外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13在神经梅毒患者中的检测意义

目的分析外周血T淋巴细胞、白介素-4(IL-4)及趋化因子CXC配体13(CXCL13)水平检测在神经梅毒患者中的临床意义。方法选取2020年9月至2023年1月四川大学华西医院收治的188例梅毒患者作为研究对象,其中包括62例血清固定患者(血清固定组)及126例神经梅毒患者(神经梅毒组)(包括无症状型31例,早期58例,晚期37例)。另选取同时期于本院门诊和体检就诊的正常健康者(对照组)80名。比较不同人群、梅毒不同病情程度患者外周血T淋巴细胞、IL-4及化因子CXCL13水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13联合检测对早期神经梅毒识别的诊断价值。结果CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值:神经梅毒组<血清固定组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-4、CXCL13水平:神经梅毒组>血清固定组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)值:晚期组<早期组<无症状组,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-4、CXCL13水平:晚期组>早期组>无症状组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC分析显示,外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13联合检查灵敏度为89.68%,特异度为91.11%,AUC=0.862(95%CI:0.806-0.933),均高于三指标单一检查(P<0.05)。结论外周血T淋巴细胞、IL-4及趋化因子CXCL13水平变化与神经梅毒患者病情密切联系,三者联合检测度对神经梅毒的早期识别诊断具有更好的灵敏度、特异度,在神经梅毒病情进展评估及临床指导上具有更好的应用价值。

牦牛小脑不同区域神经营养素-4及其受体的表达特征与定位研究

神经营养素-4(NT-4)及其神经营养性酪氨酸激酶受体2(NTRK2)在小脑神经元存活、生长以及功能方面发挥着重要作用。为探讨NT-4和NTRK2在牦牛高原低氧适应中的作用,本研究以高原牦牛(Bos grunniens)和平原黄牛(Bos taurus)小脑为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹技术(WB)、苏木精-伊红染色(HE)和免疫组织化学(IHC)对NT-4和NTRK2在牦牛与黄牛小脑不同区域中的表达分布进行分析。qRT-PCR和WB结果表明,NT-4基因和蛋白在牦牛小脑半球皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05);NTRK2基因和蛋白在牦牛小脑蚓部皮质中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05)。与黄牛相比,牦牛NT-4蛋白在小脑各区域中的表达均显著高于黄牛(P<0.05);牦牛NTRK2蛋白在蚓部髓质和小脑半球髓质中的表达量低于黄牛或无差异,其余区域均显著高于黄牛(P<0.05)。IHC结果显示,NT-4和NTRK2蛋白阳性表达特征基本一致,皮质区主要分布于分子层的篮状细胞、浦肯野细胞层以及颗粒细胞层,而髓质区则散在分布于神经胶质细胞以及神经纤维中。由上述结果可知,NT-4和NTRK2在小脑各区域的表达差异可能与其参与脑组织生理功能以及适应高原低氧环境有关。在低氧环境下,NT-4和NTRK2通过上调激活相关通路以发挥内源性神经保护作用,进而保护脑组织免受低氧损伤。本研究结果可为探究牦牛脑组织低氧适应机制提供基础。

miR-124通过抑制TLR4/NF-κB/CCL2对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨微小RNA(miR)-124通过抑制Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB/CC类趋化因子配体(CCL)2对脑梗死(CI)大鼠神经元凋亡的影响。方法通过线栓闭塞大脑中动脉法建立CI大鼠模型60只,以随机数表法平均分为5组:模型组、miR-124激活剂(miR-124 agomir)组、TLR4过表达质粒组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组,另取12只大鼠只分离颈动脉,作为假手术组。分组干预后,评测大鼠神经功能缺损情况,比较各组神经功能缺损评分;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠CI情况,比较各组CI面积;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,比较各组海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组血清活性氧(ROS)及炎症因子环氧合酶(COX)-2、白细胞介素(IL)-17水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测各组脑组织miR-124表达;采用Western印迹实验检测各组脑组织凋亡及TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组分别比较,miR-124 agomir组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),而TLR4过表达质粒组脑组织miR-124与Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),神经功能缺损评分、CI面积、海马神经元凋亡率、血清ROS及炎症因子COX-2、IL-17水平、脑组织Bax、TLR4、核内NF-κB p65、CCL2蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。与模型组相比,miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组各指标水平无显著变化(P>0.05)。结论miR-124可通过下调TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达,抑制炎症,减轻脑组织梗死及海马神经元凋亡,修复CI大鼠神经功能。

