胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体信号通路在乳鼠先天性巨结肠相关性小肠结肠炎中的作用实验研究

目的:探讨胶质细胞系源性神经营养因子/胶质细胞系源性神经营养因子受体(GDNF/GFRα1)通路在乳鼠先天性巨结肠(HD)相关性小肠结肠炎(HAEC)中的作用研究。方法:21日龄内皮素受体(Ednrb)基因敲除乳鼠为HD模型组(实验组),同日龄野生型乳鼠为对照组,8只/组。取结肠组织,按照形态将实验组乳鼠结肠组织分为狭窄段、扩张段,对照组乳鼠结肠组织分为远段、近段。采用苏木精-伊红(HE)染色法评判两组肠管炎症程度;酶联免疫吸附法(ELISA)法检测两组结肠组织白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫印迹法(WB)分别检测GDNF/GFRα1信号通路相关基因[GDNF、GFRα1、酪氨酸酶受体(RET)、核转录因子kappaBp65(NF-κBp65)、TNF-α]蛋白水平。结果:HE染色结果显示HAEC主要发生在结肠扩张段;ELISA法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管IL-10水平显著降低、TNF-α水平显著升高(均P<0.05);WB法结果显示,与实验组乳鼠狭窄段肠管比较,扩张段肠管GDNF、GFRα1、RET蛋白水平显著降低,NF-κBp65、TNF-α蛋白水平显著升高(均P<0.05)。结论:HD模型乳鼠结肠扩张段炎症程度较为严重,机制可能与GDNF/GFRα1信号通路受抑制,肠神经免疫调节系统异常有关。

神经营养因子受体同源物2通过上调proNGF、sortilin、p75NTR表达诱导脑出血后血肿周围脑组织细胞凋亡

目的探讨脑出血后不同时期血肿周围脑组织中神经营养因子受体同源物2(NRH2)、神经生长因子前体(pro NGF)、sortilin、神经营养因子受体p75(p75NTR)表达及与细胞凋亡的关系。方法收集临床脑出血后实施血肿清除术的周围组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为6h以内(包括6h)、6h以上至24h(包括24h)、24h以上至72h(包括72h)、72h以上4组,同时取10例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定脑细胞的凋亡指数(AI),采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测脑组织中NRH2、pro NGF、sortilin、p75NTR mRNA和蛋白表达,Western blot法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达。体外培养大鼠皮层星形胶质细胞,经NRH2 siRNA或scramble siRNA转染后,Western blot法检测pro NGF、sortilin、p75NTR蛋白表达。结果与对照组以及6h以内的脑出血组相比,脑出血后6h以上各组AI升高,以24h以上至72h内组为最高,但6h以内的脑出血组AI与对照组无区别。随着脑出血时间的延长,pro NGF、p75NTR mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,24h以上至72h达到高峰,72h后仍处于较高水平。与对照组和6h以内的脑出血组比较,脑出血后6h以上至24h内(包括24h),脑组织NRH2、sortilin的mRNA与蛋白表达水平及Bax表达水平即增加,24h以上至72h内达高峰,72h后仍维持在较高水平。但与对照组比较,6h以内的脑出血组上述指标无显著性差异。与对照组相比,6h以内的脑出血组Bcl-2表达水平无明显变化,脑出血后6h以上的脑出血各组脑组织Bcl-2表达水平降低,以24h以上至72h内处于最低值。NRH2 siRNA组pro NGF、sortilin、p75NTR蛋白表达水平明显低于空白对照组、scramble siRNA组。结论 NRH2在脑出血后血肿周围脑组织中表达增加,通过促进pro NGF、sortilin、p75NTR表达增加Bax/Bcl-2比率,从而诱导脑细胞凋亡。

