化学发光技术在蛋白质组学研究中的应用

目的:探讨在蛋白质组学研究中应用化学发光技术分析鉴定蛋白质的方法和价值。方法:采用细胞培养、双向电泳及银染等技术建立小鼠神经元蛋白质组图谱,再用PDQuest 2D分析软件和免疫印迹持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元蛋白质-PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果:三种蛋白质的双向电泳化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点,信号强,背景低。结论:利用化学发光技术鉴定蛋白质简单、实用、灵敏、高效,可为蛋白质组学的研究提供有力的技术支持。

NaCl浓度改变对人类神经元钙传感蛋白结构的影响:来自分子动力学模拟证据

背景:人类神经元钙传感蛋白是一个含有高电荷的蛋白,对溶液温度极其敏感,但溶液中离子浓度的变化是否能够改变蛋白结构,进而影响其正常功能的发挥,尚未发现相关研究。目的:探讨溶液中NaCl浓度的微小改变对人类神经元钙传感蛋白结构动力学影响的分子机制。方法:采用全原子计算机动力学模拟的方法,将蛋白质数据库中ID为2LCP的人类神经元钙传感蛋白前两个能量最低的结构作为初始结构,能量最小化后,将蛋白置于NaCl浓度分别为0.1,0.3和1 mol/L的水溶液中,以高速摄像速度(ps,10-12s)记录蛋白在模拟体系中的运行和变化情况。结果与结论:溶液中NaCl浓度升高,(1)人类神经元钙传感蛋白柔性增加,整体结构和局部的疏水口袋体积增大;(2)蛋白C端尾部L3蜷缩,首尾氨基酸D176和V190之间的次联系路径数量明显减少,导致两者之间的联系减弱;(3)蛋白N段和C段氨基酸之间的联系削弱,但两段段内氨基酸联系明显增强;(4)蛋白正负电荷间形成的盐桥数量和百分比均降低,尤其在0.3 mol/L NaCl水溶液中的减少更为明显。(5)结果说明,人类神经元钙传感蛋白对溶液NaCl浓度的改变非常敏感,NaCl浓度的微小变化能够引起蛋白关键结构的改变,从原子-分子的视角,为人类神经元钙传感蛋白在不同溶液环境中的结构变化提供理论参考。

抗神经丝重链抗体相关脑炎一例并文献复习

目的 报告国内首例抗神经丝重链抗体相关脑炎病例,并复习相关文献,总结抗神经丝重链抗体相关脑炎的临床特征。方法与结果 1例63岁女性抗神经丝重链抗体相关脑炎患者临床表现为认知功能障碍、反复癫痫发作、失语;头部MRI显示双侧额顶叶多发异常信号,部分脑回略肿胀,幕上脑室系统扩张,脑萎缩以双侧颞叶、海马为甚;18F-DPA714 PET/MRI显示额颞顶枕叶多脑区局灶性摄取异常增高,提示神经炎症;脑电图呈频繁痫样放电;脑脊液白细胞计数和葡萄糖升高,血清和脑脊液自身免疫性脑炎相关抗体阴性,血清TBA法显示小脑神经丝样荧光包绕浦肯野细胞,进一步检测抗神经丝蛋白抗体,血清抗神经丝重链抗体强阳性(1∶1000)。临床诊断为抗神经丝重链抗体相关脑炎,予静脉注射免疫球蛋白和甲泼尼龙治疗,预后改善。结论 抗神经丝重链抗体相关脑炎临床罕见,临床表现多样,早期诊断与鉴别诊断困难,早期予以免疫治疗对预后至关重要。

