电针对脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力及海马组织脑源性神经营养因子和神经营养素受体p75表达的影响

目的探讨电针治疗脑卒中后认知障碍的可能机制。方法 45只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)和电针组(n=15)。模型组、电针组用线栓法制备左侧局灶性脑缺血1.5 h再灌注模型。电针组电针神庭、百会穴7 d。采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;Longa评分法观察大鼠神经功能缺损情况;HE染色观察大鼠海马神经元形态结构变化;免疫印迹法检测大鼠缺血侧海马组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养素受体p75(p75NTR)蛋白表达。结果与模型组相比,电针组逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数显著增加(P<0.001);神经功能缺损评分明显减少(P<0.01);缺血侧海马区细胞损伤较轻,BDNF表达明显升高(P<0.01),p75NTR蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论电针能够改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调大鼠海马组织中BDNF蛋白和下调p75NTR蛋白表达水平有关。

心肌梗死患者血清神经营养素受体P75水平与其预后的相关性

目的:探讨心肌梗死后血清中神经营养素受体P75(P75NTR)水平对预后的判断价值。方法:选取110例心肌梗死后发生慢性心力衰竭患者为观察组,另选取同期住院110例心肌梗死无慢性心力衰竭患者为对照组。采用ELISA法检测2组患者血清中P75NTR水平,采用超声心动图检测2组患者心功能相关指标,相关性分析采用Pearson分析法。结果:观察组患者血清P75NTR水平明显高于对照组[(12. 76±2. 57) ng/mL vs (9. 68±2. 23) ng/mL,P <0. 05];左心室射血分数(LVEF)低于对照组[(41. 86±5. 23)%vs (48. 73±7. 24)%,P <0. 05];左心室舒张末期内径(LVEDD)明显高于对照组[(61. 96±6. 93) mm vs 58. 03±4. 85) mm,P <0. 05]。2组在心肌梗死后LVEF下降性(LVEF≤40%)和保留性(LVEF> 40%)慢性心力竭衰患者血清P75NTR水平及左心室短轴缩短率(FS)、LVEDD、左心房内径(LAD)比较差异均有统计学意义(均P <0. 05)。观察组患者血清中P75NTR水平与LVEF、左心室FS呈负相关(P <0. 05),与LVEDD、LAD呈正相关(P <0. 05),而对照组患者血清中P75NTR水平与其心功能指标无明显相关性(P> 0. 05)。结论:心肌梗死预后不良患者血清中P75NTR水平升高,其与患者心功能存在相关性,对临床评估该类患者的病情具有重要作用。

低亲和性神经营养素受体p75在人胚胎视网膜中的表达

p75神经营养素受体在视网膜的发育以及再生过程中发挥着重要的作用 ,而在人类视网膜中的分布状况尚未被研究 .利用免疫组织化学方法 ,在光镜水平下确定了 p75在人胚胎发育 5、 6和 7个月的视网膜中的分布情况 .在视网膜神经节细胞层出现最强的p75免疫阳性反应 ,在其他各层也有较弱的免疫阳性反应 .在胚胎 6、 7月的视网膜中 ,主要由M櫣ｌｌｅｒ细胞的终足构成的内界膜上出现了比较强的 p75表达 .p75在人胚胎视网膜中的分布情况与大鼠视网膜中很类似 ,主要表达在M櫣ｌｌｅｒ细胞 ,在神经节细胞上也可能有表达 .

督脉电针对不同时间段脊髓损伤大鼠运动功能及p75神经营养素受体表达的影响

目的观察督脉电针对脊髓损伤大鼠不同时间段运动功能及p75神经营养素受体(p75^(NTR))表达的影响。方法雄性清洁级Sprague-Dawley大鼠180只,随机分为术后1 d、3 d、7 d组,每个时间段组再随机分为空白组、空白电针组、假手术组、模型组和督脉电针组,每组12只。采用改良Allen打击法复制脊髓损伤模型。空白电针组、督脉电针组选取大椎、命门进行电针干预。采用BBB评分法评估大鼠后肢运动神经功能的变化;采用Western blotting法检测p75^(NTR)的表达情况。结果 BBB评分结果显示,模型组、督脉电针组评分均低于其他三组;术后7 d,督脉电针组评分显著高于模型组(t=-4.510,P<0.001)。督脉电针组各时间点p75^(NTR)表达明显低于模型组(P<0.01)。结论脊髓损伤后受损脊髓组织中p75^(NTR)蛋白表达升高;督脉电针可以提高脊髓损伤大鼠的运动功能,下调受损脊髓组织中p75^(NTR)的表达。

