腺肿瘤患者原发病灶中GLI-1的表达水平,并分析其表达水平与乳腺癌临床病理学特征之间的关系,研究GLI-1在预测乳腺癌复发、转移中的作用。结果:复发转移组、无复发生存组84例患者中,乳腺癌病灶中GLI-1高表达59例(70.24%),低表达25例(29.76%);对照组患者原发病灶中GLI-1的表达为0例;乳腺良性肿瘤与乳腺癌病灶中GLI-1的表达差异有统计学意义(P<0.01)。恶性肿瘤病灶中GLI-1的表达水平与患者年龄、腋窝淋巴受累情况、肿瘤激素受体表达存在明显相关性(P均<0.05);肿瘤病灶中GLI-1的高表达与乳腺癌复发、转移密切相关[比数比(OR)=7.534,95%可信区间(95%CI)为2.104～26.974)];腋窝受累淋巴结数目不超过3个的乳腺癌患者(pN 0～3)中,原发病灶中GLI-1的高表达与肿瘤复发率、转移率增高明显相关(P<0.01);肿瘤病灶中GLI-1的高表达与患者术后出现肿瘤肝转移、骨转移密切相关(P<0.05);肿瘤病灶中GLI-1高表达的患者术后生存时间明显缩短(HR=1.852,95%CI为1.146～2.994)。结论:乳腺癌病灶中GLI-1的表达水平与乳腺癌的发生、复发、转移密切相关,并影响患者术后的总体生存时间。

胶质瘤相关癌基因同源蛋白2促进结肠癌细胞系SW620的上皮-间质转化

背景与目的:胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(glioma-associated oncogene homologue 2,GLI2)是Hedgehog信号通路重要的转录因子,不仅参与正常的细胞分化,而且在多种肿瘤细胞中异常激活,与肿瘤转移密切相关。探讨GLI2与结肠癌细胞系SW620上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系及其可能机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测人结肠癌细胞系SW620、SW480、HCT116和HT29中E-cadherinmRNA表达,以GLI2干扰慢病毒感染SW620细胞,用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GLI2 mRNA表达和蛋白水平,采用Transwell小室检测细胞侵袭、迁移能力,黏附实验检测同、异种细胞间黏附能力,Western blot检测细胞中p-AKT、N-cadherin、vimentin、MMP2和E-cadherin蛋白水平。结果:4种细胞系中,SW620的E-cadherin mRNA表达最低(P<0.05),SW620转染72 h后,可见明显的荧光表达;与空病毒组和对照组相比,干扰组细胞的GLI2表达降低(P<0.05);细胞侵袭和迁移能力减弱(P<0.05);同种细胞黏附能力增强(P<0.05);异种细胞黏附能力减弱(P<0.05);p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2的表达降低(P<0.05)、E-cadherin表达增加(P<0.05)。结论:GLI2可能通过上调p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2表达和抑制E-cadherin表达来促进结肠癌细胞系SW620的EMT。

胶质瘤相关癌基因蛋白-1在管腔型乳腺癌组织中表达及其与预后的关系

目的探讨胶质瘤相关癌基因蛋白-1(Gli1)在管腔(Luminal)型乳腺癌组织中表达及其与预后的关系。方法选取信阳市中心医院2012年7月至2014年7月收治的68例Luminal型乳腺癌病人临床资料进行回顾性分析。采用免疫组化方法检测乳腺癌组织及癌旁组织Gli1蛋白表达情况,分析Gli1蛋白表达与Luminal型乳腺癌病理特征及预后关系。结果乳腺癌组织Gli1高表达率(45.59%)高于癌旁组织Gli1高表达率(13.33%),χ^(2)=9.433,差异有统计学意义(P<0.05);Gli1蛋白高表达与Luminal型乳腺癌淋巴结转移密切相关(P<0.05);Gli1高表达5年无复发生存率(67.74%)低于Gli1低表达5年无复发生存率(89.19%),差异有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移、Gli1高表达是影响Luminal型乳腺癌无复发生存时间的独立危险因素(P<0.05)。结论Gli1蛋白在Luminal型乳腺癌组织中表达上调,并且与Luminal型乳腺癌复发转移密切相关。

