神经胶质细胞生长因子对快速起搏所致猴心衰的保护作用及机制研究

目的研究重组人神经胶质细胞生长因子(NRG)对快速起博所致猴心衰心肌收缩力的影响及给予重组人NRG后心肌细胞内葡萄糖转运蛋白1(Glut1)mRNA表达水平的变化。方法成年雄性恒河猴24只,随机分为假手术组、心力衰竭组及NRG治疗组,每组8只。治疗组240次/min起搏7d后,起搏状态下连续10d,每天1次静脉注射重组人NRG3μg/kg,心力衰竭组给予同体积生理盐水。连续给药10d结束后,测定左心室的最大压力上升速度(LVdp/dtmax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LVSP)等血流动力学指标。提取左室心肌组织mRNA,采用RT-PCR的方法分析PKB、Glut1mRNA的表达水平。Western Blotting测定心室肌磷酸化PKB蛋白含量。结果心力衰竭组LVdp/dtmax、LVSP低于假手术组(P<0.05),LVEDP高于假手术组(P<0.05);NRG治疗组LVdp/dtmax高于心力衰竭组(P<0.05),LVSP有上升的趋势(上升了11%),LVEDP有下降的趋势(下降了39%)。心力衰竭组PKB、Glut1mRNA表达水平均低于假手术组(P<0.05);治疗组PKB、Glut1mR-NA表达水平高于心力衰竭组(P<0.05)。治疗组磷酸化PKB蛋白水平比心力衰竭组上升了177%(P<0.05)。结论重组人NRG可能通过向上调节PKB、Glut1mRNA表达水平,改善缺血心肌能量供应这一机制来增强心肌收缩力,从而达到治疗心衰的目的。

神经胶质细胞生长因子-1β对慢性心衰大鼠心功能及促血管生成素、大麻素受体、蛋白激酶C表达的影响

目的分析神经胶质细胞生长因子-1β(neuregulin-1β)对慢性心衰大鼠心功能及促血管生成素(Ang2)、大麻素受体(CB1)、蛋白激酶C(PKC)表达的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、neuregulin-1β干预组(each n=10)。采用尾静脉注射阿霉素(20 mg/kg)的方法建立慢性心衰大鼠模型,并通过心脏超声确定模型成功。干预组于建模成功后连续1周每天尾静脉给予neuregulin-1β(10μg/kg·d),正常组给予与模型组等体积的生理盐水。三组大鼠均于实验第9周行大鼠心脏超声及血流动力学检测,取心肌组织进行HE染色进行病理学检测,采用Western blotting法检测三组大鼠心肌组织中PKC蛋白量,采用免疫组织化学法检测三组大鼠心肌组织中Ang2、CB1蛋白相对表达量。结果模型组和neuregulin-1β干预组在第8周心脏超声指标均显示慢性心衰大鼠模型建立成功。neuregulin-1β干预1周后,与模型组比较,干预组的心脏超声指标左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径均显著性降低(P<0.05),左室缩短率与左室射血分数均显著性升高(P<0.05);血流动力学指标左心室收缩压(LVSP)、左心室内压最大上升速率、左心室内压最大下降速率均显著性升高(P<0.05),左心室舒张末期压显著性降低(P<0.05);PKC相对蛋白量显著减少(P<0.05);Ang2和CB1阳性区域评分明显降低(P<0.05);同时病理结果显示,neuregulin-1β干预组较模型组心肌病变较轻,除部分心肌水肿外,未见明显的心肌细胞坏死、炎证浸润及明显的血管充血扩张。结论 neuregulin-1β的干预显著改善大鼠心肌细胞的病变情况,其作用机制可能与下调PKC蛋白及Ang2、CB1的表达有关。

神经生长因子通过促进少突胶质前体细胞分化改善脑组织缺血低氧的实验研究

目的探讨神经生长因子(NGF)改善脑组织低氧缺血状态作用机制。方法本研究通过培养混合神经干细胞(NSC)衍生的少突胶质细胞前体细胞(OPC)/星形胶质细胞培养来阐明神经生长因子在整个少突胶质细胞(OL)分化过程中的作用,并探讨其在缺血低氧状态条件下对OPC的保护作用。结果共聚焦显微镜检查结果显示,GW-44175610μM处理组细胞凝聚核百分比显著高于0.1μM、1μM及NGF抗体组(P<0.05)。抗NGF抗体处理组及GW-4417561μM处理组分化末期OPC百分比显著高于其他组(P<0.05)。抗NGF抗体处理组及GW-44175610μM处理组成熟OL及成髓鞘OPC百分比显著低于其他组(P<0.05)。抗NGF抗体处理组及GW-44175处理组NG2-阳性细胞比例显著高于其他组(P<0.05);抗NGF抗体处理组及GW-44175处理组CNPase/MBP染色细胞比例显著低于其他组(P<0.05);GW-441756处理组GFAP染色细胞比例显著高于其他组(P<0.05)。共聚焦显微镜检查结果显示,OGD处理组星形胶质细胞NGF mRNA表达水平显著高于无OGD处理组(P<0.05);NGF处理组细胞核内蛋白激酶B(AKT)荧光强度水平显著高于无NGF处理组(P<0.05);NGF处理组细胞核中磷酸化AKT荧光强度显著高于无NGF处理组、神经生长因子抗体(Ab-NGF)处理组及原肌球蛋白受体激酶A(TRKA)拮抗剂组(P<0.05)。结论NGF在体外细胞培养中与星形胶质细胞的相互作用可调节OPC生理分化;同时在缺血低氧状态下其对于OPC存活及OL成熟具有明确保护作用。