视神经损伤时视网膜睫状神经营养因子受体的表达

目的研究睫状神经营养因子受体于视神经损伤后不同时间在视网膜中的表达情况,探讨外源性的睫状神经营养因子在神经损伤疾病中的应用价值。方法采用钳夹视神经的方法建立神经损伤的模型,在损伤后1、7、14、28d获取视网膜,提取总RNA及总蛋白,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定视网膜中睫状神经营养因子受体(CNTFR)αmRNA的表达,用WesternBlot方法了解损伤后不同时间CNTFRα蛋白水平的表达。结果在正常大鼠视网膜内CNTFRαmRNA无表达,在损伤后的1、7、14、28d均有一定水平的CNTFRαmRNA的表达,与正常对照比较差别具有显著性意义(P<0.01);损伤后备时间均有CNTFRα蛋白的表达,但CNTFRα蛋白的表达较弱。结论神经损伤后CNTF的表达先短暂升高以后持续下调,而CNTFRα-mRNA在损伤后4周内均有一定量的表达,提示补充外源性CNTF可能改善神经再生的微环境而发挥保护效应。

胶质细胞源性神经营养因子受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)受体基因GFRα1在小鼠精子再生过程中的表达和意义。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠精子再生动物模型。根据第二次给药后的不同时间随机分为 1、2、3、4、6、8、10周共 7组 (8只 /组 ) ,8只正常小鼠作对照组 ,分别于相应时点取材 ,进行光镜和电镜的研究。采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测不同时间GFRα1mRNA的表达变化 ;并采用原位杂交技术检测GFRα1mRNA表达定位。 结果 :2次给药后第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达明显增强 ,在第 2周达到高峰 ;在给药后第 3～ 4周明显下降 ,比正常表达水平明显减弱 ,并在第 4周达到低谷 ;随后几周内表达又逐渐增强 ,于第 10周恢复到正常水平。原位杂交显示 ,GFRα1主要表达于未分化的精原细胞。 结论 :在小鼠精子再生过程中 ,GFRα1的表达参与调节精原干细胞的去向调节 ,高表达时促进其进行自我更新 ,低表达时降低对GDNF的反应性 ,促进其分化 。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究

为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptoralpha1,GFRα1)并研究其生物学活性 ,从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GFRα1cDNA .将GFRα1cDNA克隆至含T7启动子的质粒 pET 2 8a (+)中 ,构建表达质粒 pET GFRα1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导 3～ 5h后 ,GFRα1蛋白表达 ,并形成包涵体 .凝胶自动扫描分析表明 ,GFRα1表达量占全菌总蛋白的 2 1 5 % ,用Ni2 + NTA树脂纯化和复性后 ,纯度达 90 %以上 。

神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性

目的:探讨神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性。方法:Western blot检测多种乳腺癌细胞系中p75NTR蛋白表达;基因重组构建p75NTR的正义及反义载体并检测转染p75NTR及p75NTR-si RNA后乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/ADR中p75NTR蛋白表达;CCK-8法检测MDA-MB-231/ADR对各种化疗药物的敏感性及转染p75NTR及p75NTR-si RNA后对耐药的影响。结果:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于亲本细胞;p75NTR过表达载体上调MDA-MB-231/ADR中p75NTR的表达;过表达p75NTR可增强MDA-MB-231/ADR对ADM、GEM和OXA的耐药性。结论:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于其亲本细胞,过表达p75NTR能够降低多药耐药细胞对化疗药物的敏感性而促进其多药耐药性。

阿尔茨海默病小鼠脑中p75神经营养因子受体和老年斑的表达

目的探讨阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)中p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)表达和老年斑形成的时相关系及变化情况。方法取3、6、9月龄雄性B6C3-Tg(APPSwePSEN1dE9)85Dbo/J转基因小鼠及同窝雄性野生型小鼠脑组织,采用刚果红、免疫组化和荧光染色方法观察脑片中老年斑和变性p75NTR阳性神经纤维的表达以及共定位情况,并分别通过ELISA、Western blot方法检测脑匀浆中总β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)和p75NTR蛋白水平。结果转基因小鼠3月龄时皮层、海马未见老年斑形成,6月龄时皮层和海马可见到少量老年斑形成,在9月龄时此处老年斑沉积明显增多。ELISA检测结果提示Aβ水平随小鼠月龄增加而增多。与同龄野生型小鼠相比,3月龄转基因小鼠皮层和海马可见p75NTR阳性神经纤维增多,且部分神经纤维末梢变性膨大;6月龄者皮层、海马p75NTR阳性神经纤维增多,出现部分呈不规则球形的变性神经末梢;9月龄者皮层、海马p75NTR变性神经末梢显著增多。野生型小鼠在各年龄段均未见变性的p75NTR阳性神经末梢。Western blot结果表明转基因和野生型小鼠脑内p75NTR水平均随着年龄增加而增加,且同月龄间相比前者高于后者(P<0.01)。共聚焦显微镜观察到p75NTR阳性的变性神经末梢位于老年斑中心部位,而不表达p75NTR的变性神经末梢位于老年斑外周。结论在转基因小鼠脑内Aβ能增加p75NTR的表达;p75NTR阳性神经纤维早于老年斑出现,且在老年斑形成后位置靠近老年斑中心,提示其促进了Aβ沉积的起始过程。