BRAF V600阳性突变在神经胶质瘤中的靶向治疗进展

神经胶质瘤也称脑胶质瘤,是神经系统中最常见的、疗效最差的恶性肿瘤。鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)突变在神经胶质瘤亚型中经常发生,其中BRAF V600突变最为常见,特别是上皮样胶质母细胞瘤(eGBM)、多形性黄星形细胞瘤(PXA)、间变性神经节神经胶质瘤(aGG)和儿童低级别星形细胞瘤。Ⅱ期临床试验VE-BASKET使用了BRAF抑制剂维莫非尼治疗BRAF V600突变型神经胶质瘤,初步证明了该药的有效性。对于BRAF V600E突变低级别胶质瘤(LGG)和高级别胶质瘤(HGG)患者,Ⅱ期临床试验NCT02034110证明了另一种BRAF抑制剂达拉非尼联合丝裂原活化细胞外信号调节激酶(MEK)抑制剂曲美替尼具有显著疗效。此研究表明,双靶治疗的疗效优于BRAF单靶治疗。另有NCT02124772 I/II期研究证明在年龄<18岁的复发/难治性BRAF V600突变LGG中,单独使用曲美替尼或联用达拉非尼均可达到安全可控的目标浓度,并且证明了临床疗效和耐受性。目前,美国食品药品监督管理局(FDA)已加速批准达拉非尼联合曲美替尼用于治疗具有BRAF V600E突变的6岁及以上不可切除或转移性实体肿瘤的患者以及治疗一岁及以上需要全身治疗的LGG儿童患者。该文将聚焦于BRAF V600突变神经胶质瘤患者,对其临床/病理学特征及治疗进展进行系统阐述。

人脑胶质瘤CDK4、CyclinD1和P16基因蛋白表达的免疫组织化学研究

采用检测人脑胶质瘤中 CDK4、Cyclin D1和 P16基因蛋白的表达情况 ,探讨 G1→ S期细胞周期调节蛋白在胶质瘤发生 ,发展过程中的作用。对 39例近期手术的胶质瘤标本和 8例瘤旁正常脑组织标本进行免疫组织化学检测。结果显示 :CDK4蛋白在良性、交界性胶质瘤和瘤旁正常脑组织中的表达差异没有显著性意义 (P>0 .0 5 ) ,在恶性胶质瘤中的表达却有明显地增高 ,与前两者比较差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 )。 P16蛋白在恶性胶质瘤中的表达显著低于在瘤旁正常脑组织和良性、交界性胶质瘤中的表达 (P<0 .0 1) ,但在后两者中的表达差异没有显著性意义 (P>0 .0 5 )。 Cyclin D1蛋白在三者中的表达水平均较低且差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结果表明 :CDK 4蛋白的表达增高和 P16蛋白的表达下调发生在胶质瘤的较晚期阶段 ,与胶质瘤的恶性变和恶性胶质瘤的发生有关 ,而 Cyclin D1蛋白的表达可能与胶质瘤的发生和发展无关。

人脑神经胶质瘤中p16、p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的研究

目的 探讨 p16、p2 1WAF1/CIP1两种抑癌基因与人脑神经胶质瘤恶性程度的关系。方法 采用SABC免疫组织化学方法对 6 4例人脑胶质瘤组织及 8例正常脑组织标本中p16和 p2 1WAF1/CIP1表达情况进行检测 ,并进行相关分析。结果 ①p16和 p2 1WAF1/CIP1阳性表达率在人脑胶质瘤中分别为 4 5 .3%和 6 4 .1%与正常脑组织中的表达情况差异显著 (P <0 0 5 ) ;②p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白阳性表达率均随着胶质瘤的恶性程度的增高而降低 ,差异显著 (P <0 0 1) ,且呈负相关关系 ;③p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白可协同表达 ,且在正常脑组织和脑胶质瘤各分级中 p16蛋白和 p2 1WAF1/CIP1蛋白协同表达率差异显著 (P <0 0 5 ) ,并呈负相关关系。结论 p16与p2 1WAF1/CIP1蛋白的阳性表达率及协同表达率可在一定程度上反映胶质瘤细胞的恶性程度 。