miR-146a-3p抑制胰岛素样生长因子1表达调控星形胶质细胞增殖、迁移和凋亡

背景:mi R-146a-3p水平改变是大多数神经系统疾病发病机制中的常见事件,mi R-146a-3p调节星形胶质细胞的具体机制尚未被研究。目的:验证mi R-146a-3p通过胰岛素样生长因子1调控星形胶质细胞的增殖、迁移和凋亡。方法:将12只SD大鼠随机分为假手术组和脊髓损伤组,每组6只。术后2周对大鼠脊髓组织进行了RNA-Seq测序分析,筛选出差异基因(log2FC>2),同时挑选出Genecards数据库中脊髓损伤相关基因(Score>20),再通过Targetscan预测mi R-146a-3p的靶基因,取这3个基因集交集,筛选出胰岛素样生长因子1为其中一个重要的目的基因。q PCR、Western blot和免疫组化分析脊髓组织中胰岛素样生长因子1的表达水平。将原代星形胶质细胞分为NC组、NC-mimics组和mi R-146a-3p mimics组,用Annexin-V/PI染色法检测细胞凋亡情况、CCK-8法检测细胞增殖情况、Transwell法检测细胞的迁移能力。结果与结论:脊髓损伤组大鼠脊髓组织中mi R-146a-3p的表达较假手术组下降(P<0.05),胰岛素样生长因子1的表达较假手术组上升(P<0.05)。与NC组和NC-mimics组比较,mi R-146a-3p mimics组星形胶质细胞凋亡率增加(P<0.01),增殖能力下降(P<0.01),迁移数量减少(P<0.01)。结果表明,脊髓损伤后脊髓组织中mi R-146a-3p表达量下降,胰岛素样生长因子1表达量上升;在星形胶质细胞中mi R-146a-3p靶向调节胰岛素样生长因子1抑制星形胶质细胞的增殖和迁移,促进其凋亡。

过表达肝细胞生长因子的内皮祖细胞移植促进坐骨神经挤压伤修复的研究

目的探讨过表达肝细胞生长因子(HGF)慢病毒转染的内皮祖细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用。方法体外实验方面,提取大鼠骨髓的内皮祖细胞(EPC)并利用DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染法进行鉴定。EPC转染慢病毒后采用qRT-PCR实验检测HGF基因表达水平。采用CCK-8实验、Transwell实验以及血管形成实验对转基因EPC的体外功能进行评估。体内实验方面,随机将25只SD大鼠平均分为5组,即对照组(Con组)、正常EPC组(N-EPC组)、空载病毒转染EPC组(LV-NC组)、过表达HGF病毒转染EPC组(LV-HGF组)和假手术组(Sham组)。各组大鼠暴露出右侧坐骨神经后,在坐骨神经分叉处上方10 mm处使用止血钳形成2 mm宽的坐骨神经挤压伤,假手术组在暴露神经后不做处理;分别将转染空载慢病毒EPC、转染过表达HGF慢病毒EPC或正常EPC与基质胶按1∶1体积比混合后注入伤处神经外膜下,而对照组不注入EPC。术后4周,运用Catwalk检测大鼠运动功能的恢复情况,电生理实验检测神经传导功能的恢复情况,透射电镜观察髓鞘厚度,甲苯胺蓝染色观察神经纤维密度,腓肠肌湿重称重检测肌肉萎缩程度,马松染色检测各组手术侧的腓肠肌肌纤维面积。结果体外实验结果显示,与正常EPC组相比,LV-HGF组EPC在CCK8实验中细胞增殖速度更快(P<0.05),Transwell实验中细胞迁移速率更高(P<0.01),在血管形成实验中形成更多血管状结构(P<0.01)。动物实验结果显示,LV-HGF组的坐骨神经功能指数值显著高于其他3组(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);复合肌肉动作电位波幅更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);再生坐骨神经的髓鞘较厚(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);有髓神经纤维密度更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);腓肠肌湿重比值更高(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.01;LV-NC组,P<0.01);肌纤维平均面积较大(Con组,P<0.01;N-EPC组,P<0.05;LV-NC组,P<0.05);LV-HGF组以上实验结果与Sham组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论过表达HGF基因可以增强EPC的增殖、迁移及分化功能。在坐骨神经挤压伤后,HGF基因转染的EPC相较于正常EPC,能更明显地促进了受损周围神经结构和功能的恢复,其机制与促进受损周围神经的轴突再生及髓鞘形成有关。

