神经调节素1β通过激活Sirt1信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的 探讨神经调节素1β(neuregulin1β,NRG1β)是否通过抑制自噬减轻大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion reperfusion,MCAO/R)损伤,以及对沉默信息调节因子1(silent information regulator protein 1,Sirt1)信号通路的影响。方法 将210只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO/R组)、治疗组(NRG1β组)、激动剂组(SRT501组)、激动剂+治疗组(SRT501+NRG1β组)、抑制剂组(EX527组)和抑制剂+治疗组(EX527+NRG1β组),每组30只。采用改良线栓法建立MCAO/R模型,线栓由颈外动脉插入颈内动脉18~22 mm,堵塞左侧大脑中动脉起始部。缺血2 h后,缓慢拔出线栓,恢复脑血流22 h。EX527(5 mg/kg)、SRT501(100 mg/kg)于术前30 min腹腔注射,NRG1β(2μg/kg)于拔出线栓后由微量注射器注入颈内动脉。脑缺血2 h、再灌注22 h后采用改良神经损伤严重程度评分(modifiedneurologicalseverityscore,mNSS)法评价各组大鼠的神经行为功能,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride,TTC)染色法计算大鼠脑梗死体积比例,苏木精-伊红染色观察神经元形态变化,免疫印迹(westernblot,WB)和免疫荧光(immunofluorescence,IF)法分别检测额叶皮质缺血半暗带(ischemicpenumbra,IP)区Sirt1、LC3、P62蛋白的表达和阳性细胞指数(positive cell index,PCI)。结果 NRG1β组大鼠的mNSS[(10.0±0.8)分vs.(12.8±0.6)分,P<0.001]和脑梗死体积比例[(23.78%±3.52%)vs.(40.24%±1.55%),P<0.001]均优于MCAO/R组,差异具有统计学意义;与MCAO/R组比较,NRG1β组、SRT501组、SRT501+NRG1β组mNSS均有不同程度下降、脑梗死体积比例缩小;各组中SRT501+NRG1β组mNSS最低、脑梗死体积比例最小,EX527组mNSS最高、脑梗死体积比例最大。苏木精-伊红染色显示,NRG1β组大鼠的神经元形态结构损伤较MCAO/R组、EX527组有所改善。WB结果显示,NRG1β组Sirt1表达[(0.81±0.01)vs.(0.67±0.02),P<0.001]和P62表达[(0.92±0.01)vs.(0.78±0.02),P<0.001]均高于MCAO/R组,LC3表达[(0.49±0.02)vs.(0.94±0.03),P<0.001]低于MCAO/R组。IF结果显示,NRG1β组Sirt1PCI[(0.67±0.01)vs.(0.52±0.02),P<0.001]和P62PCI[(0.52±0.02)vs.(0.37±0.01),P<0.001]均高于MCAO/R组,LC3PCI[(0.38±0.01)vs.(0.50±0.01),P<0.001]低于MCAO/R组。WB和IF检测显示,Sirt1与P62表达趋势一致,NRG1β组、SRT501组与SRT501+NRG1β组表达高于MCAO/R组,各组中SRT501+NRG1β组表达最高、EX527组表达最低;LC3蛋白表达趋势与Sirt1、P62相反,在NRG1β组、SRT501组与SRT501+NRG1β组表达较MCAO/R组低;各组中SRT501+NRG1β组表达最低、EX527组表达最高。结论 NRG1β可通过激活MCAO/R损伤大鼠Sirt1信号通路抑制自噬发挥神经保护作用。

精神分裂症与神经调节素1、G72及G-蛋白信号转导调节子4基因的关联研究

目的 探索神经调节素1（NRG1）、G72、G-蛋白信号转导调节子4（RGS4）基因变异的独立或联合作用与精神分裂症的关联。方法 采用酶切或测序方法,对315例精神分裂症患者和347例正常对照者NRG1、G72、RGS4基因的13个单核苷酸多态性（SNPs）位点进行基因型检测和遗传关联分析。应用Lo-gistic回归分析和风险或保护基因型分层后卡方检验评估三基因的交互作用。结果 单位点关联分析发现,NRG1的5个SNPs、G72的1个SNP、RGS4的2个SNPs与精神分裂症关联（P〈0.05）。Logistic回归分析构建了三个基因交互作用模型,各自变量的OR分别为：nrg1=3.58,rgs4=1.24,g72_rs947267=1.45,nrg1＊rgs4=3.03,nrg1＊g72_rs947267=1.06。应用基因型分层后卡方检验表明,三基因存在协同风险效应（OR=2.35～4.05;P〈0.05）。结论 NRG1、G72及RGS4基因的单独或交互作用与精神分裂症关联。