西藏地区结直肠癌免疫治疗和靶向治疗相关分子标志物的检测及意义

目的研究西藏地区结直肠癌中SWI/SNF相关、基质相关、肌动蛋白依赖性染色质调节因子A亚科成员4(SMARCA4)/Brahma相关基因1、V-raf鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B(BRAF)、P53、程序性死亡受体1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)免疫组织化学表达和BRAF、神经营养因子酪氨酸受体激酶(NTRK)基因改变情况,为西藏地区结直肠癌患者的靶向治疗及免疫治疗提供依据。方法收集2015年1月至2021年7月西藏自治区人民医院经手术切除病理确诊为结直肠癌病例64例,全部病例均进行SMARCA4、BRAF、P53、PD-1、PD-L1免疫组织化学染色和NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因荧光原位杂交检测及BRAF V600E基因突变PCR检测。结果64例结直肠癌病例男女比例1.21∶1,平均年龄(56.59±13.27)岁;46例(71.88%)位于结肠,18例(28.12%)位于直肠;60例(93.75%)为腺癌,4例(6.25%)为其他类型;11例(17.19%)为T1或T2期,53例(82.81%)为T3或T4期;24例(37.50%)出现淋巴结转移。免疫组织化学方面,64例中1例(1.56%)SMARCA4部分肿瘤细胞表达减弱或缺失,4例(6.25%)BRAF肿瘤细胞阳性表达,35例(54.69%)P53为突变型表达;45例(70.31%)PD-1肿瘤相关免疫细胞阳性比例分数<10%,19例(29.69%)≥10%;52例(81.25%)PD-L1联合阳性分数<10,12例(18.75%)≥10。64例NTRK1、NTRK2、NTRK3融合基因检测均为阴性;4例(6.25%)检测到BRAF V600E基因突变;1例SMARCA4表达缺失病例未检测到SMARCA4基因改变。PD-L1的表达与错配修复缺陷/高度微卫星不稳定和PD-1的高表达呈显著正相关(χ^(2)=10.223,P=0.001;χ^(2)=11.979,P=0.001)。结论西藏地区结直肠癌中较少出现SMARCA4表达减弱或缺失及NTRK融合基因改变,少数病例有BRAF V600E基因突变,Pan-TRK和BRAF免疫组织化学可作为NTRK融合基因及BRAF基因突变的初筛方法。错配修复缺陷/高度微卫星不稳定的病例中更容易出现PD-L1蛋白高表达,这部分患者有望获益于免疫治疗。P53突变与PD-L1表达无相关性,PD-1的高表达和PD-L1的高表达呈正相关。

柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。

水苏碱调节Shh/Gli1信号通路对口腔癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组。EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响。结果L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05)。Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05)。结论Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的。

缺氧对宫颈癌SiHa细胞中Gli1与Sox2表达的影响

目的:分析胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)和性别决定区Y框蛋白2(Sox2)在宫颈癌细胞中的表达及其病理学意义,探讨Gli1与宫颈癌干性特征的相关性。方法:采用免疫组织化学染色方法检测159例宫颈癌组织中Gli1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Sox2、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)、分化簇44(CD44)、八聚体结合转录因子4(OCT4)和赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)的表达并分析其相关性;使用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)明确Gli1对宫颈癌状细胞患者预后的影响及其与干细胞标志物的相关性;缺氧条件下检测SiHa细胞的球体形成能力及其干细胞标志物表达。结果:免疫组织化学染色,在宫颈癌组织中Gli1表达率与HIF-1α(r=0.374,P<0.001)和Sox2表达水平(r=0.176,P<0.05)呈正相关关系;GEPIA数据库分析,宫颈癌中Gli1阳性表达的患者预后差(P<0.05)。缺氧条件下SiHa细胞中Gli1、HIF-1α和Sox2的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.001),且具有较强的球体形成能力。结论:缺氧上调宫颈癌细胞Gli1和Sox2 mRNA及蛋白表达水平,促进癌细胞的干性特征形成。