创伤性脑损伤患者血清AQP4和NF-κB p65表达与神经功能缺损程度及预后的关系

目的探讨创伤性脑损伤(TBI)患者血清水通道蛋白4(AQP4)和核因子κB(NF-κB p65)表达与神经功能缺损程度及预后的关系。方法选取2021年3月至2023年3月于河南科技大学第一附属医院开元急诊科收治的128例TBI患者作为研究对象(观察组),根据美国国立卫生院神经缺损评估量表(NIHSS)将患者分为重度组31例、中度组45例和轻度组52例;根据格拉斯哥预后量表(GOS)评分将患者分为预后不良组37例和预后良好组91例。另选取同期于本院体检的128例健康志愿者作为对照组。比较各组受检者的一般资料及血清AQP4和NF-κB p65水平,采用Spearman法分析血清AQP4、NF-κB p65水平与NIHSS评分的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清AQP4、NF-κB p65对TBI患者预后不良的预测价值。结果观察组患者的血清AQP4、NF-κB p65水平分别为(27.37±6.34)μg/L、(2.27±0.24)ng/mL,明显高于对照组的(12.65±3.21)μg/L、(0.36±0.11)ng/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,TBI患者血清AQP4、NF-κB p65水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.605、0.612,P<0.05)。入院24 h血清AQP4、NF-κB p65水平比较,重度组>中度组>轻度组,48 h、72 h有同样的趋势,差异均具有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者的血清AQP4、NF-κB p65水平分别为(34.65±7.51)μg/L、(2.71±0.40)ng/mL,明显高于预后良好组的(24.41±6.48)μg/L、(2.09±0.22)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。血清AQP4、NF-κB p65两者联合预测TBI患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.938,高于各单一指标的0.873、0.830,联合预测的敏感度为91.89%,特异度为85.71%,两者联合优于血清AQP4、NF-κB p65各自单独预测(Z两者联合-AQP4=2.564、Z两者联合-NF-κB p65=2.555,P=0.010、0.011)。结论TBI患者血清AQP4、NF-κB p65水平上升与神经功能缺损程度和不良预后有关,可作为预测预后的潜在标志物。

P2X4受体对帕金森病大鼠脑黑质中脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨P2X4受体(P2X4R)对帕金森病(PD)大鼠脑黑质中脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法采用随机数字表法将120只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、6-羟基多巴胺(6-OHDA)组、P2X4组、P2X4-阴性对照(NC)组、P2X4+6-OHDA组、P2X4-NC+6-OHDA组,每组20只。对照组大鼠于左侧黑质注射2μL含体积分数0.02%抗坏血酸的生理盐水;6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL 6-OHDA构建PD模型;P2X4组大鼠于左侧黑质注射2μL携带过表达P2X4基因的慢病毒;P2X4-NC组大鼠于左侧黑质注射2μL空载阴性病毒;P2X4+6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL携带过表达P2X4基因的慢病毒,1周后注射2μL 6-OHDA;P2X4-NC+6-OHDA组大鼠于左侧黑质注射2μL空载阴性病毒,1周后注射2μL 6-OHDA。采用免疫荧光染色法检测各组大鼠左侧黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性多巴胺能神经元数量,Western blot法检测各组大鼠左侧黑质中P2X4R、BDNF蛋白表达。结果与对照组比较,6-OHDA组大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量和BDNF蛋白相对表达量显著降低,P2X4R蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与P2X4-NC组比较,P2X4-NC+6-OHDA组大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量及BDNF蛋白相对表达量显著降低,P2X4R蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。P2X4组大鼠左侧黑质中P2X4R蛋白相对表达量显著高于P2X4-NC组(P<0.05)。与P2X4组比较,P2X4+6-OHDA组大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量和BDNF蛋白相对表达量显著降低,P2X4R蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与6-OHDA组比较,P2X4+6-OHDA组大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量和BDNF蛋白相对表达量显著降低,P2X4R蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与P2X4-NC+6-OHDA组比较,P2X4+6-OHDA组大鼠左侧黑质中TH阳性多巴胺能神经元数量和BDNF蛋白相对表达量显著降低,P2X4R蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。结论PD大鼠过表达P2X4R可降低BDNF的表达水平,减弱BDNF的神经保护作用,加剧多巴胺能神经元的丢失,进而导致PD的进展。

