视神经蛋白结构域的功能性作用

视神经蛋白(OPTN)是一种多功能蛋白,与一系列蛋白质相互作用,参与多种细胞功能,与青光眼和肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病有关。OPTN含有多个结构域使其能够参与多种细胞功能调节,包括NF-κB调节、膜运输、胞吐、囊泡运输、维持高尔基体形态、细胞周期控制、泛素化调节和自噬。OPTN结构和功能的多样性,为探讨其参与疾病的具体作用机制带来了挑战。本文梳理了近年来有关OPTN的研究文献,总结了OPTN各个结构域参与的功能性作用,为进一步理解OPTN在神经退行性疾病中所发挥的作用提供了思路和参考。

膜性肾病患者足细胞钙神经蛋白表达的检测及其临床意义

目的:足细胞上钙神经蛋白(calcineurin,CaN)的表达增加可直接破坏细胞骨架结构,导致足细胞损伤、蛋白尿产生。本研究通过观察膜性肾病(membranous nephropathy,MN)患者肾小球足细胞CaN的表达情况及其经钙神经蛋白抑制剂(calcineurin inhibitor,CNI)治疗后的变化,探讨其在指导治疗及发病机制研究中的意义。方法:选取经肾活检确诊的成人特发性MN49例,利用免疫组化方法对肾组织钙神经蛋白A亚基α亚型(CnAα)及足细胞骨架蛋白synaptopodin进行检测,并对2例经他克莫司治疗蛋白尿完全缓解的病例,比较治疗前后肾组织CnAα的表达情况。此外,选取V型狼疮性肾炎(LN)28例及乙肝相关性MN15例,与特发性MN进行比较。结果:49例特发性MN患者中20例肾小球足细胞CnAα表达增加(40.8%),足细胞CnAα表达增加的同时伴synaptopodin表达减弱及分布异常。2例足细胞CnAα表达阳性的特发性MN患者采用他克莫司治疗获临床完全缓解后行重复肾活检,发现足细胞CnAα表达显著减弱,同时,synaptopodin表达强度明显增加,分布恢复正常。观察发现15例乙肝相关性MN患者中无一例足细胞CnAα阳性,而28例V型LN中11例足细胞CnAα阳性(37.9%),其阳性率与特发性MN无明显差异。结论:本研究首次发现部分特发性MN患者存在足细胞CnAα表达增加及足细胞骨架结构的破坏。经CNI治疗蛋白尿完全缓解后,足细胞CnAα表达明显减少,同时synaptopodin的表达增加。部分V型LN患者也存在足细胞CnAα表达的增加,其阳性率与特发性MN相比无明显差异,而乙肝相关性MN患者中无一例阳性。上述发现不仅为指导MN患者的个体化治疗开启了一个新的方向,也为进一步阐明特殊病因导致肾小球膜性病变及足细胞损伤的机制提供了新的途径。

CYP3A5基因多态性与肾移植后钙调神经蛋白抑制剂慢性肾毒性的相关性

背景:钙调神经蛋白抑制剂是实体器官移植后抗排斥治疗中最重要的一线药物之一,主要通过包括CYP3A5在内的CYP3A亚家族进行代谢。但关于CYP3A5基因多态性与钙调神经蛋白抑制剂慢性肾毒性的相关研究国内外鲜有报道。目的:观察CYP3A5基因多态性与中国人群中钙调磷酸酶抑制剂慢性肾毒性发生的关系。方法:分别收集200例肾移植后出现慢性肾毒性的中国人种患者设为肾毒组;200例肾移植至少12个月后没有出现慢性肾毒性的中国人种患者设为对照组,取两组血样和临床数据。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术分别检测两组的CYP3A5突变位点基因型。通过统计学分析CYP3A5的基因多态性与钙调神经蛋白抑制剂慢性肾毒性之间的关系。结果与结论:慢性肾毒组中CYP3A5基因型*1/*1+*1/*3(显示CYP3A5活性)和*3/*3(不显示CYP3A5活性)分别占39.5%(79/200)和60.5%(121/200);对照组中CYP3A5基因型*1/*1+*1/*3(显示CYP3A5活性)和*3/*3(不显示CYP3A5活性)分别占28.5%(57/200)和71.5%(143/200)。两组间差异有显著性意义(χ2=9.000,P<0.05,OR=1.638,95%CI=1.078-2.488)。通过Logistic回归分析CYP3A5*1/*1和CYP3A5*1/*3是显著的引起CNI慢性肾毒性的危险因素(P<0.05,OR=1.638,95%CI=1.078～2.488)。提示,CYP3A5的基因多态性可能增加肾移植患者慢性肾毒性的遗传易感性;参与钙调神经蛋白抑制剂慢性肾毒性疾病的发生。