“三通针法”对脊髓损伤大鼠p75神经营养素受体表达的影响

目的探讨"三通针法"治疗对大鼠脊髓损伤后p75神经营养素受体(p75NTR)m RNA及蛋白表达的影响。方法 72只Sprague-Dawley雌性大鼠随机分成假手术组(A,n=8)和造模组(n=64)。造模组大鼠采用改良Allen重物打击法制作脊髓损伤大鼠模型,造模成功后存活48只大鼠,随机分为模型组(B,n=12)、电针组(C,n=12)、阻断剂NEP1-40组(D,n=12)、电针+阻断剂NEP1-40组(E,n=12)。电针治疗取大椎、腰阳关及双侧次髎、足三里,选择疏密波,持续时间20 min,每天1次。分别于治疗后7 d、14 d提取损伤处脊髓组织,采用实时荧光定量PCR、原位杂交、Western blotting方法分别检测p75NTR m RNA及蛋白的表达,采用BBB评分评估大鼠后肢活动功能。结果 BBB评分显示,治疗后各组评分均较B组提高,且E组BBB评分分别高于C组和D组(P<0.05),各组14 d评分均高于7 d(t>2.623,P<0.05)。脊髓损伤后,各治疗组与B组比较,脊髓组织中p75NTR m RNA及蛋白的表达均降低(P<0.05);C组、D组和E组之间无显著性差异(P>0.05)。结论 "三通针法"电针能改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能,抑制脊髓损伤后p75NTR的表达活动,这可能是电针治疗脊髓损伤的机制之一。

2，5-己二酮对大鼠坐骨神经雪旺细胞神经生长因子及其p75神经营养素受体表达的影响

目的研究正己烷代谢产物2,5-己二酮(2,5-HD)对雪旺细胞神经生长因子(NGF)及其p75神经营养素受体(p75NTR)表达水平的影响。方法取新生Wistar大鼠坐骨神经进行雪旺细胞原代培养,采用差速贴壁法和Thy-1.1抗体进行细胞纯化。采用免疫荧光法观察2,5-HD不同染毒浓度和染毒时间雪旺细胞NGF及其p75NTR表达水平的变化,图像分析软件Image-Pro Plus进行定量分析。结果2,5-HD 5～40 mmol·L^(-1)染毒24 h可以促进雪旺细胞NGF及其p75NTR的表达,呈浓度-效应关系;2,5-HD 10.0 mmol·L^(-1)染毒1～48 h,NGF及其p75NTR表达水平呈先增高后降低的趋势。结论2,5-HD可以促进雪旺细胞NGF及其p75NTR的表达,这可能是机体的一种自我保护机制,为使用NGF治疗正己烷中毒性周围神经病提供了依据。

p75神经营养素受体在小鼠坐骨神经挤压伤后的表达变化特点

目的探讨小鼠在坐骨神经挤压伤后不同时间点神经损伤部位p^(75NTR)表达变化特点。方法选取野生型C57BL/6雄性小鼠42只,随机分为假手术组和模型组,各21只。模型组使用FST显微无齿血管钳钳夹坐骨神经,制作坐骨神经挤压伤模型,假手术组仅暴露坐骨神经,无坐骨神经钳夹。在成模前、成模后0、3、7、14、21、28d等时间点取坐骨神经损伤区组织标本,使用RTqPCR和Westernblot方法检测p^(75NTR) mRNA和蛋白表达量。结果模型组在成模第3天p^(75NTR) mRNA表达水平升高,第7天至峰值,第21天降至成模前水平,在成模第3、7、14天p^(75NTR) mRNA表达高于假手术组(P<0.01)。模型组在成模第3天p^(75NTR)蛋白表达水平明显升高,第14天至峰值,第28天降至成模前水平,在成模第3、7、14、21天p^(75NTR)蛋白表达高于假手术组(P<0.01)。假手术组在各时间点p^(75NTR) mRNA和蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。结论在小鼠坐骨神经挤压伤后p^(75NTR) mRNA和蛋白表达上调,其表达量与坐骨神经挤压伤后时间有关。

p75神经营养素受体在新生和成年大鼠背根神经节中的不同表达

目的 :研究神经生长因子低亲和力受体 p75 NTR在新生和成年大鼠背根神经节中的表达 ,以探讨p75 NTR在背根神经节神经元中的作用。方法 :取新生和 3月龄大鼠背根神经节 ,免疫组化 ABC法观察 p75 NTR在神经元中的分布和表达。结果 :新生大鼠背根神经节中可见较多的 p75 NTR阳性反应神经元 ,免疫反应产物主要位于胞浆。成年大鼠背根神经节大多数神经元有 p75 NTR阳性免疫反应产物 ,主要位于细胞核。结论 :p75 NTR在新生和成年大鼠背根神经节神经元中表现为不同表达方式 。