雷公藤内酯醇通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻皮质神经元缺氧/复氧损伤

目的:研究雷公藤内酯醇(TPL)对皮质神经元缺氧/复氧(H/R)损伤的影响,并基于Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法:分离并体外培养SD大鼠乳鼠皮层神经元,通过缺氧4h复氧24h制备H/R损伤皮质神经元模型,设正常对照组、模型组、TPL(25mg/L)组、TPL(25mg/L)+TAK242(TLR4抑制剂,1mg/L)组和TPL(25mg/L)+LPS(TLR4激动剂,0.1mg/L)组。各组分别给药干预24h后,采用MTT法检测神经元活力,流式细胞术检测神经元凋亡,ELISA法检测培养液中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6]含量,Western blot法检测神经元TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白[TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)]表达。结果:与模型组比较,TPL组皮质神经元活力显著升高、凋亡率显著降低(P<0.05);培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05);TLR4表达量及p-NF-κB p65/NF-κB p65、Bax/bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3表达比值均显著降低(P<0.05)。TAK242可显著增强TPL对H/R损伤皮质神经元活力、凋亡、炎症因子含量、TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达的调控作用;而LPS则显著逆转TPL对H/R损伤皮质神经元各检测指标的调控作用。结论:TPL可以通过抑制TLR4/NF-κB通路活化减轻炎症反应和神经元凋亡,进而对皮质神经元H/R损伤起到保护作用。

枢经推拿对脊髓神经结扎大鼠模型炎症反应及SOCS1、TLR4蛋白表达的影响

目的本研究旨在探讨枢经推拿对神经病理性疼痛(NP)的抑炎镇痛机制。方法30只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、推拿组、假推拿组、假手术组,每组6只。除了正常组不进行处理,假手术组暴露L5神经外,其余3组大鼠采用脊神经结扎(SNL)法建立NP大鼠模型。造模后第1天开始,推拿组给予枢经推拿治疗,假推拿组给予抚摸,持续干预7 d,在造模前1 d及造模后1 d、3 d、7 d检测各组大鼠热痛缩足反应潜伏期(PWL)和机械性刺激缩足反应阈值(PWT)。干预7 d后,采用Western blot检测大鼠脊髓背角中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达水平,采用ELISA检测脊髓背角组织白细胞介素6(IL-6)水平。结果造模前1 d,各组大鼠的PWT、PWL没有显著差异(P>0.05);造模后1 d、3 d、7 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWT、PWL均降低(P<0.05),且造模后3 d和7 d,与模型组、假推拿组相比,推拿组大鼠的PWT、PWL均升高(P<0.05)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的SOCS1蛋白水平均明显升高(P<0.05);推拿组大鼠与模型组、假推拿组相比,SOCS1水平升高(P<0.05)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的脊髓背角TLR4、NF-κB、IL-6水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,推拿组大鼠的TLR4、NF-κB、IL-6水平明显降低(P<0.05)。结论枢经推拿可以改善由SNL诱导的NP,其机制可能与通过上调脊髓背角中SOCS1蛋白表达,负反馈下调TLR4及NF-κB蛋白表达,降低促炎因子IL-6产生有关。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

