神经调节素B受体激动剂对孕鼠孕龄的影响及机制

目的观察神经调节素B受体激动剂(NMBR)对孕鼠孕龄的影响并探讨其影响机制。方法建立孕龄准确的孕鼠模型,随机分组,每组10只。妊娠18 d 2、6:00 pm分别腹腔注射NMB(30、90、150μg.kg-1)、缩宫素(50 mIU.kg-1)及等体积的溶剂,连续2 d,观察孕鼠孕龄及分娩间隔。妊娠18 d 6、8、10、12:00 am分别给予上述处理,末次给药后4 h取孕鼠子宫平滑肌组织,用NoShift转录因子分析法检测NF-κB P65的DNA结合活性,用半定量RT-PCR和Westernblot检测HSP70及IL-6 mRNA和蛋白表达。结果150μg.kg-1NMBR组孕龄明显短于对照组和低剂量组(P<0.05);且NF-κB P65 DNA结合活性、HSP70及IL-6 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论NMBR激动剂可能通过子宫平滑肌NF-κB P65—HSP70/IL-6通路缩短孕鼠的孕龄。

NMBR在不同妊娠阶段小鼠子宫平滑肌细胞中的表达及其与临产的关系

目的:探讨神经调节素B受体(neuromedin B receptor,NMBR)在妊娠小鼠子宫平滑肌细胞中mRNA、蛋白时空表达的变化及其与分娩启动的关系和机制。方法:按妊娠阶段的不同,将小鼠分为未孕组、早孕组、中孕组、晚孕组、产时组和产后组,每组12例。应用半定量RT-PCR和Western免疫印迹技术分别检测子宫平滑肌中NMBR,IL-6和HSP70mRNA及蛋白表达;利用NoShift转录因子分析法检测NF-κB-P65的DNA结合活性,并分析各指标与分娩的关系及其相关性。结果:产时组NMBRmRNA的相对表达量显著高于未孕、早孕、晚孕、产后组(P<0.05),但与中孕组相比差异无统计学意义(P>0.05);产时组NMBR蛋白表达量显著高于其它各组(P<0.01)。NF-κB-P65DNA结合活性产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05)。IL-6mRNA表达产时组显著高于未孕、晚孕和产后组(P<0.05),其蛋白表达产时组亦显著高于未孕和产后组(P<0.05)。HSP70mRNA表达量产时组显著高于未孕和产后组(P<0.05),HSP70蛋白的表达量产时组明显高于晚孕、未孕组(P<0.05)。临产前后子宫平滑肌细胞P65DNA结合活性、IL-6mRNA的表达均与NMBRmRNA的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.30,P<0.05);P65,HSP70mRNA的变化亦与NMBR的变化呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.49,P<0.01);但HSP70与P65无相关性。结论:子宫平滑肌细胞中NMBRmRNA和蛋白表达在临产时达最高峰。NMBR可借助NF-κB P65-IL-6通路、通过调节HSP70表达参与分娩发动和维持,但其对HSP70表达的影响不依赖P65途径。

应用cDNA微阵列筛选子宫平滑肌细胞收缩相关药物靶点

目的:筛选临产活跃期子宫体部平滑肌差异基因表达谱,为子宫收缩相关药物靶点的选择提供候选基因。方法:应用8064条人类全长基因的cDNA表达谱芯片,分别筛选自然临产前后、缩宫素诱导临产前后和自然临产子宫体部与下段平滑肌的差异基因表达谱;用RT-PCR技术验证电压依赖性钙离子通道-L(voltage dependent calcium channel-L subtype,CACNA)的表达。通过生物信息学技术筛选具有药物靶点结构和功能的差异表达基因,作为子宫收缩相关药物候选的靶点。结果:在自然临产前后、缩宫素诱导临产前后及自然临产后体部与下段的子宫平滑肌中,筛选出29条显著上调的基因。CACNA基因表达在RT-PCR与芯片实验中结果一致。在显著上调的29条基因中,神经调节素B受体(neuromedin B receptor,NMBR)基因和神经肽Y(neupeptide Y,NPY)基因是具有宫缩相关药物靶点结构和功能的2种基因。在上述3种对比状态的子宫平滑肌细胞中,NMBR和NPY差异表达的比值分别为6.9,11.3,9.0和6.0,29.8,2.9。结论:不同临产状态的子宫平滑肌细胞共同表达上调的NMBR,可能是理想的、子宫收缩相关药物的候选靶点。