神经调节素1β对慢性氧乐果中毒大鼠学习记忆障碍的治疗作用

目的观察神经调节素1β(NRG1β)对慢性氧乐果中毒大鼠细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2磷酸化(p-ERK1/2)水平的影响,探索其改善慢性氧乐果中毒认知障碍的作用机制。方法应用Y型电迷宫筛选出有学习记忆能力的大鼠,给予氧乐果5mg/(kg·d)皮下注射4周建立慢性氧乐果中毒认知障碍模型,模型制作成功后治疗组大鼠经侧脑室注射给予NRG1β干预治疗。Y型电迷宫检测大鼠的学习、记忆能力;HE染色观察海马组织的形态学变化;透射电子显微镜观察海马组织超微结构;免疫组织化学和免疫蛋白印迹法检测p-ERK1/2在海马组织内的分布和表达水平。结果 Y型电迷宫结果显示,染毒大鼠学习记忆能力较对照组明显降低,经NRG1β干预治疗后较模型组明显提高;模型组大鼠海马组织损伤明显,ERK1/2磷酸化水平明显下降;NRG1β治疗后海马组织损伤较模型组轻微,ERK1/2磷酸化水平升高。结论 NRG1β可以上调慢性氧乐果中毒大鼠海马组织内ERK1/2的磷酸化(p-ERK1/2)水平,对慢性氧乐果中毒认知障碍有一定的改善作用。

神经调节素1基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症及其认知功能的关联研究

目的探讨昆明地区汉族人群神经调节素1(NRG-1)基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症及认知功能的关系。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测141例精神分裂症患者和84名正常对照的NRG-1基因SNPrs2954041多态性;采用韦氏记忆量表(WMS)和威斯康辛卡片分类测验(WCST)评估两组人群的记忆功能和执行功能,并用PANSS量表评定患者的临床症状。结果两组NRG-1基因SNPrs2954041多态性的基因型和等位基因频率差异有统计学意义(2=34.01,P<0.05;2=30.201,P<0.05)。按性别分组后比较,结果仍同前。患者组中各基因型组间认知功能比较结果示:①各基因型组间韦氏记忆量表的理解记忆得分差异有统计学意义(P<0.05),两两比较显示G/G与T/T基因型患者间差异有统计学意义(P<0.05)。②G/G与T/T基因型患者比较,威斯康辛卡片分类测验中的错误数、持续错误数和分类个数差异有统计学意义(P<0.05)。结论NRG1基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症存在关联,他也与精神分裂症患者的认知功能相关。

神经调节素1基因多态性位点rs35753503、rs3924999与利培酮治疗精神分裂症的关联

目的探讨神经调节素1(NRG1)基因多态性位点rs35753505、rs3924999与云南地区汉族精神分裂症利培酮治疗12周后临床疗效的关系.方法纳入122例精神分裂症住院患者,最终114例完成12周利培酮治疗、基因检测及相关量表评定,同时收集性别、年龄、受教育年限相匹配的187名汉族正常人群对照.采用微测序分型技术SNP检测基因多态性位点,采用Taq Man等位基因分型技术进行基因分型及基因频率分析,于治疗开始及治疗12周末进行阴性和阳性症状量表PANSS、个人和社会功能量表PSP、瑞文标准推理测验、韦氏智能测验数字识记法、数字划消测验测评,用两者的差值评估利培酮治疗精神分裂症的疗效.结果 (1)精神分裂症与对照的rs35753505、rs3924999两个基因多态性位点的基因型、等位基因频率分布差异无统计学意义;(2)rs35753505、rs3924999两个多态性位点不同基因型的基线临床资料比较未发现差异有统计学意义;(3)2个多态性位点不同基因型在利培酮治疗前后的数字划消一净分差值差异有统计学意义,其中rs35753505位点的2种基因型比较差异有统计学意义(P=0.010),即G/A组数字划消一净分差值较G/G组的差值高;rs3924999位点的3种不同基因型比较中,A/A与A/G比较差异有统计学意义(P=0.032),即A/A组数字划消一净分差值较A/G组的差值高;(4)利培酮治疗前后瑞文标准推理得分差值与rs35753505位点的2种基因型比较差异有统计学意义(P=0.004),即G/A组瑞文标准推理得分差值较G/G组的差值高;(5)利培酮治疗前后差值的相关分析及回归分析结果显示,数字划消二差值与基线的病程、基线的剂量、基线的瞬时记忆、基线数字划消二、三净分、rs35753505基因型有关.结论 rs35753505位点不同基因型患者经利培酮治疗后,注意的指向性和集中力、逻辑推理能力改善程度不同,G/A基因型患者的改善程度大于G/G基因型.