广西境内两种常见神经毒类毒蛇咬伤中毒的临床特点与院前急救策略分析

目的分析广西境内两种常见神经毒类毒蛇咬伤中毒的临床特点,总结其院前急救策略,为临床提供参考。方法选择2007—2012年在我科急诊抢救与住院的102例眼镜王蛇与银环蛇咬伤中毒患者,根据咬伤蛇类将患者分为眼镜王蛇组35例和银环蛇组67例,对比两组患者的院前急救措施、就诊时间、出现呼吸肌麻痹时间、伤情分级、临床表现、呼吸机治疗情况、预后情况及院外与院内死亡率等。结果两组患者的性别、年龄、院前急救措施及就诊时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。眼镜王蛇组危重型患者所占比例高于银环蛇组(80.00%和58.21%,P=0.028)。两组患者均出现了全身症状,眼镜王蛇组局部肿痛发生率(8.57%和0,P=0.015)、多器官功能障碍综合征(MODS)发生率(20.00%和5.97%,P=0.030)高于银环蛇组,出现呼吸肌麻痹时间短于银环蛇组〔(3.8±2.2)h和(7.1±8.4)h,P=0.042〕。眼镜王蛇组治愈率低于银环蛇组(77.14%和95.52%),死亡率高于银环蛇组(22.86%和4.48%),且眼镜王蛇组院外死亡率高于银环蛇组(11.43%和1.49%,P=0.027)。结论相对于银环蛇,被眼镜王蛇咬伤患者病情更为凶险,出现呼吸肌麻痹的时间更短,MODS发生率及院外死亡率更高,医务工作者应充分认识呼吸机辅助呼吸治疗的关键性,加强神经毒类毒蛇咬伤院前急救策略的宣教。

神经纤毛蛋白1、2在大肠癌组织中的表达及意义

目的探讨神经纤毛蛋白(NRP)-1、2在大肠癌组织中的表达及其与微血管密度(MVD)的相关性,以揭示NRP-1、2与肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组织化学方法检测66例大肠癌患者的癌组织、癌旁组织及正常组织中NRP-1、2的表达情况,以CD105标记肿瘤新生血管内皮细胞,计数MVD值。结果 (1)NRP-1、NRP-2在大肠癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达阳性率分别为71.2%、25.8%、0,及80.3%、15.2%、0,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)MVD在大肠癌组织、癌旁组织及正常组织中的计数分别为35.682±5.542、14.485±3.301、6.864±1.771,各组相比差异有统计学意义(F=986.654,P<0.01)。(3)不同年龄、性别、肿瘤的部位及分化程度的患者NRP-1、2的表达差异无统计学意义。肿瘤>5 cm的患者NRP-1阳性表达率较高,肿瘤侵及浆膜及以外、有淋巴结转移的患者NRP-1、2的阳性表达率均较高,不同的Dukes分期患者NRP-1、2阳性表达差异亦有统计学意义(P<0.05)。(4)大肠癌患者不同性别、年龄及肿瘤大小、部位和组织分化程度MVD的表达差异无统计学意义,而浸润到浆膜及以外、有淋巴结转移、Dukes分期高的患者相关MVD的表达增加(P<0.01)。(5)大肠癌组织中NRP-1(r=0.599,P<0.01)、NRP-2(r=0.484,P<0.01)的表达与MVD计数均呈正相关关系。结论 NRP-1、2在大肠癌的血管新生中起重要作用,并且与大肠癌侵袭和转移关系密切。

大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达的变化及意义

[目的]研究脊髓损伤后神经元中神经丝蛋白(NF200)及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化及其关系,探讨不同细胞在再生修复中的作用。[方法]SD大鼠30只,分为正常、伤后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d6组,每组5只,用免疫组化染色及图象分析方法观察神经元NF200及星形胶质细胞GFAP的表达,并对二者进行相关性分析。[结果]脊髓损伤后NF200及GFAP的表达均呈进行性增高,二者有显著的相关性;GFAP表达的增高早于NF200的增高,而前角神经元NF200的表达早于后角神经元。[结论]脊髓损伤后,星形胶质细胞可能是刺激神经元功能活跃,促进神经纤维再生的一个重要因素,不同类型神经元对损伤的反应存在着差异。

尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白与外周血CD45RA+T细胞亚群联合检测早期诊断阿尔茨海默病