双路通脑方调节SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的影响

目的探讨双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡的作用以及对沉默信息调节因子2同源物1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)信号通路的调节机制。方法采用随机数字表法选取20只大鼠作为假手术组,剩余70只大鼠均利用大脑中动脉闭塞法制备缺血性脑卒中大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型对照组、双路通脑方组、双路通脑方+SIRT1抑制剂组(双路通脑方+EX527组),每组20只。14 d后,对大鼠进行神经功能损伤评分;TTC染色检测大鼠脑梗死面积;HE染色检测大鼠脑组织病理变化;尼氏染色检测大鼠脑组织神经元数量;试剂盒检测大鼠脑组织中铁离子(Fe^(2+))、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平;免疫组化检测大鼠脑组织中酰基-辅酶a合成酶长链家族成员4(ACSL4)、转铁蛋白受体(TFR)、铁蛋白重链多肽1(FTH1)蛋白的阳性表达;Western blotting法检测大鼠脑组织中SIRT1、Nrf2、GPx4及胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(SLC7A11)蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达升高(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均降低(P<0.05);与模型对照组比较,双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、Fe^(2+)和MDA含量、ACSL4、TFR蛋白表达降低(P<0.05),神经元数量、SOD和GSH含量、FTH1、SIRT1、Nrf2、GPx4及SLC7A11蛋白表达均升高(P<0.05);采用SIRT1抑制剂进行回补实验,结果显示SIRT1抑制剂逆转了双路通脑方对神经元铁死亡的抑制作用,同时也抑制了Nrf2和GPx4的表达(P<0.05)。结论双路通脑方可能通过激活SIRT1/Nrf2/GPx4信号通路来抑制缺血性脑卒中大鼠神经元铁死亡。

右美托咪定对癫痫大鼠海马神经元细胞凋亡与Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

目的:探讨右美托咪定对癫痫大鼠海马神经元细胞凋亡和Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:选择45只健康SD大鼠随机分为A组、B组和C组,各15只。适应饲养1周后给予C组大鼠腹腔注射20μg/kg右美托咪定,给予A组和B组大鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液,均连续腹腔注射7 d。随后B组和C组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射制作大鼠癫痫模型,A组大鼠不做处理。造模成功1周后进行Morris水迷宫测试。处死大鼠取脑组织,采用TUNEL技术检测海马组织神经元凋亡比例,采用酶联免疫吸附法检测海马组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)水平,采用Western blot技术检测海马组织中NF-κB、磷酸化NF-κB(pNF-κB)、离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、TLR-4相对表达水平。结果:C组各时间点逃避潜伏期显著长于A组,但显著短于B组(均P<0.05);C组大鼠平台穿越次数显著少于A组,多于B组(均P<0.05)。B组和C组大鼠海马组织TNF-α、IL-1β和IL-6水平均显著高于A组,C组大鼠各指标显著低于B组(均P<0.05)。C组大鼠海马神经元凋亡比例显著高于A组,但显著低于B组(均P<0.05)。C组大鼠海马组织pNF-κB、Iba-1和TLR-4蛋白相对表达水平显著高于A组,但显著低于B组(均P<0.05)。结论:右美托咪定不仅可以通过激活TLR-4/NF-κB信号通路抑制癫痫大鼠海马神经元的炎性反应,还可以通过激活TLR-4/NF-κB信号通路下调炎症因子进而抑制癫痫大鼠海马神经元细胞的凋亡,从而改善神经功能,发挥神经保护作用。

