小鼠肾发育中胶质细胞系源性神经营养因子家族受体α1和受体酪氨酸激酶的表达

目的研究小鼠肾发育过程中胶质细胞系源性神经营养因子家族受体α1(GFRα1)和受体酪氨酸激酶(RET)的表达及意义。方法应用免疫荧光和蛋白印迹技术检测各胚龄小鼠肾组织中GFRα1和RET的时空定位表达及蛋白含量变化。结果在肾发育早期,GFRα1和RET在输尿管芽上皮细胞开始表达,生后肾组织内仅见GFRα1表达。随着肾小体的发育,GFRα1在肾小体发育早期即小泡体、逗号小体和S小体均有表达,而在肾小体发育后期即毛细血管袢期肾小体和未成熟期肾小体表达减弱,在成熟肾小体未见表达。RET在各期肾小体均未见表达。随着早期髓质的出现,GFRα1在近端小管、远端小管和集合管有明显表达;RET在集合管表达。在成熟肾脏,GFRα1定位表达于近端小管、远端小管和集合管;RET定位表达于集合管。GFRα1和RET在肾脏的蛋白表达量随胚龄的增加而增加,生后1 d达峰值,随后两者的蛋白表达量随日龄的增加而逐渐减少。结论在肾发育中,GFRα1参与肾小体发生、早期发育过程及肾小管和集合管的发生、发育过程,并维持其正常生理功能。RET参与集合管的发生、发育过程,并维持其正常生理功能。

围生期接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠海马神经营养因子家族表达的影响

目的了解妊娠中晚期和哺乳期接触磺胺二甲嘧啶对子代大鼠海马内神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法清洁级SD母鼠在受孕第7日起至哺乳期结束分别每日喂饲磺胺二甲嘧啶50、100和200mg/kg,取其30日龄仔鼠的大脑进行免疫组化染色,观察海马内NGF和BDNF的表达。结果大脑的免疫组化分析发现,50、100、200 mg/kg组子代大鼠海马CA1和CA3区NGF表达的积分光密度值显著低于对照组(P<0.05),200 mg/kg剂量组BDNF表达的积分光密度值显著低于对照组(P<0.05)。结论磺胺二甲嘧啶喂饲染毒围生期母鼠,可能通过降低大鼠体内的甲状腺素浓度使脑组织NGF、BDNF表达下调,进而影响大脑的正常发育及功能。

脑内胶质细胞源性神经营养因子及其受体复合物研究进展

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)在脑内广泛分布,通过其受体复合物介导激活细胞内信号转导通路,发挥维持神经元功能和损伤修复等作用。胶质细胞源性神经营养因子家族受体α(GD-NF family receptorα,GFRα)和RET是其受体复合物的主要成员。GDNF和其受体复合物可能参与多种脑部病变的病理生理过程,是潜在的治疗靶点之一。

胶质细胞源性神经营养因子及其受体与疼痛

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子β(transforminggrowth fartor-β,TGF-β)超家族成员,具有多种重要的生物学活性,不仅特异性地促进多巴胺能神经元的存活,还对外周神经系统及非神经系统具有广泛的作用。文中就近年来对GDNF及其受体在神经系统中的作用,特别是痛觉调制中作用的国内外研究进展作一综述。

神经生长因子NGF的神经元保护作用机制及临床应用研究现状

神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是神经营养因子家族中发现最早的一类生长因子,它对维持神经元的存活、生长、分化以及损伤后修复与再生有非常重要的作用.对近年来关于NGF的研究进展加以综述.

生长分化因子15与肥胖

生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)是转化生长因子β超家族的成员。动物实验发现,GDF15与其中枢受体结合,抑制摄食、增强代谢,降低体质量。此外,GDF15还参与肿瘤恶液质和铂类化疗药物对体质量的影响。GDF15及其受体可能成为治疗肥胖和消耗类疾病的新靶点。

GDF15及其受体GFRAL在肥胖治疗上的相关研究进展

肥胖症是一种由于营养物质过剩导致体内脂肪堆积而引起的代谢性疾病,与糖尿病、心脏病等一系列疾病相关。近年来肥胖症的发病率不断攀升,严重威胁人类健康。药物是治疗肥胖症的重要手段,目前治疗肥胖症的药物多为小分子化学药物,存在较严重的副反应,亟待开发更加安全有效的新型药物。生长与分化因子15(GDF15)属于TGF-β超家族,是一类具有抗炎和抗细胞凋亡效应的细胞因子,近年来被发现具有强大的改善能量代谢和控制体重的作用,从而成为潜在治疗肥胖症的新型药物。简要综述了GDF15及其特异性受体——胶质细胞源性神经营养因子家族受体α相似蛋白(GFRAL)在治疗肥胖症中的研究进展。