老年精神障碍患者认知功能和神经调节素1基因多态性及事件相关电位P300的相关性

目的探讨老年精神障碍患者认知功能和神经调节素1基因多态性的关系。方法选择老年精神障碍患者211例(精神障碍组)和老年健康者211例(对照组)作为研究对象,健康者作为对照组,对其神经调节素1基因多态性、韦氏记忆量表及事件相关电位P300进行检测,比较不同基因型精神障碍患者韦氏记忆量表结果及P300结果,比较精神障碍组和对照组P300结果。结果三种基因型患者的理解记忆分之间比较差异显著(P<0.05),基因型G/G组的理解记忆分高于基因型T/T组和基因型G/T组(P<0.05),基因型G/T组的理解记忆分高于基因型T/T组(P<0.05);三种基因型患者的联想分、经历分、顺数字广度分、倒数字广度分和总数字广度分之间比较差异没有统计学意义(P>0.05)。精神障碍患者中,基因型T/T组、基因型G/G组和基因型G/T组P300各位点的波幅和潜伏期之间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在Fz点,精神障碍组N1、N2和P2的潜伏期均高于对照组(P<0.05),精神障碍组和对照组N1、N2和P2的波幅之间比较差异无统计学意义(P>0.05),精神障碍组P3的波幅和潜伏期与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);在Pz点,精神障碍组N2、P2和P3的潜伏期均高于对照组(P<0.05),精神障碍组和对照组N2、P2和P3的波幅之间比较差异无统计学意义(P>0.05),精神障碍组N1的波幅和潜伏期与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论神经调节素1基因多态性和老年精神障碍患者的韦氏记忆量表评分及P300结果相关,神经调节素1基因对老年精神障碍患者的认知功能有一定影响。

神经调节素1、甲基乙二醛、高迁移率族蛋白B1联合检测在糖尿病周围神经病变中诊断价值的研究

目的探讨神经调节素1(NRG1)、甲基乙二醛(MG)、高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)联合检测在糖尿病周围神经病变(DPN)中的诊断价值。方法选取2019年1月至2020年12月于苏州大学附属第一医院内分泌科住院治疗的T2DM患者240例,分为单纯T2DM组(n=108)及合并DPN组(DPN,n=132),比较两组一般资料及生化指标。结果DPN组血清NRG1、MG及HMGB1高于T2DM组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,多伦多临床神经病变评分与血清NRG1、MG及HMGB1呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析显示,NRG1、MG及HMGB1是DPN的危险因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,NRG1、MG及HMGB1联合检测DPN的敏感度、特异度和ROC曲线下面积均高于单独检测(P<0.05)。结论血清NRG1、MG及HMGB1与DPN严重程度相关,联合检测对DPN的诊断价值优于单独检测。

