中重度颅脑损伤患者脑脊液中可溶性神经趋化蛋白含量的变化及临床意义

目的探讨中、重度颅脑损伤患者脑脊液中可溶性神经趋化蛋白（sFkn）含量变化及与预后的相关性。方法采用前瞻性研究方法，选择本院收治的30例中、重度颅脑损伤患者，按格拉斯哥昏迷评分（GCS）分为重度组（GCS3～8分，11例）和中度组（GCS9。12分，19例）；按格拉斯哥预后评分（GOS）分为预后良好组（Ⅳ～Ⅴ级，23例）和预后不良组（Ⅰ～Ⅲ级，7例）。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测伤后1、3、10d患者脑脊液中sFkn含量。结果在颅脑损伤中度、重度组及预后良好和不良组，脑脊液sFkn含量均随损伤时间的延长逐渐下降，伤后10d降至最低水平，与1d和3d比较差异有统计学意义。重度组各时间点脑脊液sFkn含量（ng／L）均较中度组明显升高（1d：676．35±205．95比454．25±297．67，3d：573．11±295．38比403．90±175．04，10d：359．37±186．07比103．62±78．33，均P〈0．05）；预后不良组各时间点脑脊液sFkn含量均较预后良好组明显升高（1d：702．41±276．80比585．34±217．26，3d：697．58±164．41比431．23±220．70，10d：563．27±225．71比166．54±80．97，P〈0．05或P〈0．01）；尤以伤后10d差异较大（均P〈0．01）。结论sFkn作为前炎症因子参与了颅脑损伤的病理生理过程，脑脊液sFkn含量与颅脑损伤严重程度及患者预后密切相关，可以作为创伤后炎症反应的标志物。

周围神经趋化性再生的细胞和分子生物学机制

周围神经损伤的治疗是临床上的难题。以往研究主要集中在神经损伤后断端缺损的桥接修复和提高神经的再生速度,但实际上功能的恢复更取决于再生轴索能否精确地长入原先支配的靶器官。因此,充分理解神经趋化性再生的细胞和分子生物学基础,在治疗中运用神经再生趋化性理论,对促进神经功能恢复具有重要的意义。本文就周围神经再生趋化性理论及其细胞和分子生物学机制的研究进展作一综述。

哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞神经趋化及气管平滑肌毒蕈碱受体、主要碱性蛋白的异常表达

目的:研究哮喘豚鼠气管平滑肌毒蕈碱受体(MR)mRNA及嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白(major basic protein,MBP)mRNA的表达及嗜酸性粒细胞(Eos)向迷走神经的趋化作用。方法:20只健康豚鼠随机分为正常组和哮喘组。哮喘组制作成哮喘豚鼠模型,再激发用药。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)的细胞总数及细胞分类,观察肺组织的病理改变,乙酰胆碱酯酶及HE染色观察Eos神经趋化情况,进行气管平滑肌的M2R mRNA、M3RmRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析。结果:两组BALF的Eos计数,哮喘组[(29.2±7.3)%]与正常组[(2.8±3.0)%]比较差异有显著性(P<0.01)。哮喘组肺组织充血水肿明显,Eos肺组织浸润较正常组明显,Eos具有明显的神经趋化现象。气管平滑肌的MR mRNA、MBP mRNART-PCR半定量分析显示,M2RmRNA,哮喘组(1.26±0.24)与正常组(0.50±0.16)比较差异有显著性(P<0.01);M3R mRNA,哮喘组(0.12±0.055)与正常组(0.42±0.062)比较差异有显著性(P<0.01);MBP mRNA,哮喘组(1.46±0.208)与正常组(0.25±0.089)比较差异有显著性(P<0.01)。结论:哮喘豚鼠Eos具有迷走神经趋化现象,M2R表达增加,M3R表达减少,MBP表达增加。