脑源性神经营养因子受体trkB基因扩增和真核表达载体的构建

目的构建大鼠脑源性神经营养因子受体trkB基因真核表达载体。方法根据trkB基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRⅠ及BamHⅠ酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法从大鼠脑组织总RNA中扩增编码trkB的基因片断,插入克隆载体pMD 18-T,构建pMD 18-trkB载体。经EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切出trkB基因片断,再克隆至载体pEGFP-C2中构建pEGFP-C2-trkB真核表达载体。结果trkB基因RT-PCR扩增产物大小约1 461 bp,真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,基因测序结果与已知序列基本吻合。结论成功扩增出完整trkB基因,构建了真核表达载体pEGFP-C2-trkB。

大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体mRNA的表达

目的探讨大鼠视神经损伤及修复过程中睫状神经营养因子受体(CNTFR)mRNA在视神经上的表达及意义。方法135只健康雄性斯普拉-道来(SD)大鼠,随机取45只作为正常对照组;另两组为视神经单纯切断组和视神经-坐骨神经吻合组,每组各45只大鼠。建立大鼠视神经单纯切断和视神经-坐骨神经吻合模型,分别于建立模型后3、7、14 d取视神经组织,应用半定量逆转录-聚合酶链反应方法观察正常大鼠及各模型大鼠视神经上CNTFR mRNA的表达情况。结果正常大鼠视神经内CNTFR mRNA有少量表达。视神经单纯切断组,与正常对照组比较,其表达增加,有显著性差异。视神经剪断后桥接坐骨神经组,表达增加更明显,有显著性差异。结论视神经损伤后,可通过提高内源性CNTFR来应答轴索损伤,促进轴突再生,为外源性睫状神经营养因子(CNTF)的应用提供理论依据。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1定点突变体制备及其稳定转染细胞株的构建及鉴定

目的 :制备胶质细胞源性神经营养因子受体 α1(GFRα1)的突变体质粒 ,并建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定 RCE细胞株。 方法 :通过 Fugene6脂质体转染试剂 ,将 PCR法快速制备的 pc DNA3- r GFRα1突变体质粒分别与带潮霉素 B抗性筛选标记的 pc DNA3.1- RET质粒共转染野生型 PC12细胞 ,建立 r GFRα1各突变体和 RET基因双转染的稳定PC12细胞株。经 Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入 PC12细胞中的各 r GFRα1突变体基因和 RET基因的表达进行鉴定。结果 :Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达。结论 :成功构建了 r GFRα1各突变体基因和 RET基因同时转入表达的稳定细胞株 ,为研究 r GFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)信号转导的作用奠定基础。

不同月龄大鼠脑室下区胶质细胞源性神经营养因子受体α_1的表达

目的:观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)受体α1(Glial cell line-derived growth factor recepterα1, GFR-α1)在1、3、8、12月龄大鼠脑室下区(SVZ)中的表达。方法:取不同月龄大鼠SVZ行冰冻切片,采用GFRα1多克隆抗体结合5′-BrdU单克隆抗体免疫组织化学单标与双标的方法染色。结果:在不同年龄大鼠SVZ可见GFR-α1、BrdU单标与双标细胞,但主要分布在SVZ前部的背外侧部分。随着年龄的增长,3种标记细胞的数量逐渐减少,且12月龄组的减少更明显。结论:GDNF可能通过GFR-α1参与调节哺乳动物脑内SVZ细胞的增殖和分化。随着年龄的增加,GFR-α1表达逐渐减少,SVZ细胞增殖、分化的能力亦减弱。