神经调节素1β对脑缺血再灌注损伤ERK5信号通路的调节机制研究

目的探讨神经调节素1β（NRG1β）对脑缺血再灌注损伤后细胞外信号调节激酶5（ERK5）信号通路的调节机制。方法Wistar雄性大鼠50只按照随机数字表法分为假手术组、模型组、治疗组、抑制剂组、抑制剂＋治疗组，每组10只。应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型，经颈内动脉注射5μL（2μg／kg）NRG1β干预治疗，抑制剂BIX02189于缺血前经颈内动脉注入。采用改良神经功能缺损评分（mNSS）评价大鼠神经功能，采用TUNEL法检测神经细胞凋亡，采用免疫组化染色和Western blotting检测缺血脑组织磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶激酶5（MEKK5）、ERK5、肌细胞增强因子2C（MEF2C）表达。结果模型组大鼠表现出神经功能障碍，神经细胞凋亡增多，pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达代偿性增强，较假手术组差异均有统计学意义（P〈0．05）。治疗组大鼠pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达进一步增强，神经细胞凋亡明显减少，神经功能改善，与模型组和抑制剂＋治疗组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。抑制剂组细胞凋亡增多，pMEKK5、pERK5、pMEF2C蛋白表达显著下降，与模型组和抑制剂＋治疗组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论NRG1β可以通过激活MEKK5-ERK5-MEF2C信号通路，进一步上调pMEKK5、pERK5、pMEF2C表达而抑制脑缺血再灌注损伤引起的炎症反应以及神经细胞凋亡，从而发挥神经保护作用。

精神分裂症患者外周血中神经调节素1基因mRNA的表达变化的验证性研究

目的检测首发精神分裂症患者外周血淋巴细胞中神经调节素1（neuregulin-1，NRGl）基因mRNA表达水平及其在治疗后的变化，分析该基因的表达和精神分裂症之间的关联。方法首发精神分裂症患者80例，予以利培酮和奎硫平治疗4周。其中37例患者同时纳入其未患病的同胞作为对照，另招募无血缘关系的健康对照83人。应用半定量逆转录-PCR法测定对照组及病例组治疗前后外周血NRGImRNA的表达水平，阴性阳性症状量表评定症状严重程度及临床疗效。结果患者组治疗前NRGlmRNA水平低于同胞组和非同胞对照组，差异具有统计学意义（F=73．004，P=0．000），同胞组与非同胞对照组之间差异无统计学意义。从治疗第2周开始，NRGlmRNA表达开始高于治疗前，且逐渐增强，差异有统计学意义（F=29．433，P=0．000）；服药前PANSS总分与NRG1mRNA表达水平负相关（r=-．232，P=0．038），4周后PANSS减分率与NRG1mRNA的变化呈正相关（r=0．270，P=0．016）。结论NRG1mRNA的表达与精神分裂症存在关联，表达减少可能在一定程度上增加精神分裂症的易感性。抗精神病药物可以增强其表达。

神经调节素1对铅中毒小鼠脑前额叶皮层细胞凋亡的影响

目的研究神经调节素1(neuregulin1,NRG1)对铅中毒小鼠脑内细胞凋亡的影响。方法选择60只健康4月龄SPF级C57bl/6雄性小鼠采用腹腔注射方式染毒乙酸铅(30 mg/kg),隔日注射1次,共注射7次。铅中毒模型建立后,将小鼠随机分成6组,分别为对照组和低(20 ng/kg)、中(50 ng/kg)、高(100 ng/kg)剂量NRG1处理组及NRG1(50 ng/kg)+Wortmannin(PI3K抑制剂,0.01 nmol)组、NRG1(50 ng/kg)+Wortmannin(0.05 nmol)组,其中,NRG1采用腹腔注射方式染毒,连续染毒14 d;Wortmannin在NRG1处理的第1天采用右侧脑室一次性注射染毒。检测小鼠前额叶皮层ErbB4和Bax的表达变化、DNA凋亡情况及p-Akt蛋白的表达情况。结果与对照组相比,NRG1处理组的ErbB4阳性细胞计数和荧光强度、p-Akt表达水平增高,而Bax细胞数和DNA碎片表达减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与50 ng/kg NRG1处理组相比,NRG1+Wortmannin组小鼠前额叶皮层ErbB4细胞数和荧光强度、p-Akt蛋白表达明显减少,Bax细胞数和DNA碎片增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 NRG1可通过上调ErbB4和p-Akt的表达,拮抗铅中毒引起的小鼠前额叶皮层细胞凋亡。

神经调节素1基因与103例精神分裂症患者相关性

目的:探讨神经调节素1(NRG1)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法:利用基于适配器连接介导的等位基因特异性扩增法,对精神分裂症易感基因NRG1进行多重SNP分析。选择NRG1基因中的rs2919391,rs2954041,rs2919392,rs7838692,rs2919394和rs2919393共六个SNP位点,检测了101个正常人样本和103个精神分裂症患者样本。结果:分析的5个SNP位点基因频率与基因型分布在正常人与精神分裂症患者之间未显示显著差异。结论:5个研究的SNP位点显示NRG1基因与所研究的精神分裂症患者不存在相关性。