鼠神经生长因子联合低剂量重组人促红细胞生成素对早产儿脑损伤后神经发育的影响

目的:探讨鼠神经生长因子(mNGF)联合低剂量重组人促红细胞生成素(rh Epo)对早产儿脑损伤后神经发育的影响。方法:选取2021年3月~2022年3月期间某院收治的200例脑损伤早产儿作为研究对象,依据随机数字表法分为对照组和观察组,每组100例。两组患儿均给予营养支持、水电解质纠正、血糖、血压维持等常规治疗,对照组在常规治疗基础上给予注射用鼠神经生长因子,观察组在对照组治疗基础上静脉注射低剂量重组人促红素注射液(CHO细胞)。比较两组患儿脑损伤相关因子[神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100钙结合蛋白β(S100β)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)]、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-18(IL-18)、Toll样受体4(TLR4)]水平、神经发育异常情况、智能等级及不良反应发生情况。结果:治疗后,两组患儿NSE、S100β、8-OHdG、8-iso-PGF2α水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);两组患儿TNF-α、IL-18、TLR4水平均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);观察组患儿神经发育异常项目≥3项及异常项目≥1项的发生率均低于对照组(P<0.05);两组患儿智能等级均呈升高趋势(P<0.05),且观察组升高趋势更明显(P<0.05);两组患儿不良反应总发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论:在常规治疗基础上联用m NGF、低剂量rhEpo可有效降低患儿脑损伤相关因子水平及神经发育异常率,提高智能等级,且未增加不良反应的发生风险。

3.0T超导磁共振成像和单核细胞与高密度脂蛋白比值、成纤维细胞生长因子与糖尿病周围神经病变的关系

目的:探究3.0T超导磁共振成像(MRI)及成纤维细胞生长因子(FGF21)、单核细胞/高密度脂蛋白比值(MHR)与糖尿病周围神经病变(DPN)的相关性。方法:选取2021年1月至2022年12月新疆医科大学附属中医医院诊治的80例2型糖尿病(T2DM)患者,根据是否合并DPN将其分为DPN组(44例)和非DPN(NDPN)组(36例)。两组均采用3.0T超导MRI行磁共振(MR)扩散张量成像技术检查,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清FGF21、MHR水平。比较两组MR扩散张量成像检查参数中视神经各向异性分数(FA)、平均弥散系数(MD)、平行扩散系数(λ_(∥))及垂直扩散系数(λ_(⊥))值,以及血清FGF21、MHR水平差异。采用Spearman秩相关分析探究MR弥散张量成像参数及FGF21、MHR与DPN的相关性。结果:两组患者的性别、体质量指数(BMI)比较,差异无统计学意义(P>0.05),DPN组患者的年龄、病程均显著高于NDPN组,差异有统计学意义(t=5.039、7.852,P<0.05),FA值显著低于NDPN组,MD、λ_(∥)及λ_(⊥)值显著高于NDPN组,差异有统计学意义(t=8.934、10.459、12.233、4.640,P<0.05);DPN组血清FGF21、MHR水平显著高于NDPN组,差异有统计学意义(t=3.286、24.509,P<0.05)。Spearman秩相关性结果显示,患者的年龄、病程、MD、λ_(∥)、λ_(⊥)值、FGF21及MHR水平与DPN呈显著正相关(r=0.458、0.666、0.836、0.799、0.445、0.282、0.864,P<0.05),FA与DPN呈显著负相关(r=-0.753,P<0.05)。结论:MR弥散张量成像相关参数及FGF21、MHR水平均与DPN存在显著相关性,且患者的年龄、病程也与DPN的发生有关,需引起临床的重视。

血清转化生长因子β1与白细胞介素6水平对原发性干燥综合征并发神经系统病变的评估作用

分析白细胞介素6、血清转化生长因子β1在原发性干燥综合征同时合并神经系统病变中的预测价值。方法 采集我院接纳的原发性干燥综合征病例中的86例参与研究,时间段为2021年7月到2023年6月,按照患者是否出现并发神经系统病变进行分组,即研究组(26例)和对照组(60例),针对两组患者自身抗体、生化指标、病理特征以及基础资料展开比较和分析。结果 较之于对照组而言,研究组补体C4指标下降更为显著,而IL6、TGFβ1以及ESSDAI得分等指标显著提升,组间差异经过分析存在统计学意义(P<0.05),IL6以及TGFβ1在并发神经系统病变中的预测价值较高,且两者进行联合检验可以提升整体预测效果,组间差异经过分析存在统计学意义(P<0.05),和对照组相比较,研究组生化指标高密度脂蛋白、间接胆红素显著更低,而肾小球滤过率水平却显著更高,组间差异经过分析存在统计学意义(P<0.05)。结论 IL6以及TGFβ1可以当作原发性干燥综合征并发神经系统病变预测评估的关键生物标志物之一,可以给早期的治疗和诊断提供科学依据,值得进行推广。