神经蛋白质组学双向电泳技术体系的建立

目的:建立神经蛋白质组学双向电泳技术体系。方法:利用双向电泳技术分别以人脑脊液、人和鼠脑组织为研究对象,通过离心等手段提取蛋白,行双向电泳,硝酸银染色,进行图谱分析。结果:从双向电泳图谱上获得蛋白质斑点:正常人脑脊液359个,多发性硬化人脑脊液397个,正常人脑组织480个,正常鼠脑组织524个。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。结论:从蛋白质水平探讨多发性硬化症、脑出血等疾病的发病机制,对寻找有效的药物靶点具有重要意义,同时为神经系统其它疾病的研究提供了切实可行的神经蛋白质组学研究技术体系。

局灶节段性肾小球硬化患者足细胞钙神经蛋白的表达

目的:观察成人局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)患者足细胞钙神经蛋白的表达并探讨其意义。方法:选取临床表现为肾病综合征且经肾活检确诊的成人特发性FSGS63例,微小病变(minimal change disease,MCD)24例和肾移植供肾组织10例作为对照。免疫组化法检测肾组织钙神经蛋白A(CnA)异构体α、β、γ的表达。免疫荧光法行肾组织CnAα和synaptopodin双标记,并采用胶体金免疫电镜对肾小球CnAα的表达定位。两位病理医生分别盲法评分染色结果。结果:供肾组织肾小球CnAα、β、γ免疫组化染色均阴性,肾小管CnAα、β微弱表达,CnAγ阴性。26例FSGS患者肾小球足细胞CnAα表达上调,其阳性率为41.27%;而MCD患者肾小球CnAα阴性(P<0.01);两者肾小球CnAα、β、γ染色均阴性。足细胞CnAα阳性患者肾小管损伤指标尿视黄醇结合蛋白[20.91(0.17～54.37)mg/L]、血清肌酐[(128.18±56.58)μmol/L]高于阴性患者(P<0.05);两者间病理类型构成差异存在统计学意义(P<0.01);而年龄、性别、尿蛋白、尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶、血清白蛋白及胆固醇无统计学差异。塌陷型、细胞型、顶部型、门周型FSGS中足细胞CnAα阳性病例分别为5例(83.33%)、10例(66.67%)、8例(61.54%)、3例(20%),14例经典型FSGS患者均阴性。多因素Logistic回归分析示血清肌酐(OR4.855,P<0.01)、塌陷型(OR11.069,P<0.05)为FSGS患者足细胞CnAα过表达的主要相关因素。69.23%足细胞CnAα阳性患者肾小球syanptopodin表达减弱且不连续。结论:本研究首次发现部分FSGS患者足细胞上CnAα表达增强,这可能参与了FSGS的发病。FSGS与MCD患者足细胞CnAα的表达差异,提示二者发病机制不同。对临床怀疑FSGS而未见明确节段病变的患者,足细胞CnAα阳性有助于诊断。