神经调节素1β对脑缺血再灌注后神经元损伤的保护机制

目的探讨神经调节素1β（NRG-1β）在MCAO/R后通过抑制c-Jun磷酸化从而保护神经元的机制及意义。方法采用改良Longa法制备大鼠脑缺血2 h再灌注24 h模型，改良神经功能缺损评分（mNSS）评价神经行为功能，TTC染色测量梗死体积，伊文思蓝法检测血脑屏障（BBB），尼氏染色检测神经元形态，透射电镜检测神经元的超微结构，TUNEL及NeuN双染色检测神经元凋亡，免疫荧光双标及Western印迹检测phospho-c-Jun的蛋白定位、定量及共表达。 结果与假手术组相比，大鼠MCAO/R后mNSS评分升高[（9.7±1.2）分]，梗死体积增大（41.4±3.0）%，BBB的完整性破坏，神经元形态结构异常，神经元凋亡细胞数增多（0.63±0.04），神经元phospho-c-Jun蛋白表达增强（0.90±0.07）（P〈0.05）。NRG1β处理后可改善大鼠神经行为功能[（6.4±0.9）分]，减少脑梗死体积[（10.4±0.5）%]，降低伊文思蓝渗透率（1.55±0.13），减轻神经元的异常形态结构，降低神经元凋亡细胞数（0.23±0.02），抑制神经元c-Jun的磷酸化（0.40±0.03）（P〈0.05）。结论NRG1β在对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用机制可能与抑制c-Jun的磷酸化有关。

神经调节素β1对P3大鼠缺氧性脑白质损伤的保护作用

目的：探讨神经调节素β1（NRG β1）对新生鼠脑白质损伤的保护作用。方法：P3大鼠被随机分成假手术组，缺氧缺血组和NRG β1治疗组。观察各组大鼠生长发育和神经学行为变化包括体质量变化，睁眼时间，悬崖回避反应时间，双前肢悬挂时间。取各组P7、 P14和P21大鼠脑室周围白质，应用免疫印迹法比较分析各组大鼠脑室周围白质髓鞘碱性蛋白（MBP）合成情况。结果：而NRGβ1组相应日龄MBP的表达与假手术组相比均有恢复。NRG β1组大鼠生长发育得以改善（体质量增加，睁眼时间提早），悬崖回避反应时间也缩短，但双前肢悬挂能力无明显改善。结论：NRG β1可以促进缺氧损伤的P3大鼠脑白质髓鞘合成，并使大鼠部分神经行为功能得以不同程度恢复。

神经调节素-1β对大鼠脑局灶性缺血再灌注后白质损伤的保护作用

目的:研究神经调节素-1β(NRG-1β)对大鼠脑局灶性缺血再灌注脑白质损伤的保护作用.方法:SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组即MACO/A组和NRG-1β干预组.H-E染色观察脑白质组织病理学病变;透射电镜观察少突胶质细胞和髓鞘的改变.应用酶联免疫法(ELISA)检测脑白质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫组织化学显色检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达;原位切口末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞的数目.结果:与假手术组相比,缺血再灌注组缺血侧脑白质囊性变,大量炎症细胞浸润,电镜下可见脱髓鞘改变.MBP阳性分布减少,TNF-α含量增高,凋亡细胞增多与假手术组相比差异均有统计学意义.NRG-1β干预组与缺血再灌注组相比,H-E染色显示缺血侧脑白质囊性变减少,炎症细胞浸润减少,电镜下脱髓鞘改变减少.MBP阳性分布有增多,TNF-α含量减少,凋亡细胞减少差异均有统计学意义.结论:大脑中动脉缺血再灌注可对脑白质造成显著损伤.侧脑室注射NRG-1β干预治疗对脑缺血再灌注后的脑白质具有保护作用,其机制与抑制炎症反应、减少胶质细胞凋亡和髓鞘破坏相关.