神经生长因子促进兔骨髓间充质干细胞软骨分化并抑制肥大分化

背景:神经生长因子是一种诱导神经生长的蛋白质,能调节间充质干细胞的增殖、分化等生物学行为。目的:探讨神经生长因子对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用。方法:分离培养兔骨髓间充质干细胞,将神经生长因子通过慢病毒转染的方式转染到骨髓间充质干细胞,以转染空载病毒为对照,CCK-8法、细胞划痕实验、茜素红染色、Western blot检测神经生长因子对骨髓间充质干细胞增殖、迁移、肥大分化、成软骨分化的影响。为进一步探讨神经生长因子对骨髓间充质干细胞成软骨分化的促进作用,转染空载病毒和转染神经生长因子的骨髓间充质干细胞分别加入白细胞介素1β诱导培养14 d,Western blot检测成软骨分化、肥大分化相关蛋白的表达。结果与结论:(1)CCK-8检测结果表明神经生长因子对骨髓间充质干细胞增殖没有明显影响;(2)与对照组相比,过表达神经生长因子后细胞迁移能力增强,成软骨相关蛋白Ⅱ型胶原、SOX9的表达上调(P<0.05),肥大相关蛋白Ⅹ型胶原、RUNX2的表达下调(P<0.05);(3)与空载病毒+白细胞介素1β组相比,过表达神经生长因子+白细胞介素1β组成软骨相关蛋白Ⅱ型胶原、SOX9的表达上调(P<0.05),肥大相关蛋白Ⅹ型胶原、RUNX2的表达下调(P<0.05);(4)结果表明,神经生长因子可促进骨髓间充质干细胞成软骨分化。

左乙拉西坦联合鼠神经生长因子治疗脑卒中后癫痫对患者神经细胞因子和认知功能的影响

目的探讨脑卒中后癫痫患者应用左乙拉西坦联合鼠神经生长因子治疗对其神经细胞因子和认知功能的影响。方法将2021年2月至2023年5月河南省南阳市第一人民医院收治的脑卒中后癫痫90例,依据治疗方法不同分为对照组(30例)、干预组(30例)、试验组(30例)。对照组实施左乙拉西坦治疗,干预组实施鼠神经生长因子治疗,试验组实施左乙拉西坦联合鼠神经生长因子治疗,治疗时间为1个月。对比3组患者临床疗效,治疗前后左大脑中动脉血流、右大脑中动脉血流、基底动脉血流、神经细胞因子[胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、S-100β蛋白(S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)]水平,治疗前及治疗2、4周后炎症因子[微小核糖核酸-222(miR-222)、白细胞介素-6(IL-6)]水平、认知功能[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、简易智力状态检查量表(MMSE)]评分。结果经过临床治疗试验组总有效率高于对照组、干预组(χ^(2)=7.081,P<0.05),3组治疗后左大脑中动脉血流、右大脑中动脉血流、基底动脉血流相较于治疗前升高,试验组相较于对照组、干预组更高(F=42.600、23.662、21.116,P<0.05),3组治疗后GFAP、S-100β、NSE相较于治疗前降低,试验组比对照组更低;BDNF相较于治疗前升高,试验组相较于对照组、干预组更高(F=29.842、97.544、13.495、78.796,P<0.05),3组治疗2、4周后miR-222、IL-6水平相较于治疗前降低,试验组相较于对照组、干预组更高(F=12.572、15.907,12.286、26.380,P<0.05),3组治疗2、4周后MoCA、MMSE评分相较于治疗前升高,试验组相较于对照组、干预组更高(F=12.572、15.907,12.286、26.380,P<0.05)。结论左乙拉西坦联合鼠神经生长因子治疗应用于脑卒中后癫痫患者中,可提高疗效,促进脑部血液代谢,改善神经功能,减轻机体的炎症程度,缓解认知损伤。

血清成纤维细胞生长因子2、脑源性神经营养因子水平变化与产后抑郁症的关系

目的探究产后抑郁症(PPD)患者血清成纤维细胞生长因子2(FGF2)和脑源性神经营养因子(BDNF)水平的变化,并分析其与病情严重程度的关系。方法选取2020年10月至2022年10月丽水市第二人民医院收治的96例PPD患者作为研究对象,设为PPD组。另随机选取同期96例正常产妇设为对照组。记录两组的基线资料。采用酶联免疫吸附试验法检测血清FGF2和BDNF水平,采用爱丁堡产后抑郁量表(EPDS)评价PPD病情严重程度。采用Pearson法分析PPD患者血清FGF2、BDNF水平与EPDS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析影响PPD发生的可能因素。结果PPD组产前抑郁比例、妊娠期抑郁比例、EPDS评分、焦虑自评量表(SAS)评分及抑郁自评量表(SDS)评分均高于对照组(P<0.05);PPD组血清FGF2和BDNF水平均低于对照组(P<0.05)。PPD患者血清FGF2水平与EPDS评分呈负相关(r=-0.564,P<0.05),血清BDNF水平与EPDS评分呈负相关(r=-0.493,P<0.05);FGF2、BDNF是产妇发生PPD的保护因素(P<0.05),产前抑郁及妊娠期抑郁是产妇发生PPD的危险因素(P<0.05)。结论FGF2、BDNF在PPD患者血清中低表达,二者均与EPDS评分呈负相关,在PPD的病情缓解方面可能具有一定临床应用价值。