NTN4对肾透明细胞癌的临床应用价值

目的探讨神经导向因子4(NTN4)在肾透明细胞癌(ccRcc)中的临床应用价值。方法运用TCGA、UALCAN和HPA数据库,比较NTN4的信使RNA(mRNA)在癌旁组织及ccRcc组织中的表达水平,以及NTN4蛋白在正常肾脏组织和ccRcc组织中的表达水平,采用survminer包的surv_cutpoint()函数确定NTN4表达水平的最佳截断值,并以此为截点将患者分为NTN4高表达组与NTN4低表达组,并分析NTN4表达水平与ccRcc患者临床特征的关系及其对ccRcc患者预后的影响。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析NTN4对ccRcc的诊断价值。采用Kaplan-Meier生存曲线和Log-Rank检验分析NTN4高表达组和NTN4低表达组的生存情况。采用单因素和多因素Cox回归分析ccRcc预后的危险因素。比较ccRcc组织和正常肾脏组织的NTN4的启动子甲基化水平(Beta值),利用基因集富集分析(GSEA)探讨NTN4在ccRcc组织中的潜在机制并构建列线图预测模型,且采用Calibration校准曲线进行模型验证。结果从TCGA数据库中筛选出72例癌旁组织和533例ccRcc组织样本数据(其中72例样本为配对组织)。533例ccRcc组织中NTN4的mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);72例配对ccRcc组织中NTN4的mRNA表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。UALCAN数据库分析结果显示,ccRcc组织中NTN4蛋白表达水平低于正常肾脏组织,差异有统计学意义(P<0.05)。NTN4高表达组有384例患者,NTN4低表达组有149例患者。NTN4低表达组和NTN4高表达组ccRcc患者组织学分级、病理学分期、肿瘤大小及局部浸润范围(T分期)、远处转移情况(M分期)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,NTN4诊断ccRcc的曲线下面积为0.881(95%CI:0.847~0.916),最佳截断值为6.68,灵敏度为0.65,特异度为0.94。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,NTN4高表达组ccRcc患者的预后情况优于NTN4低表达组ccRcc患者(P<0.05)。单因素与多因素Cox回归分析结果显示,NTN4低表达、年龄>60岁、M分期为M1是ccRcc患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。与正常肾脏组织相比,ccRcc组织中NTN4的Beta值明显升高(P<0.05)。列线图模型的Calibration校准曲线分析结果显示,列线图模型的C-index为0.728。GSEA结果显示,NTN4相关基因主要富集在RNA剪接、胞吞作用、泛素介导的蛋白质降解、神经营养因子信号通路等相关途径。结论NTN4在ccRcc组织中表达水平下降,且有望作为预测ccRcc患者预后的生物标志物。

熊果酸抑制CXCL12/CXCR4途径减轻糖尿病周围神经病变大鼠的疼痛反应

目的 探究熊果酸是否能够通过抑制CXC趋化因子配体(CXCL)12/趋化因子CXC基序受体(CXCR)4途径减轻糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的疼痛反应。方法 大鼠随机分组:正常组、DPN组、熊果酸低、中、高剂量组、AMD3100组。除正常组外,其他各组采用高糖高脂饲料喂养联合1%链脲佐菌素(STZ)溶液腹腔注射方法构建DPN模型。DPN模型构建完成后进行药物处理,熊果酸低、中、高剂量组分别灌胃15、30、60 mg/kg熊果酸,DPN组和正常组灌胃等体积生理盐水,AMD3100组腹腔注射1 mg/kg AMD3100溶液。每日1次,持续12 w。观察大鼠一般情况;检测大鼠体质量和空腹血糖情况;检测大鼠足底机械痛阈值、热痛阈值;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠坐骨神经病理变化;Western印迹检测大鼠脊髓组织CXCL12和CXCR4蛋白表达情况。结果 药物处理12 w后,与正常组比较,DPN组体质量、机械痛阈值、热痛阈值明显降低,空腹血糖、CXCL12、CXCR4蛋白表达明显升高(P<0.05),坐骨神经排列稀疏混乱、无规则,髓鞘宽度增加、分布匀称度变差。与DPN组比较,熊果酸低、中、高剂量组、AMD3100组机械痛阈值、热痛阈值明显升高,CXCL12、CXCR4蛋白表达明显降低(P<0.05),坐骨神经排列稀疏和髓鞘凌乱等现象获得改善。结论 熊果酸可能通过抑制CXCL12/CXCR4途径减轻DPN大鼠的疼痛反应。