神经调节素1基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症及认知功能的关联研究

目的探讨神经调节素1（NRG1）基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症及认知功能的关系。方法选取70例精神病患者作为观察组，70例健康者作为对照组，检测NRG1基因SNPrs2954041多态性，并对患者的认知功能和神经软体征评分进行评估。结果两组SNPrs2954041多态性基因型和等位基因频率比较差异均有统计学意义（Х^2=35．412、29．341，均P=0．000）。男性患者组与男性对照组之间基因型和等位基因频率的差异有统计学意义（Х^2=24．571、18．391，均P=0．000）。而女性组间的上述结果比较差异也有统计学意义（Х^2==14．145、13．024，均P=0．000）；三组在理解记忆方面差异有统计学意义（F=3．781，P=0．031），三组在数字广度、正确数、错误数、持续错误数、非持续错误数等方面比较差异均无统计学意义（F=0．702、0．125、0．089、0．692、0．113，P=0．498、0．882、0．927、0．512、0．748）。精神分裂症组T／T基因型[（6．79±0．55）分]、T／G基因型[（6．88±0．51）分]和G／G基因型[（6．53±0．39）分]之间神经软体征评分比较差异无统计学意义（F=0．142，P=0．843）。结论NRG1基因SNPrs2954041多态性与精神分裂症存在关联，与精神分裂症患者的认知功能相关。

TrkB表达变化参与神经调节素-1β对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制

目的探讨实验性大鼠脑组织受体型酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)表达变化在神经调节素-1β(NRG-1β)对大鼠脑缺血再灌注损伤保护过程中的作用。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、NRG-1β给药组低(0.25 mg/kg)、中(0.5 mg/kg)、高剂量组(1 mg/kg),共5组。缺血1 h再灌注24 h后进行神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量的测定;生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)含量;脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR检测TrkB mRNA表达。结果与模型组比较,NRG-1β能剂量依赖性降低脑缺血再灌注损伤引起的脑梗死体积(P<0.05,P<0.01,P<0.001)和脑含水量(P<0.05,P<0.01)的增加;降低血清LDH(P<0.05,P<0.01)和CK(P<0.05,P<0.01)含量;增加脑组织SOD含量(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.05,P<0.05,P<0.01);增加TrkB mRNA的表达。结论神经调节素-1β对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有作用,其机制可能与上调TrkB表达有关。

神经调节素-1在神经损伤修复中的作用机制及研究现状

神经损伤是临床中的常见及多发疾病,可分为周围神经损伤(peripheral nervous injury,PNI)和中枢神经损伤(central nervous injury,CNI),目前采取的治疗方法主要有自体神经移植、异体神经移植、细胞促进疗法、组织工程法等。相比于其他三种方法,组织工程法的发展将从根本上解决组织和器官缺损所致的功能障碍或丧失治疗等问题,以达到完美的形态修复。神经调节素-1(neuregulin-1,NRG-1)作为一种经典的生长和分化因子,应用到组织工程上可以抑制细胞衰老、促进细胞增殖和分化,并且能够通过相关信号通路促进PNI和CNI后的神经修复。本文主要说明NRG-1的结构、功能及其在PNI与CNI修复中发挥的作用及作用机制。

神经调节素受体降解蛋白1的研究进展

泛素化是体内蛋白质降解的重要方式。泛素连接酶是泛素化过程中的关键酶。神经调节素受体降解蛋白1(Nrdp1)是一种新的泛素连接酶,具有泛素连接酶活性,Nrdp1可以通过泛素化降解或激活底物分子来发挥生物学功能。近年来发现Nrdp1通过降解Erb B3调节细胞增殖,与凋亡抑制蛋白相互作用介导细胞凋亡,通过泛素化降解髓样分化因子和激活干扰素调节因子抵抗炎症反应,且研究发现Nrdp1与肿瘤、中枢神经系统疾病、造血系统疾病和心血管系统疾病等的发生、发展密切相关。