神经胶质细胞系衍生神经营养因子和雄激素受体在手术诱导隐睾小鼠睾丸管周细胞中的表达

【目的】探讨神经胶质细胞系衍生神经营养因子(GDNF)和雄激素受体(AR)在隐睾症小鼠睾丸管周细胞中的表达水平及对隐睾症导致生精功能障碍的理论意义。【方法】30只5周龄雄性ICR小鼠采用随机数字表法随机分配至6组中,随机抽取3组15只小鼠进行手术诱导隐睾,其余3组为作为对照组进行假手术处理。分别于4 d、7 d、14 d后取各组睾丸组织,然后测量睾丸体积、观察睾丸组织病理,提取各组睾丸管周细胞后利用免疫荧光、Re⁃al-Time PCR和蛋白质印记法检测AR和GDNF的mRNA和蛋白的表达。【结果】对照组4 d、7 d、14 d小鼠的睾丸体积分别为(125.58±19.22)mm^(3)、(123.45±20.12)mm^(3)、(140.09±13.62)mm^(3);睾丸各级生精细胞排列整齐、层次清楚,可见较多精子细胞,生精小管周围管周细胞形态规则,呈梭形围绕小管周围,细胞厚度均一;ARmRNA的表达量分别为1.00±0.05、1.06±0.07、1.19±0.13GDNFmRNA的表达量分别为1.00±0.04、1.09±0.05、1.10±0.07;AR蛋白的表达量分别为1.01±0.01、0.79±0.02、1.01±0.04;GDNF蛋白的浓度分别为(18.68±0.43)pg/mL、(14.39±0.36)pg/mL、(16.88±0.37)pg/mL。隐睾组4 d、7 d、14 d小鼠的睾丸体积分别为(115.64±3.91)mm^(3)、(69.51±14.97)mm^(3)、(44.86±5.56)mm^(3);睾丸各级生精细胞排列紊乱、层次不清、结构破坏,曲细精管周围管周细胞萎缩、弯曲断裂;ARmRNA的表达量分别为0.76±0.06、0.53±0.04、0.29±0.02;GDNFmRNA的表达量分别为0.72±0.05、0.42±0.02、0.30±0.03;AR蛋白的表达量分别为0.54±0.02、0.98±0.04、0.31±0.01;GDNF蛋白的浓度分别为(8.50±0.34)pg/mL、(17.44±0.32)pg/mL、(6.83±0.34)pg/mL。上述指标与对照组相比,除了4 d的睾丸体积差异无统计学意义(P>0.05),其他均有统计学差异(P<0.05)。对照组中3个时间点的睾丸体积、AR和GDNF的mRNA、蛋白表达量的差异无统计学意义(P>0.05),隐睾组3个时间点的睾丸体积、AR和GDNF的mRNA、蛋白表达量呈逐渐下降趋势且各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】在手术诱导隐睾小鼠中,睾丸管周细胞的AR和GDNF的表达水平随着诱导时间的延长呈现显著下降。AR和GDNF在隐睾症介导睾丸管周细胞功能的损伤中有重要作用。本研究为阐明隐睾症导致生精功能障碍的机制研究提供理论基础。

抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子、胰岛素样生长因子1水平变化及其与睡眠障碍关系研究

目的:探究抑郁症患者血清胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平变化及其与睡眠障碍的关系。方法:选取抑郁症患者120例为抑郁症组,选取体检健康者120例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定所有受试者血清GDNF、IGF-1水平。对所有受试者进行匹茨堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分,根据PSQI评分结果将抑郁症患者分为无睡眠障碍组(22例)和有睡眠障碍组(98例),其中轻度、中度、重度睡眠障碍组分别为28例、43例、27例。比较抑郁症组与对照组血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分,以及不同临床特征抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平。比较无睡眠障碍组与有睡眠障碍组抑郁症患者以及不同严重程度睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平及PSQI评分。分析抑郁症伴睡眠障碍患者血清GDNF、IGF-1水平与PSQI评分的相关性,抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平对睡眠障碍发生的预测价值,以及抑郁症患者睡眠障碍发生的影响因素。结果:抑郁症组血清GDNF、IGF-1水平低于对照组,PSQI评分高于对照组(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1水平与自杀行为、发病次数、家族史无关(均P>0.05)。有睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平低于无睡眠障碍组,PSQI评分高于无睡眠障碍组(均P<0.05)。轻度睡眠障碍组、中度睡眠障碍组和重度睡眠障碍组血清GDNF、IGF-1水平依次降低,PSQI评分依次升高(均P<0.05)。有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF与IGF-1水平呈正相关,血清GDNF、IGF-1水平均与PSQI评分呈负相关(均P<0.05)。抑郁症患者血清GDNF、IGF-1单项及两者联合预测睡眠障碍发生的曲线下面积(AUC)分别为0.767、0.754、0.854,其中血清GDNF、IGF-1各自单独预测的AUC低于两者联合预测的AUC(均P<0.05)。GDNF低水平、IGF-1低水平均是抑郁症患者发生睡眠障碍的独立危险因素(均P<0.05)。结论:有睡眠障碍抑郁症患者血清GDNF、IGF-1呈低水平,且两者与睡眠障碍严重程度有关。血清GDNF、IGF-1对抑郁症患者睡眠障碍的发生有较高预测价值。