钙调神经蛋白抑制剂引起的肾毒性:肾移植术后的早期预防和治疗

目的:就近年来国内外预防和治疗钙调神经蛋白抑制剂肾毒性的方法进行综述。方法:应用PubMed检索及CNKI中国期刊全文数据库检索系统,以"环孢素A,他克莫司,钙调神经蛋白抑制剂肾毒性"和"Ciclosporine A,Tacrolimus,CNIS drug-induced chronic nephrotoxicity"为关键词检索相关文献。时间范围为1980-01/2010-01。选择文章主要内容与钙调神经蛋白抑制剂肾毒性直接相关、针对性强、代表性好、相关领域权威杂志的文章共44篇进行综述。结果:环孢素A与他克莫司做为常用的免疫抑制剂,明显改善了器官移植者的生活质量和生存率,如果要取得移植肾的长期存活,必须考虑到导致移植物丧失功能的病因学问题。目前,已经证明慢性移植物肾病和钙调神经蛋白抑制剂的肾毒性是导致移植肾丧失功能的主要原因,而同时钙调神经蛋白抑制剂肾毒性在慢性移植物肾病的自然病程中又起到了重要的作用。结论:目前没有有效预防和治疗钙调神经蛋白抑制剂肾毒性的手段。移植术后早期减少钙调神经蛋白抑制剂用量或撤除,或许是预防钙调神经蛋白抑制剂肾毒性更好的选择。

钙调神经蛋白在抗肾小球基底膜病肾小球内的表达增强

目的观察抗肾小球基底膜(GBM)病患者肾小球足细胞钙调神经蛋白(CaN)的表达,了解其与临床病理特点及肾脏长期存活的关系。方法选取临床病理资料完整的抗GBM病患者29例,对照为8例肾小球轻微病变患者。收集患者临床资料,免疫组化方法检测CaN A亚基α亚单位(CnAα)在肾小球的表达,免疫荧光染色观察足细胞骨架蛋白synaptopodin表达,分析CnAα与临床病理表现及预后的关系。结果 29例抗GBM病患者肾小球内均有不同程度的CnAα表达阳性,阳性区域占肾小球面积百分比显著高于轻微病变者(21.63%±14.27%vs2.21%±1.41%,P<0.01),同时伴有synaptopodin缺失。CnAα的表达量与抗GBM抗体峰值、血肌酐水平、血红蛋白水平、新月体比例及细胞/细胞纤维新月体比例呈现显著相关性,并与预后相关。结论首次观察到抗GBM病患者肾小球内CnAα表达增强,表达量与疾病活动、严重程度及预后相关,提示足细胞可能参与抗GBM病新月体形成,其作用机制仍有待进一步研究。

2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。

钙神经蛋白抑制剂慢性肾毒性模型的建立方法及进展

目前,钙神经蛋白抑制剂(CNI)肾毒性的机制尚未完全明确,因此需要建立一个良好的动物模型以供研究,以更好地研究CNI慢性肾毒性的机制和改善CNI肾毒性的途径。本文将大鼠CNI慢性肾毒性模型的发展过程及目前所采用的几种建立模型的方法 (正常饮食CNI肾毒性模型、钠耗竭CNI肾毒性模型、单侧肾切除术CNI肾毒性模型)进行综述。

急性缺血性脑梗死大鼠皮层神经蛋白聚糖的表达

目的:研究神经蛋白聚糖(neurocan)在急性缺血性脑梗死大鼠皮层内的表达。方法:用电凝法制成大鼠右侧大脑中动脉梗死模型,在1周、2周和4周不同时期,采用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR和Westernblotting技术检测梗死灶同侧和对侧的neurocan表达。结果:Neurocan和GFAP的双标结果提示neurocan阳性区域要大于GFAP阳性区域,neurocan阳性染色主要分布于胶质细胞及细胞间隙,4周组较1周组与2周组neurocanmRNA表达显著降低,差异显著(P<0.01),neurocan表达显著降低,差异显著(P<0.05),各组的neurocan C-末端糖蛋白无显著差异(P>0.05)。结论:Neurocan主要分布于脑梗死周围皮质的细胞间隙。脑梗死后neurocan表达升高,第1-2周是高峰期,4周下降至低水平,提示neurocan参与脑梗死后病理生理过程。