神经营养因子受体蛋白在视网膜组织中结构和功能的研究现状

神经营养因子受体蛋白广泛分布于视网膜层间组织,通过与多种神经营养因子结合在退行性眼底病变过程中具有重要的神经保护作用。本文着重介绍了三种高亲和力受体在视网膜中的定位、作用特点、与相关眼底疾病的关系和其新型激动剂。通过对神经营养因子受体的研究,了解其在眼底病变过程中的动态表达特点,以期能够应用于视网膜神经细胞变性及损伤性疾病的治疗中。

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子受体α1 (GFRα1 )基因在小鼠生精恢复过程中的表达变化及其与精原干细胞自增殖和分化的关系。方法 :间隔 2 4d 2次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型 ,第二次给药后随机分为 1 ,2 ,3,4 ,6 ,8,1 0周 7组 ,于相应时点及给药前取材 ,进行光镜和电镜研究 ,半定量逆转录聚合酶链反应和原位杂交检测。结果 :在生精恢复过程的第 1～ 2周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前增强 ,其差异分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 2周达高峰 ,为 (1 0 4 .72± 2 4 .4 0 ) % ;第 3～ 4周 ,GFRα1mRNA的表达较给药前减弱 ,其差异也分别有显著 (P <0 .0 5 )和非常显著 (P <0 .0 1 )意义 ,其中第 4周达低谷 ,为(2 0 .77± 4 .2 5 ) % ;之后逐渐上升 ,于第 1 0周恢复至正常水平。GFRα1mRNA主要由未分化精原细胞表达。结论 :GFRα1在小鼠生精恢复过程中以剂量相关性调控着胶质细胞源性神经营养因子信息传入 ,从而调控着精原干细胞的去向 :高剂量时诱导其增殖 。

神经营养因子受体p75在人食管鳞癌细胞中的表达研究

目的研究神经营养因子受体p75（p75^NTR）在人食管鳞癌细胞中的表达。方法应用免疫组织化学法检测100例人食管鳞癌样本中p75^NTR的表达情况，分析其与患者年龄、性别、肿瘤直径、淋巴转移、病理分化程度、3年存活率的关系。结果100例患者中p75^NTR阳性率为69．0％（69／100），在食管鳞癌组织中p75^NTR阳性和阴性表达患者年龄、性别、肿瘤直径、病理分化程度，差异有统计学意义[（61±7）岁比（56±8）岁，阳性表达率男性79．7％（47／59）比女性53．7％（22／45）、阴性表达男性占比38．7％（12／31）比女性占比61．3％（19／31），（4．6±1．1）cm比（3．2±1.4）cm，病理分化程度：高分化44．9％（31／69）比9．7％（3／31）、中分化50．7％（35／69）比71．0％（22／31）、低分化4．3％（3／69）比19．4％（6／31），P〈0．05]，淋巴转移差异无统计学意义（P〉0．05）。结论p75^NTR在食管鳞癌患者中表达程度不同，高表达患者病理分化差，3年存活率低；p75^NTR在食管鳞癌发病过程中可能起重要的作用，其表达对判断入食管鳞癌临床预后有指导作用。