神经调节素受体降解蛋白1调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响

目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞为M1型巨噬细胞(简称M1)和M2型巨噬细胞(简称M2);流式细胞仪、Western blot分别检测M1表面标记蛋白CD11c、特异性分泌物——诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxide synthase, iNOS)及M2表面标记蛋白CD206、特异性分泌物——精氨酸酶1(arginine1,Arg1)的表达。转染siRNA-Nrdp1 24 h, Western blot检测Nrdp1表达;建立巨噬细胞与成纤维细胞的Transwell共培养体系,按添加的诱导剂不同,分为LPS组(LPS及IFN-γ共同诱导)、LPS-NC组(siRNA阴性Nrdp1无关序列对照组)、LPS-siRNA-Nrdp1组(转染siRNA-Nrdp1质粒)及对应的IL-13组、IL-13-NC组、IL-13-siRNA-Nrdp1组;培养8、12、24 h, CCK-8检测成纤维细胞增殖情况,ELISA检测转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、Ⅰ型前胶原含量。对数据行析因设计方差分析、Bonferroni法检验。结果 LPS诱导的巨噬细胞中,M1表面标记蛋白CD11c阳性细胞比例显著高于对照组(P<0.05);IL-13诱导的巨噬细胞中,M2表面标记蛋白CD206阳性细胞比例显著高于未诱导组(P<0.05);LPS组M1特异性分泌物iNOS表达量显著高于对照组(P<0.01)及IL-13组(P<0.01);IL-13组M2型特异性分泌物Arg1显著高于对照组及LPS组(P<0.01)。siRNA-Nrdp1干扰巨噬细胞24 h后,Western blot检测结果显示,干扰组(siRNA-Nrdp1组)Nrdp1的蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.01)及阴性对照组(P<0.01)。共培养24 h后,CCK-8检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组成纤维细胞增殖数量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01);ELISA检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组TGF-β1含量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01),IL-13-siRNA-Nrdp1组Ⅰ型前胶原含量明显低于IL-13组(P<0.01)。结论通过siRNA干扰Nrdp1合成,影响巨噬细胞向M2型极化,可抑制M2型巨噬细胞与成纤维细胞共培养体系中成纤维细胞的增殖,减少共培养体系中成纤维细胞TGF-β1及Ⅰ型前胶原的分泌。

阿格列汀通过调控神经调节素-1促进糖尿病性心肌病大鼠心肌血管生成和微血管灌注的实验研究

目的探讨阿格列汀通过调控神经调节素-1促进糖尿病性心肌病大鼠心肌血管生成和微血管灌注的机制。方法实验大鼠分为3组,分别为对照组(n=10)、DCM组(n=10)和阿格列汀治疗组(n=10)。对照组大鼠注射等体积的0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液。DCM组和阿格列汀治疗组通过单次腹膜内注射STZ(55 mg/kg溶于0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液,pH 4.5)诱导糖尿病。DCM组造模成功后,给予0.1 mmol/L柠檬酸盐缓冲液注射。阿格列汀治疗组造模成功后,尾静脉注射阿格列汀,剂量为10μg·kg^(-1)·d^(-1),连续10 d。使用导管MPA心功能分析系统评估心功能,用稳定同位素标记的微球评估心肌血流量,通过CD31免疫组织化学测量毛细血管密度。体外实验中,离体培养人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMCs),分为4组,包括对照组、hypo/SD组、阿格列汀处理组(hypo/SD+阿格列汀)和AG1478组(hypo/SD+阿格列汀+AG1478)。使用蛋白质印迹评估蛋白质表达和受体磷酸化。结果与对照组相比,DCM组大鼠的左心室功能、毛细血管密度和心肌血流量(MBF)明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与DCM组相比,阿格列汀治疗组大鼠的左心室功能和毛细血管密度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,DCM组大鼠的神经调节蛋白-1(NRG-1)的表达水平以及ErbB2、ErbB3的磷酸化水平均升高,血管内皮生长因子(VEGF)表达和Flk1磷酸化、血管生成素-1(Ang-1)、Tie-2磷酸化蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与DCM组相比,阿格列汀治疗组大鼠的NRG-1的表达水平以及ErbB2、ErbB3的磷酸化水平均降低,VEGF表达和Flk1磷酸化、Ang-1、Tie-2磷酸化蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在体外,与对照组相比,Hypo/SD组、阿格列汀组HCASMCs中VEGF和Ang-1的表达显著升高,而与阿格列汀组相比,AG1478组HCASMCs中VEGF和Ang-1的表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿格列汀可以提高神经调节蛋白-1(NRG-1)的表达水平,增加DCM心肌血管生成,可能是通过NRG-1的直接作用和增加VEGF和Ang-1的表达。这些发现可能有助于开发一种新方法来逆转糖尿病或冠状动脉疾病中受损的血管生成反应。