右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的:研究右美托咪定对大鼠坐骨神经阻滞及富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)/基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响。方法:取60只Wistar大鼠构建坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)模型,以随机数字表法分为5组:模型组、右美托咪定(3μg/kg)组、LRRC4 siRNA质粒组、空载质粒组、右美托咪定(3μg/kg)+LRRC4 siRNA质粒组;另选12只大鼠只暴露坐骨神经,不结扎,作为假手术组。大鼠以3μg/kg的右美托咪定和LRRC4 siRNA质粒分组经留置管鞘内给药干预后,检测大鼠疼痛症状,比较机械缩足阈值和热缩足潜伏期;检测大鼠坐骨神经阻滞持续时间,比较其运动和感觉阻滞持续时间;以试剂盒测定大鼠血清炎性因子前列腺素E_(2)(PGE_(2))、白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-6(IL-6)水平和脊髓组织氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平;以实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测大鼠脊髓组织LRRC4、SDF-1及CXCR4 mRNA表达水平;以免疫印迹法检测大鼠脊髓组织LRRC4/SDF-1/CXCR4信号通路蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组、右美托咪定+LRRC4 siRNA质粒组分别比较,右美托咪定组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、坐骨神经运动和感觉阻滞持续时间、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05);LRRC4 siRNA质粒组大鼠机械缩足阈值、热缩足潜伏期、脊髓组织SOD、GSH-Px、LRRC4 mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05),血清PGE_(2)、IL-18和IL-6水平、脊髓组织MDA水平、SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05);空载质粒组大鼠各指标水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:右美托咪定可通过上调LRRC4表达,抑制SDF-1/CXCR4信号激活,从而增强坐骨神经阻滞,抵抗炎症和氧化应激反应,明显减轻CCI大鼠疼痛症状。

miR-573调控神经导向因子4促进肺癌细胞上皮间质转化

目的:探讨miR-573通过调控神经导向因子4(NTN4)对肺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人肺癌组织和细胞系中miR-573和NTN4 mRNA水平。采用Lipofectamine 2000转染试剂对肺癌A549细胞进行转染并分组为Control组(不转染)、NC inhibitor组(转染NC inhibitor)、miR-573 inhibitor组(转染miR-573 inhibitor)、miR-573 inhibitor+si-NC组(转染miR-573 inhibitor和si-NC)和miR-573 inhibitor+si-NTN4组(转染miR-573 inhibitor和si-NTN4)。qRT-PCR检测miR-573表达水平;划痕法检测迁移能力;Transwell法检测侵袭、迁移能力;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测NTN4及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平;双荧光素酶实验验证miR-573和NTN4的靶向关系。结果:肺癌组织和细胞系中miR-573表达明显升高,NTN4 mRNA表达明显降低(P<0.05),选择miR-573表达最高的A549细胞进行转染实验。与Control组或NC inhibitor组相比,miR-573 inhibitor组A549细胞中miR-573相对表达量、N-cadherin和Vimentin蛋白水平明显下降,划痕愈合率明显降低,迁移、侵袭细胞数明显减少,E-cadherin蛋白水平显著上升(P<0.05)。miR-573负向调控NTN4表达(P<0.05)。转染si-NTN4可逆转miR-573 inhibitor对A549细胞迁移、侵袭、EMT的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-573靶向负调控NTN4表达,促进肺癌细胞的迁移、侵袭和EMT。