阿仑单抗诱导后钙神经蛋白抑制剂单药治疗方案在肾移植中的应用:一项系统评价研究

目的探讨阿仑单抗诱导后钙神经蛋白抑制剂单药治疗（AiCNIm）方案应用于肾移植术后免疫抑制的有效性和安全性。方法应用计算机检索Pubmed、Embase、Web of science、Cochrance library及中国知网（CNKI）等数据库,查找1980年至2014年12月31日发表的有关AiCNIm方案（AiCNIm组）和常规三联方案（Triple组）进行肾移植术后免疫抑制的随机对照临床研究。采用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果共纳入5项随机对照研究,421例肾移植受者。随访6~12个月结果显示,与Triple组相比,AiCNIm组的急性排斥反应或穿刺活检证实的排斥反应发生率更低[相对风险系数（RR）=0.59,95%可信区间（CI）0.40~0.89],但两组在移植肾失功（RR=0.85,95%CI 0.38~1.87）、受者死亡（RR=0.89,95%CI 0.30~2.67）、感染（RR=1.03,95%CI 0.91~1.17）和移植后新发糖尿病（RR=0.62,95%CI 0.29~1.30）方面比较,差异无统计学意义（均为P〉0.05）。结论基于现有证据,肾移植术后应用阿仑单抗诱导后用钙神经蛋白抑制剂单药治疗,短期免疫抑制效果好且安全。

基因多态性对实体器官移植钙神经蛋白抑制剂处置的影响

钙神经蛋白抑制剂(calcineurin inhibitors,CNIs)他克莫司(tacrolimus,FK506)和环孢素(cyclosporine A,CsA)是目前广泛应用于器官移植术后的2种基础免疫抑制剂,具有治疗指数窄,药物代谢动力学个体差异大的特点。如何根据患者个体差异来制定FK506和CsA的个体化治疗方案,使其疗效达到最佳而毒副作用降至最低,是临床工作者所面临的一大难题。遗传药理学和药物基因组学通过研究编码药物代谢酶、药物转运体以及药物靶分子相关基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymor-phisms,SNPs)对CNIs处置的影响,为免疫抑制剂的个体化治疗提供了一条有益的临床途径。

Guillain—Barre综合征血清神经蛋白脂蛋白抗体测定

我们检测73例GBS患者血清PLPAb,发现29例(39.7％)阳性,并显著高于非GBS组和献血员组。23例GBS患者双份血清PLPAb滴度表现上升,下降和保持平衡形式,急性期PLPAb滴度高于恢复期,呈下降趋势。GBS血清CIC阳性率为57.8％。PLPAb阳性与阴性者CIC阳性率无显著性差异。GBS患者急性期血清IgM升高、IgA下降,IgD升高,IgG正常,恢复期均趋于正常。PLPAb阳性者与阴性者间,Ig含量无显著性差异。

视神经蛋白突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展

视神经蛋白(OPTN)目前被认为是原发性开角型青光眼(POAG),肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的病理学标记蛋白。OPTN参与不同的细胞功能,例如调控后高尔基体膜运输、分泌、胞内病原体自噬、抗病毒先天免疫反应、有丝分裂、核因子-κB(NF-κB)通路、基因表达等。在OPTN突变的ALS临床病例中,受损的运动神经元呈现出胞质内OPTN泛素化聚集改变,蛋白质包涵体形成以及与ALS相关病理蛋白铜锌超氧化物歧化酶1(SOD1)、反式激活-反应性DNA结合蛋白-43(TDP43)、肉瘤熔合基因(FUS)的共定位。本文着重阐述OPTN突变在肌萎缩侧索硬化症中的研究进展,探讨其致病机制、病理改变以及治疗方法。