复方麝香注射液对实验性大鼠视神经挤压伤后视网膜中睫状神经营养因子受体α表达的影响

目的:探讨复方麝香注射液对实验性大鼠视神经挤压伤后睫状神经营养因子受体(ciliary neurotrophicfactor receptor,CNTFRα)在视网膜的表达的影响。方法:72只健康SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组、药物治疗组3组,每组24只。模型对照组和药物治疗组大鼠均采用钳夹法建立视神经挤压伤实验模型,模型成功建立后即予药物治疗组大鼠复方麝香注射液腹腔注射,予正常对照组和模型对照组大鼠等容量的灭菌注射用水腹腔注射,分别于造模后第5、15、30天随机抽取各组8只大鼠处死摘取眼球行免疫组化检测视网膜中CNTFRα。结果:实验发现在正常视网膜中存在CNTFR少量表达;视神经损伤后5、15、30天CNTFRα表达均增高,伤后第5天最高,15天下降,但仍显著高于正常对照组(P<0.05),至30天下降至与正常对照组无显著差异(P>0.05);药物治疗组大鼠视神经损伤后5天CNTFR表达显著高于模型对照组(P<0.05),至伤后治疗15、30天CNTFRα表达极显著高于模型对照组(P<0.01)。结论:视神经损伤后视网膜中CNTFRα表达增加,可能是对视网膜神经节细胞轴突损伤后的自我保护性反应;复方麝香注射液能有效地促进视网膜中CNTFR较长时间高表达。

神经营养因子受体Trk和p75NTR的信号传递途径

神经营养因子是一类对特定类型的中枢和外周神经系统神经元的生存和发展至关重要的生长因子家族。

骨组织工程研究中P75神经营养因子受体的作用及应用价值

背景:P75神经营养因子受体属于低亲和力神经营养因子受体,它不仅在神经生长、发育和维持功能完整性等方面具有重要作用,而且与骨组织修复、增强干细胞特性等方面也密切相关。目的:对目前P75神经营养因子受体在骨组织修复及再生中的研究进展以及价值进行综述。方法:计算机检索中国生物医学文献数据库、CNKI数据库、PubMed数据库以及Elsevier数据库的相关文献,检索词为"骨修复,骨再生,P75,P75NTR,bone repair,bone regenerate,tooth development,facialnerve,stemcell"。查阅1987年9月至2018年4月期间收录的P75神经营养因子受体在骨组织再生修复方面的相关文章,最终纳入47篇文献进行结果分析。结果与结论:(1)研究报道P75神经营养因子受体能促进牙齿的发育和面神经的修复,促进骨组织的矿化和缩短骨愈合的时间,还能通过调节干细胞的特性来间接促进骨愈合;(2)也有研究者认为P75神经营养因子受体诱导的细胞凋亡可能会阻碍骨折的愈合,甚至导致骨折不愈合;(3)对于P75神经营养因子受体在骨组织修复方面所表现出双重作用的通路机制,未来还需要更深入的研究;(4)目前关于P75神经营养因子受体在骨组织修复的研究还仅仅局限于基础研究,临床应用的报道还很少。

p75神经营养因子受体在神经退行性疾病中的作用

近年来,研究发现神经营养因子受体p75NTR在包括阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)、帕金森病(Parkinson′s disease,PD)、亨廷顿病(Huntington′s disease,HD)、肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)、多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)等神经退行性疾病的发生发展中起到关键调控作用。该文综述近年来p75NTR通过引起神经元凋亡,轴突变性等造成认知和记忆功能障碍的研究进展,探讨p75NTR作为潜在治疗靶点在神经退行性疾病治疗中的应用前景。

大鼠脑出血后不同时期神经营养因子受体p75、神经生长因子前体、酪氨酸激酶A的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脑出血后血肿周围组织中神经营养因子受体p75(p75NTR)、神经生长因子前体(proNGF)、酪氨酸激酶A(TrkA)的表达及细胞凋亡率,进一步探讨其在脑出血后的细胞凋亡中所发挥的作用。方法制作大鼠脑出血模型,于术后6h、24h、72h、10d处死各组大鼠获取所需脑组织标本,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化SP法检测p75NTR、TrkA、proNGF的蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测p75NTR、TrkA的基因表达水平。结果脑出血后p75NTR、proNGF表达水平及p75NTR/TrkA值与对照组比较显著升高(P<0.01),且动态变化规律与脑细胞凋亡率相似;72h后TrkA的动态变化规律与细胞凋亡率相反。结论脑出血后proNGF与p75NTR的结合可能参与介导脑细胞凋亡,p75NTR/TrkA值增高时,proNGF及p75NTR以介导细胞凋亡为主;TrkA在脑出血后72h内神经营养作用被抑制,72h后可能发挥神经营养作用。