p75神经营养素受体在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞侵袭的影响

目的探讨p75神经营养素受体(NTR)在胃癌组织中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭的影响。方法收集80例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织标本及相应的癌旁正常组织标本。体外分离并培养胃癌细胞株,并将其分为p75NTR转染组和阴性对照(NC)组。采用免疫组织化学染色法检测p75NTR在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析p75NTR的阳性表达情况与胃癌患者临床特征的关系。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测胃癌细胞中p75NTR mRNA和p75NTR蛋白的表达水平,采用Transwell小室检测胃癌细胞的侵袭能力,采用细胞黏附实验检测胃癌细胞的黏附能力。结果 p75NTR在胃癌组织中的阳性表达率为26.25%(21/80),明显低于癌旁正常组织的73.75%(59/80),差异有统计学意义(P﹤0.01)。肿瘤直径﹤5 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移胃癌患者胃癌组织中的p75NTR阳性表达率均高于肿瘤直径≥5 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的胃癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同年龄、性别、分化程度胃癌患者胃癌组织中的p75NTR阳性表达情况比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。转染p75NTR后,NC组胃癌细胞中p75NTR mRNA和蛋白的相对表达量均低于p75NTR转染组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。p75NTR转染组胃癌细胞的黏附率、侵袭率均低于NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论p75NTR在胃癌组织中呈低表达,且与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移有关;上调p75NTR表达能够抑制胃癌细胞的侵袭能力和黏附能力,对于胃癌靶向治疗的研究具有一定的参考价值。

慢性脑低灌注性血管性认知损害患者血清p75神经营养素受体细胞外段水平及其与炎性因子的关系

目的检测慢性脑低灌注性血管性认知损害(CCH-VCI)患者血清p75神经营养素受体细胞外段(p75NTR-ECD)水平,并探讨其与肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的关系。方法选择海军军医大学(第二军医大学)长海医院2018年8月至12月收治的34例CCH-VCI患者,以及同期相同年龄段的36名中老年健康人和34例缺血性脑卒中患者作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验测定3组研究对象的血清p75NTR-ECD、TNF-α、IL-1β、IL-6水平并进行组间比较。采用Spearman相关分析研究CCH-VCI患者血清p75NTR-ECD水平与TNF-α、IL-1β、IL-6水平的相关性。结果CCH-VCI组血清p75NTR-ECD水平高于健康对照组和缺血性脑卒中组[(544.36(440.88,628.50)pg/mL vs 276.49(262.59,313.87)pg/mL、366.87(337.09,450.43)pg/mL],差异均有统计学意义(U=87.500、335.500,P均<0.05)。CCH-VCI组患者血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平分别为196.02(141.20,280.35)pg/mL、68.23(60.79,91.94)pg/mL、51.04(40.24,65.26)pg/mL,缺血性脑卒中组分别为218.67(143.76,281.28)pg/mL、76.87(59.10,99.91)pg/mL、64.45(43.13,86.76)pg/mL,均分别高于健康对照组[分别为73.71(56.94,79.81)pg/mL、42.98(34.52,51.34)pg/mL、14.97(11.76,21.19)pg/mL],差异均有统计学意义(U=31.000、4.000,106.000、132.000,48.000、13.000;P均<0.05)。CCH-VCI患者血清p75NTR-ECD水平与TNF-α水平存在相关性(r=0.391,P=0.022),但与IL-1β和IL-6水平均无明显相关性(r=0.032、0.164,P=0.855、0.355)。结论慢性脑低灌注损伤后p75NTR可能与TNF-α等炎性因子有关,并共同参与了CCH-VCI的发病。

基于p75神经营养素受体提出PND治疗的新思路

围术期神经认知功能障碍(PND)被推荐用以定义围术期认知功能下降,包括术后谵妄(POD)和术后认知功能障碍(POCD)[1,2]。PND主要表现为对多个认知领域产生影响,如注意力、记忆、执行能力及信息处理速度等[3],主要特点是患者在麻醉和手术之后认知功能的长时间下降和衰退[4],严重降低了患者生活质量,延长术后住院时程,且具有较高的死亡率[5]。尽管PND受到越来越多的关注和重视,但其确切的病理机制尚不清楚。