PDCD4沉默通过调控NLRP3/NLRP6炎症小体的平衡来减轻视网膜缺血再灌注损伤后的神经炎症反应

目的探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)通过含NOD样受体家族Pyrin域蛋白(NLRP)3/NLRP6信号通路活性对视网膜缺血再灌注(RIR)损伤后神经炎症反应的抑制作用及机制。方法选取50只SD大鼠作为研究对象,根据不同处理方式,分为Sham组(空白对照组)、RIR模型组、MCC950组(NLRP3/NLRP6抑制组)、si-PDCD4组(PDCD4沉默组)、si-PDCD4+MCC950组(PDCD4沉默+NLRP3/NLRP6抑制组),每组10只大鼠。除去空白对照组大鼠外,剩余大鼠均构建RIR损伤模型,并进行相应处理;Western-blot检测视网膜组织内PDCD4、NLRP3、NLRP6、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、抗坏血酸过氧化物酶(ASC)表达水平;苏木精-伊红(HE)染色分析视网膜组织病理变化;终端尿苷酸核苷酸末端标记法检测视网膜组织细胞凋亡能力;酶联免疫吸附试验检测大鼠眼球血、视网膜组织内炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-18、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;Western-blot检测视网膜组织内细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase-3表达水平。结果与Sham组比较,RIR模型组PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及细胞凋亡指数(AI)均升高,Bcl-2表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与RIR模型组比较,MCC950组、si-PDCD4组大鼠NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及AI均降低,Bcl-2表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与si-PDCD4组及MCC950组比较,si-PDCD4+MCC950组PDCD4、NLRP3、NLRP6、Caspase-1、ASC、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平及AI进一步降低,Bcl-2表达水平进一步升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PDCD4沉默具有减轻RIR病理损伤,抑制视网膜细胞凋亡的作用,其分子机制可能与抑制NLRP3/NLRP6炎症小体诱导神经炎症反应有关。

戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素和神经营养因子-4表达的变化及灵芝孢子粉的干预作用

目的:观察戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素(N-cadherin)和神经营养因子-4(NT-4)表达的变化及灵芝孢子粉的干预治疗作用,研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的作用机制。方法:健康雄性Wistar实验大鼠30只,随机分为正常对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉治疗组,每组10只。模型组和治疗组均用致痫亚惊厥剂量的戊四氮(PTZ)腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。在低温条件下迅速取脑,通过免疫组化和Westernblotting检测皮质和海马区N-cadherin和NT-4的变化。结果:实验性癫痫大鼠模型制作成功,灵芝孢子粉组和癫痫模型组实验动物均达到点燃标准,与癫痫模型组动物相比,灵芝孢子粉组大鼠潜伏期明显延长,但持续时间无显著差异。免疫组化和Western blotting检测实验结果表明:癫痫模型组实验大鼠脑海马和皮质N-cadherin含量比正常对照组增高(P<0.01);灵芝孢子粉组N-cadherins含量比癫痫模型组下降(P<0.01)。同时癫痫模型组大脑海马和皮质NT-4含量比正常对照组增加(P<0.05);灵芝孢子粉组NT-4含量比癫痫模型组增加(P<0.01)。结论:灵芝孢子粉能够降低N-cadherin的表达,调整病变神经元兴奋性,起到抗癫痫作用,还能增强NT-4的表达从而减轻癫痫发作对神经系统的损伤。

脊髓半横断损伤后腹角神经元神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子-3和神经营养因子-4表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓半横断损伤(htSCI)后脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3、NT-4)在脊髓腹角神经元表达的早期变化。方法:免疫组织化学ABC法分别染4种神经因子并作阳性细胞计数。结果:NGF主要分布于脊髓腹角神经元的胞核,BDNF、NT-4与NT-3主要分布于胞浆。htSCI前后它们在细胞内的分布范围没有变化。BDNF、NGF与NT-3的3 d在损伤尾侧段脊髓双侧腹角阳性神经元数与对照组相比显著减少。BDNF与NGF的14 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,NT-3与NT-4的14 d^21 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,BDNF7~21 d以及NGF14 d的健侧的阳性神经元数量均分别多于相应的伤侧。结论:内源性BDNF、NGF、NT-3、NT-4增加对脊髓损伤修复具有重要作用,BDNF和NGF在健侧表达的增加说明健侧代偿功能的活跃。