目的探讨尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(Alzheimer disease related neural thread protein,AD7cNTP)与外周血淋巴细胞CD45RA+T亚型联合检测在阿尔茨海默病(AD)早期诊断中的价值。方法根据Peterson制订的轻度认知功能障碍(MCI)诊断标准和美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-Ⅳ)有关AD的诊断标准,选取AD患者32例(AD组),MCI患者30例(MCI组),另选60例健康者作为对照组。对比各组尿AD7c-NTP与CD45RA+T细胞亚群变化及诊断价值。结果 1CD45RA+T蛋白表达水平在AD组和MCI组显著低于对照组(P<0.01);2CD45RA+T在AD组和MCI组中的相对表达水平较对照组显著降低(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);3尿AD7c-NTP在AD组和MCI组中的含量较对照组显著升高(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);4CD45RA+T与AD7c-NTP联合诊断具有较好的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结论 AD7c-NTP与CD45RA+T联合检测是诊断AD早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值,为AD早期诊断及疗效监测提供参考。

神经丝蛋白在猪胸腰段脊髓火器贯通伤后的早期表达

目的:建立家猪胸腰段脊髓火器贯通伤模型和改良Allen’s打击伤后全瘫模型,观察伤后神经丝蛋白的早期表达。方法:实验于2005-05/08在解放军第一七五医院实验室完成。取健康雄性家猪20只,单纯随机分为3组:①火器伤组(n=9):在全麻状态下制作胸腰段(L1～L2)脊髓火器伤模型,分为伤后1,3,6h3个时间处死(n=3)。②打击伤组(n=9):L1节段脊髓行改良Allen’s打击,致伤力为500g·cm,处死时间同前。③空白对照组(n=2):只麻醉,不造模,伤后6h处死。各组在伤后相应时间点取脊髓标本(火器伤组取近伤段,打击伤组取伤点),进行神经丝蛋白的免疫组化染色,观察其阳性表达的吸光度(A)值;在伤后6h火器伤组和打击伤组分别在脊髓伤点、近伤段(距伤点1～3cm脊髓)、中伤段(距伤点3～7cm脊髓)及远伤段(距伤点近头侧10～12cm处的胸髓)取材,观察神经丝蛋白的A值。结果:经补充20只猪进入结果分析。①空白对照组神经丝蛋白的A值为91.1±3.01,打击伤组脊髓损伤后1,3,6h神经丝蛋白的A值均高于火器伤组(45.7±2.59,39.5±2.48,34.6±4.06;31.8±2.66,27.4±1.99,20.8±1.69),且两组神经丝蛋白的表达随着时间延长而下调(P<0.001)。②伤后6h打击伤组仅在伤点和近伤段神经丝蛋白的A值低于空白对照组(P<0.05),而火器伤组各部位神经丝蛋白的A值低于空白对照组(P<0.05)。结论:和脊髓打击伤相似,脊髓火器伤后神经细胞的破坏与修复并存,有一定的时空性,且与损伤程度有关。受伤后1h即可发现神经元细胞的破坏、崩解,但脊髓火器伤的波及范围较打击伤更为广泛。

氯丙烯对大鼠神经组织神经丝亚单位蛋白含量的影响

目的 为了进一步探讨氯丙烯引起的周围神经病的发病机理。方法 用Western印迹方法测定了亚慢性中毒大鼠大脑、脊髓、坐骨神经组织低分子量神经丝 (NF L)、中分子量神经丝 (NF M)和高分子量神经丝 (NF H) 3个亚单位相对含量的变化。结果 氯丙烯使脑组织沉淀和上清液中神经丝 3个亚单位的相对含量明显降低 ;在脊髓组织沉淀和上清液中 ,NF M均降低。NF H在沉淀增加 ,在上清液中降低。NF L在沉淀增加 ;在坐骨神经组织沉淀和上清液中 ,氯丙烯使NF M含量降低 ,而使NF H含量增加。NF L在沉淀中降低、在上清液中明显增加。结论 氯丙烯引起的中毒性周围神经病与神经丝亚单位紊乱有关。