细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达的抑制作用

目的研究细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对星形胶质细胞活化后神经蛋白聚糖(Neurocan)、短蛋白聚糖(Brevican)表达的抑制作用。方法应用睫状神经营养因子(CNTF)刺激法建立体外培养星形胶质细胞的活化模型,实验分3组:对照组、活化组与抑制组。对照组:正常培养的星形胶质细胞;活化组:星形胶质细胞加入20 ng/ml睫状神经营养因子(CNTF)处理24 h;抑制组:星形胶质细胞用20 ng/ml睫状神经营养因子预处理24 h,加入100μmol/L Olomoucine。应用ELISA法检测不同时间点(12 h、24 h、48 h)各组细胞上清液中Neurocan、Brevican含量变化,半定量RT-PCR检测各组细胞GFAP mRNA及Neurocanm RNA、Brevican mRNA的表达变化。结果(1)活化组上清液中Neurocan、Brevican的含量在12 h、24 h、48 h随着时间的延长逐渐增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);抑制组上清液中Neurocan、Brevican含量随着时间的延长较活化组明显降低,与对照组、活化组比较差异有显著性(P<0.01)。(2)活化组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达明显增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01);抑制组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达均明显下调,与活化组比较差异有显著性(P<0.01)。结论细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine可抑制活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达。

神经蛋白聚糖研究进展

神经蛋白聚糖是中枢神经系统一种重要的硫酸软骨素蛋白聚糖 ,其在神经组织发育期调节细胞与细胞和细胞与基质的相互作用方面发挥了重要作用。神经蛋白聚糖在幼年期有高水平的表达 ,但在成年期很难检测到。脑损伤后 ,神经蛋白聚糖在胶质瘢痕中的表达明显增加 ,据认为可阻止轴突再生。

神经蛋白聚糖与中枢神经系统损伤

神经蛋白聚糖是凝集素蛋白聚糖家族中的一种硫酸软骨素蛋白聚糖,它是神经系统细胞外基质的成份之一,主要存在于中枢神经系统。在脑组织发育过程中,神经蛋白聚糖与一些细胞外基质分子相互作用,在中枢神经系统的发育过程中共同调节细胞的增生、迁徙、分化及轴突的生长、路径的发现和突触的形成与成熟,最终在促进中枢神经系统的解剖和功能分层中发挥作用。在成熟脑组织损伤后的再生修复过程中,表达上调的神经蛋白聚糖再次参与其中,在抑制中枢神经系统的再生与修复过程中发挥重要的作用。

CYP3A5基因型指导肝移植术后钙神经蛋白抑制剂的应用

肝移植术后早期的成功移植和长期优质的生活取决于免疫抑制剂治疗效果和不良反应之间的平衡,仅保持治疗性药物有效的血药浓度水平是有局限性的,还需根据受者的细胞色素P4503A5(CYP3A5)遗传背景和个体的高危因素选择合适的钙神经蛋白抑制剂(CNI),并选择适当的药物剂量。但目前CYP3A5与环孢素(CsA)合适剂量或初始剂量之间的关系仍需要进一步探讨。本文从CYP3A5的特点、CYP3A5基因表达对肝移植术后CNI用药的影响、CYP3A5基因多态性对临床疗效的影响、根据基因型个性化精准化选用CNI等方面进行述评。关注CNI的精准化用药,从针对所有受者的综合治疗方案向个性化精准化治疗方案转变。

视神经蛋白的功能及其在神经退行性疾病中的作用

视神经蛋白(OPTN)是一种在人体多器官组织中表达的高丰度蛋白质,其通过与多种蛋白质作用参与自噬、囊泡运输、炎症反应等胞内过程。而OPTN的突变是多种神经退行性疾病的致病因素。本文总结了OPTN的蛋白结构、表达情况、生物学功能及OPTN在青光眼、肌萎缩侧索硬化症(ALS)及帕金森病(PD)等神经退行性疾病发生发展中的作用,为治疗神经退行性疾病提供新的参考。