磁敏感加权成像联合血清脑源性神经营养因子、水通道蛋白-4检测对新生儿窒息早期脑损伤的诊断价值

目的对新生儿窒息脑损伤病人进行磁敏感加权成像(SWI)检查,并检测血清脑源性神经营养因子(BDNF)、水通道蛋白-4(AQP-4)水平,评估联合检查对新生儿窒息脑损伤的诊断价值。方法选取2017年5月至2019年5月在新乡医学院第一附属医院出生的新生儿窒息脑损伤病人(观察组)123例作为研究对象,同期出生的健康新生儿(对照组)125例作为对照。对两组新生儿进行SWI检查;采集两组新生儿清晨外周血提取血清,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中BDNF、AQP-4表达水平;采用四格表分析评估SWI检查对新生儿窒息脑损伤的诊断价值;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清BDNF、AQP-4表达水平对新生儿窒息脑损伤的诊断价值。结果观察组采用SWI检查的患病检出率(86.2%)、血清AQP-4水平(148.73±48.74)ng/mL高于对照组[(35.2%)、(98.56±30.93)ng/mL](P<0.05);血清BDNF水平(1.35±0.30)ng/mL明显低于对照组(1.79±0.54)ng/mL(P<0.05)。SWI检测新生儿窒息脑损伤的灵敏度为86.2%,特异性为64.8%,准确度为75.4%;BDNF灵敏度为86.2%,特异性为64.0%,准确度为75.0%;AQP-4灵敏度为75.6%,特异性为75.2%,准确度为75.4%。SWI联合血清BDNF、AQP-4水平检测新生儿窒息脑损伤的灵敏度为95.1%,特异性为89.6%,准确度为92.3%,误诊率为10.4%,漏诊率为4.9%,约登指数为84.7%,阳性预测值为90.0%,阴性预测值为94.9%;与单独检测相比,三者联合检测诊断新生儿窒息脑损伤的灵敏度、特异性和准确度均明显升高(P<0.05)。结论新生儿窒息脑损伤病人采用SWI检查的患病检出率高于健康对照组,血清AQP-4水平明显升高,血清BDNF水平明显降低,SWI检查、血清BDNF、AQP-4水平对新生儿窒息脑损伤均有一定诊断价值,三者联合检测对新生儿窒息脑损伤的诊断价值更高,可用于临床借鉴。

肿瘤抑郁症患者血清神经营养因子BDNF、NGF及NT4的表达

目的探讨肿瘤抑郁症患者血清中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)及神经营养因子-4(NT4)的表达情况。方法选取2016年1月至2017年12月来诊的肿瘤抑郁症患者36例,设健康对照组20例。抽取空腹静脉血,分离血清并应用免疫酶联吸附试验(ELISA)检测BDNF、NGF及NT4的表达水平。结果肿瘤抑郁症患者BDNF、NGF及NT4的表达水平均显著低于健康对照组,组间比较有显著性差异(P<0.05)。结论肿瘤抑郁症患者存在神经内分泌功能紊乱,神经营养因子水平显著下降,这为针对此类患者的心理治疗及抗抑郁药物的应用提供了理论依据。

神经营养素-4(NT-4)在昆虫杆状病毒表达系统中的克隆与表达

目的 通过昆虫杆状病毒表达系统的优势，表达出具有生物学活性的神经营养素-4（ hNT-4）蛋白。方法 通过 PCR方法获得 hNT-4成熟肽的基因，将其连接到昆虫表达载体 pAcGP67B上，在昆虫细胞 Sf9中进行表达。对表达产物进行免疫原性和生物学活性测定。结果 获得 hNT-4蛋白的表达产物， SDS-PAGE电泳显示表达产物相对分子质量为 15 000。 经 Western-blot验证，表达上清及细胞全蛋白均有一条能与抗人 NT-4抗体发生特异性免疫反应的条带。经 PC12细胞测定，表达上清中的 rNT-4蛋白具有明确的生物学活性。结论 hNT-4在昆虫杆状病毒表达系统中的表达为今后进一步深入研究 hNT-4的功能及其在临床中的应用提供了条件。