不同环境设置对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围神经丝蛋白(neurofilament,NF)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法 SD大鼠140只。将实验动物随机分为假手术对照组(10只)和大脑中动脉阻断(MCAO)手术组(130只),再将MCAO手术组随机分为独居组(30只)、社会交往组(40只)、探索学习组(30只)和丰富环境组(30只)。假手术对照组和各MCAO手术组分别于术后7、28天随机选取5只大鼠处死,采用免疫组织化学染色,观察大鼠梗死灶周围皮质NF、GFAP阳性表达。结果社会交往组、探索学习组和丰富环境组术后7、28天NF、GFAP阳性表达均明显优于独居组和假手术对照组(P<0.05或<0.01)。结论社会交往、探索学习和丰富环境均能促进梗死灶周围NF、GFAP的阳性表达。

肺癌组织神经生长导向因子Slit2蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究肺癌组织中神经迁移导向因子Slit2蛋白的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学法检测56例肺癌组织中Slit2蛋白的表达及微血管密度(microvessal density,MVD)。结果:56例肺癌标本中,Slit2阳性率为76.8%,且其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分化程度及临床TNM分期密切相关,P<0.01;而与患者性别和病理类型无关,P>0.05。Slit2蛋白表达与肺癌组织中MVD呈显著正相关,r=0.732,P<0.001。结论:肺癌组织中Slit2表达在肺癌生长和血管生成中起重要作用,其有可能成为反映肺癌进展的指标和抗肿瘤治疗的重要靶点。

神经丝蛋白与帕金森病的相关性研究

目的研究神经丝蛋白(NFs)作为帕金森病(PD)外周生物标记物的可能性及临床意义。方法用酶联免疫吸附方法检测23例PD患者、30例急性脑梗死患者和29名健康对照者血清NFs水平并进行比较。分析PD患者病程和血清NFs水平的相关性。结果 PD患者和急性脑梗死患者血清NFs水平均明显高于健康对照(P<0.05),而PD患者和急性脑梗死患者之间血清NFs水平差异无统计学意义(P>0.05)。PD患者血清NFs水平和病程具有相关性(r=0.739,P<0.05)。结论 PD患者疾病过程中存在轴索损伤,且轴索损伤严重程度可能随病程延长持续加重;PD患者血清NFs水平改变无疾病特异性,不能作为理想的PD外周生物标记物。

神经微丝蛋白免疫荧光染色法观察运动终板

目的:了解应用神经微丝蛋白免疫荧光染色法观察运动终板的效果。方法:取SPF级大鼠6只,麻醉状态下取材双侧比目鱼肌神经入肌点组织,以多聚甲醛固定,冰冻切片,行神经微丝蛋白免疫荧光染色,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察运动终板形态,并用激光共聚焦显微镜软件对运动终板形态进行三维重建。结果:染色切片在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下均可观察到运动终板爪形结构形态,激光共聚焦显微镜采集图像进行三维重建后,可以得到运动终板立体结构。结论:神经微丝蛋白免疫荧光染色法是一种较好的运动终板的观察方法。

S-100蛋白与小儿神经系统疾病

S 10 0蛋白是神经组织蛋白之一 ,集中分布于神经胶质 ,与神经系统发育有关。近年来 ,人们逐渐把它作为脑损伤的简便而灵敏的检测指标。该文简述了S 10 0蛋白在小儿常见神经系统疾病诊断和预后判断中的作用。