重组人神经生长因子通过抑制小胶质细胞炎症反应发挥神经保护作用

目的探讨重组人神经生长因子(rhNGF)的神经保护作用及其机制。方法BV2小胶质细胞分为细胞对照组、脂多糖(LPS)组及LPS+rhNGF 50和500μg·L^(-1)组。除细胞对照组外,其余3组用LPS 1 mg·L^(-1)刺激BV2细胞24 h诱导BV2细胞炎症反应,随后LPS+rhNGF组加rhNGF继续孵育48 h。孵育结束后收集BV2细胞,并收集各组培养上清即条件培养基(MCM),各组BV2细胞和MCM分别与小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a(N2a)共培养12或24 h。CCK-8法检测BV2细胞存活率,实时荧光定量PCR检测BV2细胞中促炎因子白细胞介素(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-1β及抗炎因子IL-4和IL-10 mRNA表达水平,CBA法检测BV2细胞培养上清中IL-6,TNF-α,IL-4和IL-10浓度,免疫荧光法检测BV2细胞M1表型标志物CD16和M2表型标志物CD206表达,NeuN/TUNEL共染法和AnnexinⅤ/7-AAD法检测N2a细胞凋亡率。结果与细胞对照组相比,LPS组BV2细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞变圆且胞体变大;促炎因子IL-1β,IL-6和TNF-α及抗炎因子IL-10 mRNA水平显著升高(P<0.01),抗炎因子IL-4 mRNA水平下降(P<0.01);IL-6和TNF-α蛋白水平显著升高(P<0.01),IL-4蛋白水平无显著差异;CD16和CD206阳性细胞百分比明显升高(P<0.01),CD16阳性细胞升高更加明显;与BV2细胞或其MCM共培养的N2a细胞存活率显著降低且凋亡率显著升高(P<0.05,P<0.01)。与LPS组相比,LPS+rhNGF 50和500μg·L^(-1)组BV2细胞存活率显著提高(P<0.01);IL-1β,IL-6和TNF-αmRNA水平显著降低(P<0.05),IL-4和IL-10 mRNA水平显著提高(P<0.05,P<0.01);IL-6和TNF-α蛋白水平显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-4蛋白水平无显著差异,IL-10浓度低于检测限;CD206阳性细胞百分比显著升高(P<0.01),CD16阳性细胞百分比显著降低(P<0.05)。与LPS处理的BV2细胞或MCM-LPS组相比,与rhNGF 50和500μg·L^(-1)处理的BV2细胞共培养组及与MCM-rhNGF 50和500μg·L^(-1)共培养组N2a细胞存活率显著升高且凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论rhNGF可通过抑制BV2细胞炎症反应诱导BV2细胞向M2表型转化,抑制N2a细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。

胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体信号通路在乳鼠先天性巨结肠相关性小肠结肠炎中的作用实验研究

目的:探讨胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体(GDNF/GFRα1)通路在乳鼠先天性巨结肠(HD)相关性小肠结肠炎(HAEC)中的作用研究。方法:21日龄内皮素受体(Ednrb)基因敲除乳鼠为HD模型组(实验组),同日龄野生型乳鼠为对照组,8只/组。取结肠组织,按照形态将实验组乳鼠结肠组织分为狭窄段、扩张段,对照组乳鼠结肠组织分为远段、近段。采用苏木精-伊红(HE)染色法评判两组肠管炎症程度;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测两组结肠组织白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫印迹法(WB)分别检测GDNF/GFRα1信号通路相关基因[GDNF、GFRα1、酪氨酸酶受体(RET)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、TNF-α]蛋白水平。结果:HE染色结果显示HAEC主要发生在结肠扩张段;ELISA法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管IL-10水平显著降低、TNF-α水平显著升高(均P<0.05);WB法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管GDNF、GFRα1、RET蛋白水平显著降低,NF-κBp65、TNF-α蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:HD模型乳鼠结肠扩张段炎症程度较为严重,机制可能与GDNF/GFRα1信号通路受抑制,肠神经免疫调节系统异常有关。

中脑星形胶质细胞神经营养因子在利福平诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤中的作用

目的探究中脑星形胶质细胞神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)在利福平(rifampicin,RFP)诱导的胆汁淤积性肝损伤中的作用。方法借助肝细胞MANF特异性敲除(hepatocyte-specific MANF knockout,HKO)小鼠模型,观察MANF基因缺失对RFP诱导的小鼠胆汁酸转运体表达的影响。体外观察MANF敲减后对人肝癌细胞HepG2的核因子红细胞系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)的影响。结果与野生型(wild type,WT)小鼠相比,RFP处理的WT小鼠的胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)以及多药耐药相关蛋白4(multidrug resistance-associated protein 4,MRP4)的蛋白和基因表达水平增加。然而,与RFP处理的WT小鼠相比,HKO小鼠中BSEP、多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein 1,MDR1)、MRP2/3/4和有机溶质转运蛋白α(organic solute transporterα,OSTα)的蛋白和(或)基因表达水平明显降低。体外细胞MANF敲减会削弱RFP诱导的Nrf2的表达以及核内移。结论MANF可能通过调节Nrf2的表达调控BAT的适应性表达,在RFP诱导的肝损伤中发挥保护作用。

