促神经再生因子复合剂N6对大鼠脊髓横断损伤保护作用的量效关系

目的:观察促神经再生因子复合剂N6对大鼠脊髓横断损伤后丙二醛(MDA)及caspase-3表达的影响,探讨其减轻继发性损伤及凋亡,保护受损脊髓作用的量效关系。方法:Wistar大鼠84只,随机分为4组。横断脊髓T10段15min后,对照组在脊髓缺损处给予生理盐水83μl/kg、实验组分别给予N6复合剂41.5,83,166μl/kg。损伤后1,4,24h各取材6只,采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定脊髓断端及血清中脂质过氧化(LPO)产物丙二醛(MDA)的含量。损伤后72h每组3只灌注取材,行免疫组化观察断端caspase-3的表达情况,HE染色观察断端病理学改变。结果:各实验组伤后1,4,24h脊髓断端及血清MDA含量明显低于对照组(P<0.01),伤后72h脊髓灰质前角caspase-3阳性细胞数与对照组比较明显减少(P<0.05),且N6复合剂能减轻脊髓损伤后炎性细胞浸润及组织水肿的程度,其疗效随剂量增加而增加。结论:N6复合剂可以减轻脊髓全横断损伤后脂质过氧化反应所造成的损伤,减少凋亡发生,从而减轻继发性损伤保护受损脊髓,且疗效随剂量增加而增加。

神经再生复合剂对大鼠急性脊髓损伤后其内MDA、SOD和MPO表达的影响

目的:观察促神经再生因子复合剂N6对大鼠急性脊髓损伤后脊髓及血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及脊髓内髓过氧化物酶(MPO)表达的影响,探讨其减轻继发性损伤的作用机制及保护受损脊髓作用的最佳介入时间。方法:用改良Allen’s打击法制备大鼠急性脊髓损伤模型,假手术组打开椎板不损伤脊髓,模型组造模后不予治疗,对照组分别于脊髓损伤后10、30和60 min向腹腔注射甲级强的松龙(30 mg/kg),实验组分别于脊髓损伤后10、30和60 min向蛛网膜下腔注射促神经再生因子复合剂N6(166μg/kg)。造模后24 h取材,于各时间点测得假手术组、模型组、实验组和对照组大鼠脊髓损伤组织及血清中MDA、SOD及损伤脊髓组织的MPO活性。结果:实验组损伤脊髓组织MDA含量随着药物介入时间的延迟而增高,各时间点间MDA含量无显著性差异(P>0.05);血清MDA含量随着药物介入时间的延迟而增高,60 min与10、30 min相比有显著性差异(P<0.05);实验组损伤脊髓组织SOD含量随着药物介入时间的延迟而降低,各时间点间SOD含量无显著性差异(P>0.05);血清SOD含量随着药物介入时间的延迟而降低,60 min与10 min相比有显著性差异(P<0.05);实验组损伤脊髓组织MPO含量随着药物介入时间的延迟而增高,60 min与10 min相比有显著性差异(P<0.05)。结论:促神经再生因子复合剂N6治疗可以提高急性脊髓损伤大鼠损伤脊髓及血清SOD含量,降低损伤脊髓及血清MDA、损伤脊髓MPO的含量,从而降低急性脊髓损伤后的继发性损伤,达到保护脊髓组织的目的,且介入治疗时间越早,疗效越好。

神经营养因子复合剂N6对脊髓损伤神经细胞凋亡的作用

[目的]研究神经营养因子复合剂(N6)对脊髓损伤后神经细胞凋亡的作用。[方法] Wistar大鼠(SPF级) 48只随机分为4组,每组12只。假手术组,只摘除椎板未损伤脊髓;单纯脊髓损伤组(损伤组),采用Allen法经NYU脊髓损伤撞击器制备急性脊髓损伤模型;脊髓损伤+生理盐水治疗组(INS组),制备急性脊髓损伤模型,并给予蛛网膜下腔注射生理盐水治疗;脊髓损伤+N6治疗组(IN6组),制备急性脊髓损伤模型,并给予蛛网膜下腔注射N6治疗。损伤后72 h取材,采用HE染色对脊髓组织进行标记;免疫组化方法检测Caspase 3蛋白的表达;半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定凋亡相关基因Caspase 3、Fas、Bax、Bcl2、P53 mRNA在脊髓组织中的表达变化。[结果]免疫组化结果显示:假手术组脊髓神经细胞很少有Caspase 3表达,假手术组较损伤组和INS组的Caspase 3阳性表达细胞数明显减少(P<0.01);与之类似,IN6组较损伤组和INS组Caspase-3阳性表达细胞数也明显减少(P<0.01)。RT-PCR检测到Caspase-3、Fas和P53 mRNA水平,IN6组较损伤组和INS组明显降低(P<0.05);而Bcl2/Bax值,IN6组较损伤组和INS组明显升高(P<0.05)。[结论]神经营养因子复合剂N6能明显抑制脊髓损伤后神经细胞的凋亡。