神经营养因子受体同源物2通过上调proNGF、sortilin、p75NTR表达诱导脑出血后血肿周围脑组织细胞凋亡

目的探讨脑出血后不同时期血肿周围脑组织中神经营养因子受体同源物2(NRH2)、神经生长因子前体(pro NGF)、sortilin、神经营养因子受体p75(p75NTR)表达及与细胞凋亡的关系。方法收集临床脑出血后实施血肿清除术的周围组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为6h以内(包括6h)、6h以上至24h(包括24h)、24h以上至72h(包括72h)、72h以上4组,同时取10例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定脑细胞的凋亡指数(AI),采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测脑组织中NRH2、pro NGF、sortilin、p75NTR mRNA和蛋白表达,Western blot法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达。体外培养大鼠皮层星形胶质细胞,经NRH2 siRNA或scramble siRNA转染后,Western blot法检测pro NGF、sortilin、p75NTR蛋白表达。结果与对照组以及6h以内的脑出血组相比,脑出血后6h以上各组AI升高,以24h以上至72h内组为最高,但6h以内的脑出血组AI与对照组无区别。随着脑出血时间的延长,pro NGF、p75NTR mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,24h以上至72h达到高峰,72h后仍处于较高水平。与对照组和6h以内的脑出血组比较,脑出血后6h以上至24h内(包括24h),脑组织NRH2、sortilin的mRNA与蛋白表达水平及Bax表达水平即增加,24h以上至72h内达高峰,72h后仍维持在较高水平。但与对照组比较,6h以内的脑出血组上述指标无显著性差异。与对照组相比,6h以内的脑出血组Bcl-2表达水平无明显变化,脑出血后6h以上的脑出血各组脑组织Bcl-2表达水平降低,以24h以上至72h内处于最低值。NRH2 siRNA组pro NGF、sortilin、p75NTR蛋白表达水平明显低于空白对照组、scramble siRNA组。结论 NRH2在脑出血后血肿周围脑组织中表达增加,通过促进pro NGF、sortilin、p75NTR表达增加Bax/Bcl-2比率,从而诱导脑细胞凋亡。

p75神经营养蛋白受体基因敲除对小鼠面神经损伤后神经再生的影响

目的探讨p75神经营养蛋白受体(p75NTR)在面神经损伤后神经再生中的作用。方法对p75NTR基因敲除小鼠和野生型129sv小鼠的一侧面神经总干在神经出颅2mm处进行损伤,损伤后第2天,一部分小鼠在神经干损伤的近中侧注射霍乱毒素B(CTB)进行顺行示踪标记,损伤后3、7d,应用免疫组织化学方法对神经纤维再生轴突进行长度测定及记数分析。另一部分小鼠在面神经总干损伤后第4天切断神经,将切断的面神经断端置入含有FastBlue的聚氯乙烯单端小管中进行逆行示踪标记,荧光显微镜下对面神经核运动神经元进行计数分析。结果p75NTR基因敲除小鼠与野生型129sv小鼠相比较,再生的神经纤维轴突长度明显不足,二者间面神经核再生运动神经元数量差异有统计学意义(P<0.05)。再生轴突的免疫组织化学染色表明,p75NTR基因敲除小鼠再生的神经纤维轴突数量也明显降低(P<0.01)。结论p75NTR基因可以增强面神经的再生。

马尾受压后腰骶部脊髓中P75神经营养因子受体的表达及其与神经元凋亡的关系

目的:观察大鼠马尾受压后腰骶部脊髓中P75神经营养因子受体(P75 neurotrophic receptor,P75NTR)的表达,探讨P75NTR与前角神经元凋亡的关系。方法:48只雌性成年SD大鼠,随机分为正常组(n=6)、对照组(n=6)和实验组(n=36),正常组不作任何处理,对照组行假手术,实验组在L4平面置入半圆柱体硅胶棒,占椎管截面积约75%～80%,造成马尾急性受压。实验组分别于造模后1d、3d、5d、7d、14d、28d时取L4压迫节段近端脊髓组织(L2水平脊髓),正常组和对照组在第7天时处死取相应部位脊髓组织,切片后进行P75NTR免疫组织化学染色,观察P75NTR的表达;末端转移酶标记技术(TUNEL法)检测脊髓前角运动神经元凋亡情况。用SPSS13.0统计软件进行组间t检验和相关性分析。结果:正常组和对照组脊髓前角有少量P75NTR表达;实验组造模后1d脊髓前角即有P75NTR表达,7d达到峰值,14d、28d表达呈减少趋势,实验组除1d时外其余各时间点与正常组和对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。正常组和对照组脊髓组织中可见少量神经元凋亡,实验组造模后1d脊髓前角神经元凋亡数量明显增多,7d达到峰值,14d、28d凋亡呈减少趋势,实验组各个时间点与正常组和对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。神经元凋亡率与P75NTR表达存在平行变化关系。结论:马尾受压后脊髓前角运动神经元表达P75NTR,其表达量与神经元凋亡率呈正相关。

