基因重组神经营养蛋白-3的生物学活性

目的 :测定NT -3cDNA/CHO细胞表达的基因重组NT -3的生物学活性。方法 :体外培养 8日龄鸡胚背根神经节 (DRG) ,加入条件培养基 ,测量背根节神经突起生长的长度。结果 :NT -3cDNA/CHO细胞培养 4 8h后的无血清条件培养基 1∶2 4稀释后即能促进DRG神经突起的生长 ;随着其中NT -3浓度增加 ,神经突起长度也逐渐延长 ,有明显的量效关系 ;DRG培养 4 8h长出的神经突起与 2 4h相比 ,明显长而致密 ;NT -3生物活性的EC50 值为1 6.7ng/ml;NT -3浓度为 1 2 5ng/ml时 ,神经突起的长度达到最大值 ;NT -3cDNA/CHO细胞培养 72h的条件培养基中NT -3的活性高于培养 4 8h的条件培养基 ;NT -3单克隆抗体 3W 3的浓度为 0 .5μg/ml即能抑制NT -3的生物活性 ;抗体浓度为 1 μg/ml时 ,NT -3的生物活性降低一半。 结论 :基因重组NT

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达

目的检测变应性鼻炎患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,并分析基因表达与鼻炎病情严重程度的关系。方法采用成组对照试验,抽提变应性鼻炎患者外周血总RNA,以正常成人为对照组。使用实时定量RT-PCR检测NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-ΔΔCt法计算实验组基因表达的变化倍数。结果相较于正常成人,变应性鼻炎患者的外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的2-ΔΔCt值依次为2.4368、4.4588、1.7818;NT-3mRNA表达的2-ΔΔCt值随着鼻炎严重程度加重呈递增趋势。结论相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,可能与变应性鼻炎发病有关;NT-3可作为评价变应性鼻炎严重程度的分子生物学指标。

双位酶免疫法测定NT-3cDNA-CHO细胞上清中rNT-3含量

目的：定量测定ＮＴ３ｃＤＮＡＣＨＯ 细胞培养上清中基因重组ＮＴ３ 的含量。方法：利用ＮＴ３ 的ＭｏＡｂ ，建立了双位ＥＩＡ 法。结果：该法检测限为５ ．０ｐｇｍｌ ，批内差的变异系数为６ ．２ ％ ～１１ ．４ ％ （ ｎ ＝ ６） ，批间差变异系数为５ ．４ ％ ～８ ．２ ％ （ｎ ＝ ６） 。４ 株阳性细胞培养上清中有高水平的目的产物。结论：该ＥＩＡ 法简单准确；用该法成功筛选到一最高表达基因重组ＮＴ３ 的单克隆细胞株。

基因重组神经营养蛋白-3在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

建立了能表达基因重组NT 3的中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞系 ;通过Southernblot分析表明克隆细胞染色体中有明显的NT 3基因插入 ;用DotELISA和Westernblot实验证实了目的蛋白的表达及其分子量约为 1 4ku .利用EIA方法测定了阳性细胞株表达NT 3的量平均为 2 1 0 0ng/( 1 0 6细胞·48h) ;rNT 3可促进鸡E8背根神经节神经突起生长 ,其长度与rNT 3浓度有明显的量效关系 ;rNT 3的EC5 0 值为 1 6 .7ng/mL ;单克隆抗体 3W3可中和所表达的rNT 3的生物活性 .

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达及与Th1/Th2免疫失衡的关系

目的:测定变应性鼻炎患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,观察其表达与Th1/Th2免疫失衡的关系。方法:采用成组对照试验,使用实时定量RT-PCR检测外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-ΔΔCt法计算实验组基因表达的变化倍数。ELISA检测Th2类细胞因子和Th1类细胞因子的含量。结果:相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量是正常人的2.44、4.46和1.78倍,NT-3mRNA的表达随着鼻炎严重程度加重呈递增趋势。变应性鼻炎患者外周血中Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的浓度依次为2198±472、9407±703、3917±323μg/L,明显高于正常成人(P<0.05);而Th1类细胞因子INF-a的浓度为176±15μg/L,明显低于正常成人(P<0.05)。NGF、NT-3的扩增水平与IL-4、IL-6、IL-10浓度呈正相关。结论:相较于正常成人,变应性鼻炎患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,NGF、NT-3可能通过Th1/Th2免疫失衡促使变应性鼻炎发病。

