基因重组神经营养蛋白-3的生物学活性

目的 :测定NT -3cDNA/CHO细胞表达的基因重组NT -3的生物学活性。方法 :体外培养 8日龄鸡胚背根神经节 (DRG) ,加入条件培养基 ,测量背根节神经突起生长的长度。结果 :NT -3cDNA/CHO细胞培养 4 8h后的无血清条件培养基 1∶2 4稀释后即能促进DRG神经突起的生长 ;随着其中NT -3浓度增加 ,神经突起长度也逐渐延长 ,有明显的量效关系 ;DRG培养 4 8h长出的神经突起与 2 4h相比 ,明显长而致密 ;NT -3生物活性的EC50 值为1 6.7ng/ml;NT -3浓度为 1 2 5ng/ml时 ,神经突起的长度达到最大值 ;NT -3cDNA/CHO细胞培养 72h的条件培养基中NT -3的活性高于培养 4 8h的条件培养基 ;NT -3单克隆抗体 3W 3的浓度为 0 .5μg/ml即能抑制NT -3的生物活性 ;抗体浓度为 1 μg/ml时 ,NT -3的生物活性降低一半。 结论 :基因重组NT

基因重组神经营养蛋白-3在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

建立了能表达基因重组NT 3的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ;通过Southernblot分析表明克隆细胞染色体中有明显的NT 3基因插入 ;用DotELISA和Westernblot实验证实了目的蛋白的表达及其分子量约为 1 4ku .利用EIA方法测定了阳性细胞株表达NT 3的量平均为 2 1 0 0ng/( 1 0 6细胞·48h) ;rNT 3可促进鸡E8背根神经节神经突起生长 ,其长度与rNT 3浓度有明显的量效关系 ;rNT 3的EC5 0 值为 1 6 .7ng/mL ;单克隆抗体 3W3可中和所表达的rNT 3的生物活性 .

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达

目的检测变应性鼻炎患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,并分析基因表达与鼻炎病情严重程度的关系。方法采用成组对照试验,抽提变应性鼻炎患者外周血总RNA,以正常成人为对照组。使用实时定量RT-PCR检测NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-ΔΔCt法计算实验组基因表达的变化倍数。结果相较于正常成人,变应性鼻炎患者的外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的2-ΔΔCt值依次为2.4368、4.4588、1.7818;NT-3mRNA表达的2-ΔΔCt值随着鼻炎严重程度加重呈递增趋势。结论相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,可能与变应性鼻炎发病有关;NT-3可作为评价变应性鼻炎严重程度的分子生物学指标。

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达及与Th1/Th2免疫失衡的关系

目的:测定变应性鼻炎患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,观察其表达与Th1/Th2免疫失衡的关系。方法:采用成组对照试验,使用实时定量RT-PCR检测外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-ΔΔCt法计算实验组基因表达的变化倍数。ELISA检测Th2类细胞因子和Th1类细胞因子的含量。结果:相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量是正常人的2.44、4.46和1.78倍,NT-3mRNA的表达随着鼻炎严重程度加重呈递增趋势。变应性鼻炎患者外周血中Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的浓度依次为2198±472、9407±703、3917±323μg/L,明显高于正常成人(P<0.05);而Th1类细胞因子INF-a的浓度为176±15μg/L,明显低于正常成人(P<0.05)。NGF、NT-3的扩增水平与IL-4、IL-6、IL-10浓度呈正相关。结论:相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,NGF、NT-3可能通过Th1/Th2免疫失衡促使变应性鼻炎发病。

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达

目的:检测变应性鼻炎(AR)患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,分析基因表达与AR病情严重程度的关系。方法:采用成组对照试验,抽提AR患者外周血总RNA,以正常成年人为对照。使用实时定量RT-PCR检测NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-△△Ct法计算AR患者基因表达的变化倍数。结果:相较于正常成年人,AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的2-△△Ct值依次为2.436 8、4.458 8、1.781 8;NT-3mRNA表达的2-△△Ct值随着AR严重程度加重呈递增趋势。结论:AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,可能与AR的发病有关;NT-3可作为评价AR严重程度的分子生物学指标。