p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究

目的对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体(p75NTR)阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的p75NTR阳性细胞进行单克隆培养、四甲基偶氮唑盐比色法及划痕实验检测,以未分选细胞为对照,分析p75NTR阳性细胞的生物学特性。结果舌鳞状细胞癌细胞株Tca-8113、Cal-27中,p75NTR阳性细胞的比例分别为3.1%和1.9%。与未分选的细胞相比,p75NTR阳性细胞的单克隆形成能力更高(Tca-8113细胞,P=0.024;Cal-27细胞,P=0.009);单克隆p75NTR阳性细胞再培养2周后,p75NTR阳性细胞率分别降为14.5%(Tca-8113)和5.8%(Cal-27);p75NTR阳性细胞体外增殖能力显著增强,且具有明显的侵袭迁移能力。结论 p75NTR阳性舌鳞状细胞癌细胞具有肿瘤干细胞的特性。

神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性

目的:探讨神经营养因子受体p75NTR在乳腺癌耐药细胞中的表达及其与多药耐药的相关性。方法:Western blot检测多种乳腺癌细胞系中p75NTR蛋白表达;基因重组构建p75NTR的正义及反义载体并检测转染p75NTR及p75NTR-si RNA后乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/ADR中p75NTR蛋白表达;CCK-8法检测MDA-MB-231/ADR对各种化疗药物的敏感性及转染p75NTR及p75NTR-si RNA后对耐药的影响。结果:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于亲本细胞;p75NTR过表达载体上调MDA-MB-231/ADR中p75NTR的表达;过表达p75NTR可增强MDA-MB-231/ADR对ADM、GEM和OXA的耐药性。结论:p75NTR在乳腺癌耐药细胞系中的表达高于其亲本细胞,过表达p75NTR能够降低多药耐药细胞对化疗药物的敏感性而促进其多药耐药性。

阿尔茨海默病小鼠脑中p75神经营养因子受体和老年斑的表达

目的探讨阿尔茨海默病(alzheimer’s disease,AD)中p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)表达和老年斑形成的时相关系及变化情况。方法取3、6、9月龄雄性B6C3-Tg(APPSwePSEN1dE9)85Dbo/J转基因小鼠及同窝雄性野生型小鼠脑组织,采用刚果红、免疫组化和荧光染色方法观察脑片中老年斑和变性p75NTR阳性神经纤维的表达以及共定位情况,并分别通过ELISA、Western blot方法检测脑匀浆中总β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)和p75NTR蛋白水平。结果转基因小鼠3月龄时皮层、海马未见老年斑形成,6月龄时皮层和海马可见到少量老年斑形成,在9月龄时此处老年斑沉积明显增多。ELISA检测结果提示Aβ水平随小鼠月龄增加而增多。与同龄野生型小鼠相比,3月龄转基因小鼠皮层和海马可见p75NTR阳性神经纤维增多,且部分神经纤维末梢变性膨大;6月龄者皮层、海马p75NTR阳性神经纤维增多,出现部分呈不规则球形的变性神经末梢;9月龄者皮层、海马p75NTR变性神经末梢显著增多。野生型小鼠在各年龄段均未见变性的p75NTR阳性神经末梢。Western blot结果表明转基因和野生型小鼠脑内p75NTR水平均随着年龄增加而增加,且同月龄间相比前者高于后者(P<0.01)。共聚焦显微镜观察到p75NTR阳性的变性神经末梢位于老年斑中心部位,而不表达p75NTR的变性神经末梢位于老年斑外周。结论在转基因小鼠脑内Aβ能增加p75NTR的表达;p75NTR阳性神经纤维早于老年斑出现,且在老年斑形成后位置靠近老年斑中心,提示其促进了Aβ沉积的起始过程。

P75神经营养受体与视网膜细胞凋亡

P75神经营养受体是最早发现的神经营养因子受体,既往认为其主要作为高亲和力受体的辅助受体间接发挥作用。近年来研究表明,P75神经营养受体在神经系统的发育中有诱导细胞凋亡作用。现阐述其在视网膜神经细胞生长,分化以及逆向运输神经营养因子等方面的作用。

神经营养因子的两类受体:Trks及p75(综述)

此文简要回顾了神经营养因子的两类受体——酪氨酸激酶受体家族 (Trks)及 p75的分子结构、分布、相互作用 。