肺腺癌骨转移癌痛患者放疗前后细胞因子的分析研究

目的应用人细胞因子蛋白芯片技术研究肺腺癌骨转移癌痛患者放疗前后细胞因子的表达水平,筛选出变化显著的因子,探究细胞因子在体外放疗后缓解癌性骨痛的作用机制。方法收集32例肺腺癌骨转移癌痛患者放疗前后的外周血血清,收集同期20例健康者血清作为对照组,用人细胞因子蛋白芯片检测(共检测80种细胞因子),得到各因子的修正值和标准值,运用Volcano Plot和聚类分析热图分析差异显著的细胞因子。结果肺腺癌骨转移癌痛患者放疗前和对照组比较后,发现有11个因子显著上调,6个因子显著下调;肺腺癌骨转移患者放疗后与放疗前相比较有11个因子上调,4个因子下调。白介素6(IL-6)、神经胶质源神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞生长因子9(FGF9)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、骨保护素(OPG)这5个因子在这2个过程中都有显著变化。结论TNF-α、OPG、抑瘤素M(OSM)、神经营养素家族因子和放疗后升高的促炎因子在3组比较中都有显著变化,在引起癌性骨痛和放疗后缓解癌性骨痛过程中发挥一定作用。

牛生精母细胞/精原干细胞分子标记GFRα-1的验证

生精母细胞(gonocytes)是幼龄雄性曲细精索中的未分化生殖细胞,随睾丸发育逐渐向生精上皮基膜迁移并发育为精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)。生精母细胞和SSCs的分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要,而其特异分子标记验证又是分离培养的关键环节。胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)能促进生精母细胞和SSCs的增殖,用GDNF家族受体α-1(GDNF family receptor alpha-1,GFRα-1)标记生精母细胞和SSCs已在啮齿类等动物得到证实,但在牛等大家畜则仍需验证。为此,本研究将冻存的新生牛睾丸组织复苏,从转录和蛋白水平对GFRα-1的表达进行了验证。荧光定量PCR分析显示,犊牛生精上皮表达多能性基因Nanog和较高水平的GFRα-1 mRNA;免疫荧光染色显示,曲细精索中的大圆形细胞表现为GFRα-1阳性,其定位和分布与苏木精-伊红染色显示的生精母细胞一致;分离培养后,这些细胞表现为生精细胞典型的团簇状形态,仍为GFRα-1和Nanog阳性。结果表明,GFRα-1可作为牛生精母细胞和SSCs相对特异的分子标记,为后续相关研究奠定了基础。

小鼠生精上皮发育中支持细胞和精原干细胞的数量变化

睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)和精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)发生相应变化才能维持正常精子发生。因此,探讨生精上皮发育中两者的关系对深入了解精子发生有重要意义。基于前期基础,分别取青春期前(出生后5,10 d)、青春期(15,20 d)、近性成熟(25,30 d)及性成熟后(35,40,50,70 d)的昆明雄性小鼠,采用本室已建立的曲细精管漂浮免疫荧光染色全铺片法,测量了小鼠各阶段曲细精索/管的直径;以GATA4为SCs标记、胶质细胞源神经营养因子家族受体α-1(GFRα-1)为SSCs分子标记,显示生精上皮中的SCs和SSCs并分析其数量变化。结果显示,随日龄增加其曲细精索/管直径显著增大,特别是在性成熟前;5 d小鼠的GATA4+SCs数量最少,随后快速上升,15 d时达到最高且显著高于其他各阶段(P<0.05),之后呈波动下降趋势且趋于相对稳定;GFRα-1+SSCs数量也随日龄增大而增多,15 d时达到最高且显著高于其他各阶段(P<0.01),随后在20~30 d有所下降,35 d后急剧下降且处于相对稳定状态。提示小鼠SCs与SSCs数量之间基本呈正相关,SCs在维持SSCs的增殖、分化及正常精子发生方面有重要作用。本研究对探讨其他动物和人的精子发生机理有一定借鉴意义。

GDF15融合蛋白的制备及在非酒精性脂肪性肝炎中的应用

目的:制备一种GDF15融合蛋白并研究其对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的治疗作用。方法:通过基因工程的方法利用连接肽连接重组GDF15和纳米抗体(anti-HSA),构建VHH-GDF15融合蛋白的表达载体,并在CHO细胞中获得能够高效分泌表达的融合蛋白,在对表达产物进行纯化并使用SDS-PAGE以及HPLC方法鉴定后,采用ELISA实验、Gator仪器和荧光素酶报告基因实验的方法检测该融合蛋白的生物学活性。通过建立小鼠肝炎模型研究融合蛋白的体内活性,称量并且记录小鼠体质量以及肝脏质量,小鼠肝脏组织HE染色和SR染色观察肝脏脂肪变性程度以及肝脏纤维化程度,生化试剂盒检测小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平和肝脏TG水平。结果:GDF15蛋白N端在融合VHH片段形成融合蛋白后,保留了GDF15的二聚体结构,VHH-AP-GDF15融合蛋白相较于VHH-G_(4)S-GDF15融合蛋白具备更加高效的表达。此两种融合蛋白均可特异性结合GFRAL以及HSA并拥有较高的亲和力,可通过与受体GFRAL以及辅助蛋白RET结合从而激活细胞下游通路。体内实验结果表明,VHH-AP-GDF15融合蛋白能够显著降低NASH所导致ALT以及TG的升高,并可显著改善小鼠NASH的病理状况及其肝脏纤维化的程度。结论:GDF15融合蛋白保留了GDF15的生物学活性,并且可通过降低NASH小鼠血清ALT、TG和肝脏TG的水平减轻NASH小鼠肝脏损伤,具有较好的应用前景。