生长相关蛋白在脊髓源性神经干细胞向神经主细胞分化过程中的表达

目的:探讨脊髓源性神经干细胞向神经元诱导分化过程中生长相关蛋白43的表达,分析其对脊髓损伤修复的主导作用。方法:实验于2003-03/09在中国医科大学实验动物中心完成。取15只孕14d的胎鼠,自胎鼠的脊髓区提取神经干细胞,经培养及神经巢蛋白免疫细胞化学鉴定,观察在神经干细胞定向诱导分化为神经元过程中,生长相关蛋白43于不同时间点的形态学表达。培养液为添加B27(2%)、碱性成纤维细胞生长因子(20mg/L)、表皮细胞生长因子(20mg/L)的无血清培养基DMEM/F12。置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中悬浮培养,观察其生长情况,每3天换液1次,共培养5次。分别于分化1,2,4,8d取出载玻片,对生长相关蛋白的表达进行免疫组化检测。总细胞和阳性细胞在显微镜下计数。结果:15只胎鼠的脊髓源性神经干细胞全部进入结果分析。①神经干细胞的培养情况:培养24h后,可见神经球;第2天时,神经球数目增多,呈桑椹状,折光性强,死细胞无光泽,仅有轮廓。②神经干细胞的鉴定结果:免疫细胞化学染色可见神经球内圆形细胞呈神经巢蛋白抗原强阳性,核未着色。神经干细胞定向分化后,细胞逐渐贴壁,到第4,8天时,细胞逐渐变大,突起变长,偶见多个突起。神经元特异性烯醇化酶阳性的神经元,胞浆及核膜出现棕色阳性反应,细胞核大而圆,无着色。细胞连续计数共712个,其中神经元特异性烯醇化酶阳性细胞296个,比例为41.57%。③神经干细胞分化过程中生长相关蛋白表达的测定:神经干细胞分化第1天,胞质内出现生长相关蛋白,第4天表达增强,于核周及突起中明显,逐渐向胞膜转移,并且长的突起与其他细胞的突起之间形成连接,至分化第8天时这种突起生长停止,神经干细胞分化为成熟的神经元细胞,生长相关蛋白反应减弱并消失。细胞连续计数共736个,其中生长相关蛋白阳性细胞246个,比例为33.42%。结论:在神经干细胞分化为神经元的过程中,生长相关蛋白基因呈一过性表达,参与引导突起的生长并发挥促进作用。

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响(英文)

背景:天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3是一种促进细胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶,睫状神经营养因子具有多种生物活性,能保护损伤后多种神经元特别是运动神经元,减少神经细胞损伤的发生。目的:观察睫状神经营养因子对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中的表达以及在不同年龄阶段的变化规律和调控特点。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学野战外科研究所大坪医院超声科、第五研究室。材料:实验于2000-04/2001-12在解放军第三军医大学野战外科研究所完成。Wistar大鼠,体质量30～100g的幼年大鼠(鼠龄20d)、200～350g的成年大鼠(鼠龄4个月)、400～800g的老年大鼠(鼠龄18～24个月)各270只,雌雄不限,共810只。方法:①实验动物分组:各年龄组大鼠随机分为正常组(n=18)、睫状神经营养因子组(n=126)和生理盐水组(n=126),睫状神经营养因子组和生理盐水组分为术后1d、3d、1周、2周、4周、8周、12周组。②动物模型制作:睫状神经营养因子组和生理盐水组切除2mm右侧坐骨神经,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室,睫状神经营养因子组再生小室内注入25mg/L重组睫状神经营养因子15μL,生理盐水组再生小室内注入生理盐水15μL。③待测标本的制作及检测:分别取各组动物6只,取脊髓L3～5节段,进行天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3免疫组织化学检测、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性检测和Westernblotting检测。主要观察指标:①免疫组织化学检测的各组大鼠脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的表达。②Westernblotting检测脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的分布与表达强度变化。③天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性变化。结果:810只大鼠进入结果分析。①免疫组织化学检测各组大鼠脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的表达:损伤后各年龄组生理盐水组伤侧神经元天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3染色表达增强,伤后2周、4周明显增多、增强,8周、12周较少神经元表达阳性;睫状神经营养因子组损伤后各年龄组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达增强,伤后2周、4周最为明显。②Westernblotting检测脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的分布与表达强度变化:各年龄正常组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达差异无显著性意义(P>0.05)。与同龄正常组及对侧未伤侧比较,各年龄组生理盐水组及睫状神经营养因子组损伤后1周、2周、4周天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达增强,差异有显著性意义(P<0.05～0.01);睫状神经营养因子组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3幼年于损伤后1周、2周、4周,成年于2周、4周,老年于4周表达较生理盐水组减弱,差异有显著性意义(P<0.05～0.01)。各组对侧未伤侧与正常组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性变化:幼年、成年、老年生理盐水组伤侧脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性升高,各时相点幼年大鼠天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性高于老年组及成年组(P<0.05～0.01),幼年、成年、老年组睫状神经营养因子组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性低于生理盐水组(P<0.05～0.01)。损伤后生理盐水组及睫状神经营养因子组对侧未伤侧天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性,除幼年伤后12周较正常组低外(P<0.05),其余各组与正常组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:坐骨神经损伤后不同鼠龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达及活性增高,外源性睫状神经营养因子可减少脊髓神经元中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达及活性,起保护脊髓神经细胞的作用,其作用在幼年组、成年组及老年组依次减弱。