变应性鼻炎患者外周血中神经营养因子mRNA的表达

目的:检测变应性鼻炎(AR)患者外周血中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋白-3(NT-3)mRNA的表达水平,分析基因表达与AR病情严重程度的关系。方法:采用成组对照试验,抽提AR患者外周血总RNA,以正常成年人为对照。使用实时定量RT-PCR检测NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达水平,2-△△Ct法计算AR患者基因表达的变化倍数。结果:相较于正常成年人,AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的2-△△Ct值依次为2.436 8、4.458 8、1.781 8;NT-3mRNA表达的2-△△Ct值随着AR严重程度加重呈递增趋势。结论:AR患者外周血中NGF、BDNF、NT-3mRNA的表达量上调,可能与AR的发病有关;NT-3可作为评价AR严重程度的分子生物学指标。

三种中药复方对慢性束缚应激大鼠行为及皮层和海马NT_3的影响

目的 研究慢性束缚应激时大鼠行为学变化、皮层和海马CA1区神经营养蛋白 3(NT3)的变化以及逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸对其的影响。方法 用特制束缚架连续束缚 7d与 2 1d、每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,用免疫组织化学方法结合图像分析检测大鼠皮层和海马CA1区NT3的变化。结果 2 1d模型组大鼠中央格停留时间明显延长 ,穿格次数明显减少 ,7d模型组大鼠的穿格数减少 ;两个模型组大鼠的挣扎次数明显减少。 3个复方都能缩短中央格停留时间 ,增加穿格次数和挣扎次数。连续束缚 7d后大鼠大脑皮层的NT3开始下降 ,至 2 1d模型组与正常对照组相比均有显著下降 (P <0 0 5 )。连续束缚 7d、2 1d后大鼠海马CA1区的NT3与正常对照组相比积分光密度明显降低 (均P <0 0 5 )。 3个复方均能升高皮层和海马NT3的积分光密度和海马中NT3的阳性细胞数 ,逍遥散能升高皮层NT3的阳性细胞数。结论 皮层和海马CA1区NT3下降参与了慢性应激的变化 ,疏肝、健脾、补肾的中药复方均能改善大鼠的行为变化 ,能上调NT3;但以逍遥散的调节作用较强 。

基于BDNF/PI3K/AKT信号通路探讨四君子汤对脾气虚证大鼠学习记忆功能的影响

目的:通过检测脾气虚证大鼠海马组织中BDNF/PI3K/AKT信号通路蛋白表达水平,探讨四君子汤对脾气虚大鼠学习记忆功能的影响。方法:将72只SPF级Wistar大鼠随机分为正常对照组和造模组,造模组大鼠采用综合造模法(苦寒泻下法+饮食失常+劳倦过度)复制脾气虚证模型,将成模大鼠按照随机数字表法分为模型对照组、阳性对照补中益气汤1.1 g/kg组和四君子汤6、12、24 g/kg组,每组12只,给药期间除正常对照组外,其余各组均继续造模,持续干预21 d后,采用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,剖取大鼠脑(海马)组织,采用HE染色法观察大鼠海马组织病理形态学改变;采用蛋白免疫印迹法检测大鼠海马组织中BDNF/PI3K/AKT蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠出现少食、倦卧、便溏等脾气虚症状,逃避潜伏期明显延长、穿越平台次数明显减少,有效区内停留时间明显缩短(P<0.05),海马组织CA1区神经元数目减少、排列紊乱,海马组织中BDNF、PI3K、AKT蛋白表达均显著下调(P<0.05);与模型对照组比较,各药物组大鼠体质量增加、活动增加、便质成形,逃避潜伏期明显缩短、穿越平台次数明显增加,有效区内停留时间明显增加(P<0.05),海马组织病理形态不同程度改善,海马组织中BDNF、PI3K、AKT蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:四君子汤显著改善脾气虚证大鼠学习记忆能力以及海马组织的病理形态,其机制可能与四君子汤上调海马组织中BDNF/PI3K/AKT信号通路有关。