生长分化因子15与胶质源性神经营养因子样受体通路对小鼠动脉粥样硬化进展的影响

目的 探讨生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF-15)/胶质源性神经营养因子样受体(glial-derived neurotrophic factor receptor alpha-like, GFRAL)通路对载脂蛋白E^(-/-)小鼠动脉粥样硬化进展的影响及可能机制。方法 选择8周龄C57BL/6雄性载脂蛋白E^(-/-)小鼠8只,随机分为对照组和重组GDF-15组,每组4只。对照组:高脂饮食4周后,每周1次尾静脉注射磷酸盐缓冲液;重组GDF-15组:高脂饮食4周后,每周1次尾静脉注射重组GDF-15(0.05 mg/kg)。高脂饮食12周,监测小鼠体质量,处死小鼠。取4只同等周龄(20周龄)正常小鼠作为正常组,比较3组空腹血糖、血脂、皮质醇和醛固酮水平。主动脉冷冻切片油红O染色评估对照组和重组GDF-15组斑块大小。免疫组织化学检测对照组和重组GDF-15组脑组织GDF-15及GFRAL表达。结果 重组GDF-15组血清GDF-15水平较对照组明显升高,差异有统计学意义[(52.59±2.90)ng/ml vs(20.09±1.27)ng/ml,P<0.01]。重组GDF-15组11周和12周体质量较对照组明显减低[(28.60±0.22)g vs(29.47±0.25)g;(28.98±0.22)g vs(30.35±0.13)g,P<0.01]。重组GDF-15组三酰甘油水平较对照组明显降低[(0.22±0.02)mmol/L vs(0.38±0.09)mmol/L,P<0.05]。重组GDF-15组斑块面积明显小于对照组,差异有统计学意义[(22.22±2.58)%vs(31.61±3.51)%,P<0.01]。重组GDF-15组脑组织GDF-15和GFRAL表达较对照组明显增加(0.088±0.007 vs 0.030±0.006,0.031±0.003 vs 0.010±0.001,P<0.01)。对照组及重组GDF-15组皮质醇和醛固酮水平较正常组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。重组GDF-15组醛固酮水平较对照组明显降低,差异有统计学意义[(22.01±3.67)mg/ml vs(87.29±8.63)mg/ml,P<0.01]。结论 GDF-15可能通过GFRAL调控小鼠体质量、三酰甘油及醛固酮水平影响动脉粥样硬化进展。

APOE多态性在炎症因子诱导的神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用

目的:探讨载脂蛋白E(APOE)基因多态性在神经毒性反应性星形胶质细胞中的差异作用,为阿尔茨海默病(AD)发病机制的研究提供理论依据。方法:体外分离培养APOE基因敲除小鼠(APOE^(-/-))原代皮层星形胶质细胞,免疫荧光染色法鉴定细胞纯度。构建人APOE3和APOE4重组过表达质粒,分别转染至原代APOE^(-/-)星形胶质细胞中,以APOE^(-/-)原代细胞为对照,采用Western blotting法检测细胞中APOE和神经胶质酸性蛋白(GFAP)蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中APOE水平。采用白细胞介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子(TNF)和补体C1q联合刺激转染APOE3和转染APOE4的原代星形胶质细胞制备炎症模型,分为APOE3+PBS组、APOE4+PBS组、APOE3+IL-1α+TNF+CC1q组和APOE4+IL-1α+TNF+C1q组,采用细胞免疫荧光染色法观察各组细胞形态表现,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中磷脂酰肌醇蛋白聚糖4(Gpc4)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖6(Gpc6)、血小板反应蛋白1(Thbs1)、血小板反应蛋白2(Thbs2)、酸性分泌蛋白类似蛋白1(Sparcl1)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、C3和S100钙结合蛋白B(S100B)mRNA表达水平,微球吞噬实验检测各组细胞吞噬能力,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与APOE^(-/-)组比较,转染APOE3和APOE4组细胞中APOE和GFAP蛋白表达水平及细胞培养上清中APOE水平明显升高(P<0.01)。荧光显微镜下观察,分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组星形胶质细胞突起变短,胞体变大;与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组星形胶质细胞突起更短。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Gpc4、Gpc6、Thbs1、Thbs2和Sparcl1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Gpc4、Gpc6、Thbs1、Thbs2和Sparcl1 mRNA表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中GDNF mRNA表达水平明显降低(P<0.01),C3和S100B mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中GDNFmRNA表达水平明显降低(P<0.05),C3和S100B mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞吞噬微珠数量明显减少;与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞吞噬微珠数量明显减少。分别与APOE3+PBS组和APOE4+PBS组比较,APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组和APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与APOE3+IL-1α+TNF+Cq1组比较,APOE4+IL-1α+TNF+Cq1组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:APOE4基因型比APOE3诱导炎症因子能力更强,可诱导神经毒性反应性星形胶质细胞表型,增加神经毒性,影响星形胶质细胞凋亡,从而加剧神经元损伤。