神经丝蛋白AD7c-NTP在阿尔茨海默病临床诊断中的应用

目的探讨阿尔茨海默病(AD)相关性神经丝蛋白(AD7c-NTP)在AD早期诊断中的临床应用价值。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对AD患者、血管性痴呆(VD)患者及健康者(对照组)进行尿AD7c-NTP水平检测。结果 AD组、VD组与对照组尿AD7c-NTP水平分别为(1.504±1.766)、(1.463±1.422)、(0.479±0.285)ng/mL,AD组、VD组均高于对照组(P<0.05)。当尿AD7c-NTP水平为0.585ng/mL时,对AD的诊断灵敏度为65.0%,特异度为77.6%。结论尿AD7c-NTP定量检测在AD早期诊断和病情评估中有一定的临床参考价值。

脑信号蛋白3A及其受体神经菌毛素-1在慢性肝性脑病大鼠模型中的表达及意义

目的探究肝性脑病(HE)大鼠大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中脑信号蛋白3A(Sema3A)及受体神经菌毛素(NRP-1)的表达变化及可能的意义。方法SD大鼠40只随机分为4组:对照组、HE 1 d、15 d、30 d组,每组各10只。胆管结扎并辅以乙酸铵灌胃的方法制备慢性HE(C型)大鼠模型,进行行为学、神经病学改变的检测;ELISA检测大鼠血清中血氨及其他生化指标;HE染色观察大鼠肝脏和脑组织形态学变化;Real-time PCR检测各脑区Sema3A、NRP-1 mRNA的表达;免疫组化、Western Blot分别检测大脑皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A及NRP-1蛋白的表达变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果4组间神经反射等级、血氨、HE等级均有统计学差异(F值分别为76.39、417.07、71.56,P值均<0.001),与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组神经反射得分、血氨、HE等级均明显升高(P值均<0.05)。4组间TBA、Alb、TBil、AST、ALT、ALP比较差异均有统计学意义(F值分别为1022.61、171.56、685.18、421.01、675.20、2405.04,P值均<0.001),与对照组相比,HE 1 d、15 d、30 d组Alb水平明显降低(P<0.05),其余指标明显升高(P值均<0.05)。病理学结果显示,与对照组相比,造模后大鼠肝脏出现不同程度的变性坏死,炎细胞浸润,大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区体等部位观察到神经细胞不同程度的肿胀、破裂、排列紊乱等病理征象。4组间Sema3A、NRP-1 mRNA比较差异均有统计学意义(Sema3A mRNA:F值分别为273.83、158.84、103.59、128.90,P值均<0.001;mRNA:F值分别为88.78、173.02、156.44、289.09,P值均<0.001);与对照组比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层、海马CA1、CA3、DG区中Sema3A、NRP-1 mRNA相对表达量均较高(P值均<0.05)。建模后Sema3A、NRP-1蛋白表达水平上调,免疫组化显示,HE组大鼠前额叶皮层和海马CA1、CA3、DG区Sema3A及NRP-1呈阳性染色。Western Blot显示,4组间大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区Sema3A、NRP-1蛋白表达差异均有统计学意义(Sema3A:F值分别为835.14、774.16、282.60、856.29,P值均<0.001;NRP-1:F值分别为876.59、472.48、402.36、207.47,P值均<0.001);与对照组相比较,HE 1 d、15 d、30 d组大脑前额叶皮层及海马CA1、CA3、DG区内Sema3A、NRP-1蛋白表达均明显升高(P值均<0.05)。结论Sema3/NRP-1在慢性HE大鼠脑组织内表达上调,参与HE神经损伤的病理生理过程。