沉默Gli2基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默胶质瘤相关癌基因同源蛋白2基因(glioma associated oncogene homolog 2,Gli2)对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:以重组shRNA-Gli2慢病毒感染SMMC-7721细胞,筛选沉默效果最佳干扰序列。以携最佳干扰序列重组慢病毒感染SMMC-7721细胞为干扰组,shRNA-NC慢病毒感染SMMC-7721细胞为对照组,不作处理SMMC-7721细胞为空白组。采用CCK-8法与集落形成实验检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率;用q PCR和Western blotting法检测各组细胞Gli2、cyclin D1、Bax和Bcl-2 mRNA及其蛋白质的表达。结果:重组慢病毒感染率约为90%,重组shRNA-Gli2-1慢病毒沉默效果最佳;干扰组SMMC-7721细胞Gli2 mRNA和蛋白质表达显著低于对照组与空白组(均P<0.05),而对照组与空白组之间Gli2 mRNA和蛋白质表达差异不显著(P>0.05)。干扰组SMMC-7721细胞的增殖和细胞集落形成数明显少于对照组和空白组(均P<0.05);干扰组SMMC-7721细胞凋亡率显著高于对照组和空白组(均P<0.01);干扰组SMMC-7721细胞cyclin D1及Bax mRNA和蛋白质表达显著低于对照组和空白组,而Bcl-2 mRNA和蛋白质表达则显著高于对照组和空白组(均P<0.05)。结论:沉默Gli2基因的表达能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,其机制可能与cyclin D1、Bax的下调和Bcl-2上调有关。

卵巢癌组织中Gli1的表达及其与E-cadherin相关性的研究

目的:分析胶质瘤相关癌基因同源1(Gli1)在卵巢癌组织中的表达情况及其与E-钙黏蛋白(Ecadherin)的相关性。方法:采用免疫组化染色技术检测50例卵巢癌及50例良性卵巢组织中Gli1和Ecadherin的表达情况。结果:Gli1在卵巢癌组织中的表达显著高于良性卵巢组织(t=2.284,P=0.035),而E-cadherin在卵巢癌组织中的表达显著低于良性卵巢组织(t=4.460,P=0.001)。Gli1和E-cadherin在卵巢癌组织中表达呈负相关(r=-0.571,P=0.029)。结论:卵巢癌组织中Gli1表达升高,且与E-cadherin表达呈负相关,Gli1可能作为卵巢癌的治疗靶点和判断预后的指标。

Gli通过PLK1对食管腺癌细胞肿瘤生物学行为影响的研究

目的观察胶质瘤相关癌基因同源物(glioma-associated oncogene homolog,Gli)通过Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)对食管腺癌肿瘤生物学行为的影响并探讨其相关的分子机制。方法应用二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、GANT61、N-Shh蛋白及GANT61&N-Shh分别处理食管腺癌OE33细胞株24 h后,实时荧光定量PCR法和Western blot法观察Gli1、Gli2和PLK1的表达;GANT61处理细胞48 h后观察对Gli1、Gli2、PLK1蛋白表达的影响,流式细胞术观察GANT61处理细胞72 h后对细胞周期和凋亡的影响。结果 GANT61组在Gli1 mRNA和Gli1蛋白、Gli2 mRNA和Gli1蛋白以及PLK1 mRNA和Gli1蛋白的表达明显低于DMSO组,N-Shh组明显高于DMSO组和GANT61组,GANT61+N-Shh组低于DMSO组,但高于GANT61组(P<0.05);GANT61组G0/G1期、S期和G2/M期增殖率以及GANT61组培养72 h凋亡率均高于DMSO组(P<0.05)。结论 Gli和PLK1异常表达在食管腺癌细胞中存在串活机制,两者可以调节细胞周期和凋亡,在食管腺癌发生发展中发挥重要作用。