靶肌肉注射胶质细胞源性神经营养因子对面神经损伤修复的作用

目的 通过靶肌肉注射胶质细胞源性神经营养因子(GDNF),观察其对面神经压榨损伤后大鼠功能恢复、神经形态学及GDNF在中枢面神经元中表达的影响,探讨经靶肌肉注射GDNF治疗周围性面瘫的可行性及作用机理。方法 SD大鼠随机分为假手术组(只暴露右侧面神经主干)、模型组(面神经主干压榨)、实验对照组(面神经主干压榨+颊肌注射生理盐水)和实验组(面神经主干压榨+颊肌注射GDNF),通过颊肌电生理、面瘫症状评分观察大鼠的神经功能恢复,Masson染色观察颊肌纤维形态学变化、甲苯胺蓝染色观察面神经形态学变化、Western Blot检测面神经元中GDNF的表达。结果 (1)大鼠面瘫症状评分:假手术组无面瘫表现,评分为0分,造模后各组大鼠均出现周围性面瘫表现,评分均为5分;术后第28天,实验组大鼠面瘫症状已基本完全恢复,模型组及实验对照组较前有不同程度改善但未完全恢复,评分均>3分;(2)颊肌电生理:各组造模后与假手术组相比,峰潜伏期有不同程度延长、最大振幅有不同程度下降;随时间的推移,实验组峰潜伏期较模型组及实验对照组明显缩短(P<0.05),最大振幅较其明显上升(P<0.05);(3)甲苯胺蓝染色:模型组、实验对照组、实验组术后均出现神经纤维形态不规则,外膜不连续不清晰,轴突数量减少。术后第28天,实验组面神经形态与假手术无明显差异,较模型组及实验对照组有明显恢复;(4)Masson染色:各组造模后肌纤维数量减少,肌肉组织占比面积减少;实验组肌纤维形态较模型组及实验对照组恢复快,至术后第28天,肌纤维形态接近正常(P<0.05);(5)Western Bolt检测:各组造模后中枢面神经元组织GDNF的蛋白表达下降,观察期内逐渐增强;与模型组及实验对照组相比,术后各时间点,实验组中枢面神经元组织GDNF的蛋白表达显著增强(P<0.01)。结论 靶肌肉注射GDNF可作为改善周围神经损伤的有效给药方式之一,促进神经纤维修复、靶肌肉功能的恢复及中枢神经系统对周围损伤神经的修复。

桥本甲状腺炎病儿血清肿瘤坏死因子受体相关因子6和神经生长因子受体水平与免疫水平及甲状腺功能的相关性

目的探究桥本甲状腺炎(HT)病儿血清肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和神经生长因子受体(NGFR)水平与免疫水平及甲状腺功能的相关性。方法选取2021年3月至2022年3月在承德市妇幼保健院就诊的HT病儿104例作为HT组,根据甲状腺功能分为HT亢进组30例,HT正常组38例,HT减退组36例。采用随机数字表法选取同期在儿科门诊体检健康的儿童95例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清辅助型T细胞1(Th1)因子中的白细胞介素2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、辅助型T细胞2(Th2)因子中的白细胞介素4(IL-4)以及TRAF6、NGFR水平;采用Pearson法分析血清TRAF6、NGFR表达以及二者与甲状腺功能指标、炎症因子的相关性。结果HT正常组、HT减退组和HT亢进组TRAF6的表达水平显著高于对照组[(25.12±3.36)µg/L、(28.16±3.48)µg/L、(22.65±3.27)µg/L比(19.25±2.42)µg/L],HT正常组和HT减退组表达水平显著高于HT亢进组,HT减退组显著高于HT正常组(P<0.05);HT正常组、HT减退组和HT亢进组NGFR的表达水平显著低于对照组[(27.36±3.48)µg/L、(25.02±3.42)µg/L、(29.74±3.56)µg/L比(32.04±3.71)µg/L],HT正常组和HT减退组表达水平显著低于HT亢进组,HT减退组显著低于HT正常组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,HT病人血清中TRAF6和NGFR表达水平呈负相关(P<0.05);与对照组相比,HT组血清中IL-2、IFN-γ、TPOAb、TGAb、游离三碘甲状原氨酸、血清三碘甲状原氨酸、甲状腺素、甲状腺球蛋白水平显著升高,IL-4、游离甲状腺素水平显著降低(P<0.05);Pearson法分析显示,TRAF6水平与IL-2、IFN-γ、TPOAb、TGAb、游离三碘甲状原氨酸、血清三碘甲状原氨酸、甲状腺素、甲状腺球蛋白水平呈正相关,与IL-4、游离甲状腺素水平呈负相关(P<0.05),NGFR水平与IL-4、游离甲状腺素水平呈正相关,与IL-2、IFN-γ、TPOAb、TGAb、游离三碘甲状原氨酸、血清三碘甲状原氨酸、甲状腺素、甲状腺球蛋白水平呈负相关(P<0.05)。结论HT病人血清TRAF6表达水平异常升高,NGFR水平异常降低,均与免疫水平及甲状腺功能相关。