周围神经端侧吻合后侧支发芽过程中睫状神经营养因子和S-100蛋白的表达

目的:观察与许旺细胞关系密切的睫状神经营养因子和S-100蛋白在周围神经端侧吻合后神经再生过程中的表达。方法:实验于2002-10/2004-05在上海海军医学研究所完成。选取3月龄SD大鼠16只,随机分为吻合近端组、吻合远端组,8只/组。右侧为吻合组,左侧为正常对照组,于术后1,2,4,8周从吻合近端组及吻合远端组各取1只,共8只。全部大鼠右侧自腓神经切断,胫神经外膜开窗,腓神经远端行外膜端侧吻合于胫神经开窗处。吻合近端组与吻合远端组分别切取吻合近端、远端神经,制备纵切片标本,睫状神经营养因子和S-100蛋白采用免疫组织化学反应并结合计算机进行反应强度的半定量分析。阳性反应染色强的部位透光弱,其灰度值就低,反之灰度值高。结果:实验纳入大鼠16只,均进入结果分析。①各组术后不同时间睫状神经营养因子免疫反应灰度值的比较:与正常对照组比较,吻合近端组术后1,2,4,8周均基本相近(P>0.05);吻合远端组术后1,2,4周均明显升高(117.83±10.44,155.57±10.76,186.42±5.23,142.83±6.99,P均<0.01),8周时降至正常水平(P>0.05)。②各组术后不同时间S-100蛋白的表达:术后1,2,4,8周与正常对照组比较,吻合近端组均无明显差异(P>0.05);吻合远端组均呈下降趋势(98.80±3.43,37.21±11.44,56.01±5.77,65.13±12.36,68.17±9.35,P<0.01或0.05)。结论:在端侧吻合中,由于供体神经轴突的完整性,无法得到近端的因子调节,侧支发芽主要依赖于远端许旺细胞和靶器官。吻合远端睫状神经营养因子呈先下降后上升的趋势,而S-100蛋白呈上升趋势,两者均随神经的修复逐步上调,表明睫状神经营养因子与神经轴突的再生密切相关。提示许旺细胞在端侧吻合轴突侧支发芽中有着必不可少的作用。

尿液神经丝蛋白检测对老年阿尔茨海默病患者的临床意义

目的探讨老年阿尔茨海默病(AD)患者尿液中神经丝蛋白含量检测的临床意义。方法 AD组:门诊以及住院诊断为AD患者66例(AD组),其中男性60例,女性6例;年龄范围75～96岁,年龄(87. 27±4. 95)岁;对照组:智能正常老人85名,其中男性72名,女性13名;年龄范围74～98岁,年龄(86. 93±5. 21)岁,所有受试者进行认知功能测评,包括简易智能状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR),Hachinski缺血指数量表(HIS)。根据量表评分将AD组分为轻、中、重组。采集尿液标本进行尿液中神经丝蛋白(AD7c-NTP)含量检测。结果 (1) AD组尿AD7c-NTP阳性明显高于对照组,两组阳性率比较,差异有统计学意义(P <0. 001);(2)两组受试者年龄、性别、教育背景与AD7c-NTP含量的相关性分析(Pearson相关分析)显示,两组尿AD7c-NTP含量与以上诸因素均无明显相关性; MMSE分数与AD7c-NTP含量呈负相关,CDR分数与AD7c-NTP含量呈正相关。(3)轻度AD组与中、重度AD组尿AD7c-NTP含量比较差异有统计学意义(F=88. 756,P <0. 001),提示尿中的AD7c-NTP含量随疾病严重程度增加而上升。结论通过对老年AD患者尿液中AD7c-NTP含量检测,可以对AD的诊断提供帮助,并可能与病情严重程度有一定的关系。