脊髓背根神经节切除模型——周围神经趋化性再生定量研究模型的建立

为了建立脊髓背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)切除模型,选择性地使感觉神经纤维溃变而保持运动神经纤维的正常功能,从而为周围神经趋化性再生的定量评价提供有效的研究方法。将雄性SD大鼠20只,随机分为两组,每组10只动物。大体解剖组:解剖大鼠坐骨神经的神经根组成及DRG的位置。DRG切除组:切除支配大鼠坐骨神经的每个神经根的DRG。观察大鼠DRG切除后步态变化及足部溃疡情况。切除后3周,取双侧坐骨神经、胫神经、腓神经及腓肠神经行髓鞘染色,观察各神经中感觉神经纤维溃变情况;行美兰复红染色,计算机图像分析,运动神经纤维计数。发现大鼠坐骨神经由L4、L5、L6神经干组成,DRG位于腹、背侧根汇合处近心端1mm处。DRG切除术后,大鼠步态失去协调性,但展趾宽度无明显改变。DRG切除后3周,髓鞘染色显示腓肠神经中有髓神经纤维髓鞘完全溃变,坐骨神经、胫神经、腓神经中部分有髓神经纤维发生溃变。美兰复红染色、计算机图像分析计数显示坐骨神经及三个主要分支内,有髓运动神经纤维分别占其总数的58.4%、54.6%、45.4%、0。说明DRG切除模型,可以有效区分感觉和运动神经纤维,能够较好地定量评价周围神经趋化性再生的效果。通过比较不同桥接材料和不同修复方法的错接率,从而定量评价各修复材料和方法的趋化性再生效果。

周围神经趋化性再生及临床应用研究进展

一般认为,周围神经趋化性再生具有组织特异性、解剖部位特异性和终末器官特异性。近期研究显示,周围神经再生缺乏解剖部位特异性,其终末器官特异性也存在争议。神经趋化性再生受到神经断端间距、远端神经体积大小、营养支持及远端神经结构等多因素的影响。神经营养因子与细胞外基质蛋白相互作用、轴突表面识别分子及神经元表型特异性等,可能是趋化性再生的机制。研究证实,神经营养因子能促进周围神经趋化性再生;小间隙桥接技术充分发挥了再生神经的趋化性,是周围神经修复的有效方法;神经导管,尤其是聚羟基乙酸导管可提供适合神经生长的"微环境",有利于组织工程学方法的介入,在临床修复神经长段缺损中具有确切的优势。这些新技术使周围神经的修复提高到一个新水平,促进了神经功能的恢复。

周围神经趋化性再生的研究进展

长期以来，周围神经损伤的治疗是临床上的难题，始终困扰着医务工作者。神经损伤后功能恢复的结果取决于断端缺损是否较好地桥接修复、神经再生速度的快慢及再生轴索是否精确地长入原先支配的靶器官或功能相关的组织。随着显微外科学、材料学及分子生物学的发展，在神经缺损的桥接吻合及促进神经的再生方面取得了一定的进展，但神经功能恢复的效果仍然不理想。原因是再生的神经未能准确地、选择性地再支配靶组织（运动终板和感觉神经末梢），即错向生长，感觉神经错向长入运动支的神经内膜管，运动神经错向长入感觉支的神经内膜管，神经错生长入瘢痕组织形成神经瘤。近年来，越来越多的国内外学者开始注重研究神经再生的定向趋化现象（及神经趋化性），充分理解神经再生趋化性形成的原因和机制，治疗中运用神经再生趋化性理论，这对于促进神经功能恢复具有重要的意义。本文就周围神经再生趋化性理论研究进展作一综述。

化学去细胞异体神经移植促神经趋化性再生实验研究

目的化学去细胞异体神经具有与正常神经相似的物理和生化特性,是周围神经缺损修复的较好神经移植替代物。进一步探讨化学去细胞异体神经的促神经趋化性再生作用。方法健康成年SD大鼠5只,雌雄不限,体重270～300g,用于制备化学去细胞异体神经;健康成年Wistar大鼠18只,雌雄不限,体重300～320g,用于神经移植动物实验。将Wistar大鼠随机分为实验组和对照组(n=9),制备大鼠左侧坐骨神经缺损(10mm)模型,实验组以化学去细胞异体神经与神经断端吻合,对照组将自体神经近、远端翻转后吻合。神经移植后3个月,各组3只实验动物取腓肠神经行乙酰胆碱酯酶和碳酸酐酶染色观察;各组其余6只实验动物行脊髓背根神经节切除术,术后3周取腓肠神经行病理染色,病理切片行神经纤维计数,并计算错接率。结果乙酰胆碱酯酶及碳酸酐酶染色观察显示,实验组腓肠神经乙酰胆碱酯酶染色棕色颗粒较对照组少,碳酸酐酶染色黑色颗粒较对照组多。脊髓背根神经节切除定量评价:实验组神经纤维计数为4257±285,对照组为4494±310;实验组及对照组腓肠神经运动纤维错接率分别为2.27%±0.28%和7.65%±0.68%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化学去细胞异体神经移植物不仅在桥接修复神经缺损中起到支架、支撑作用,还具有明显的促神经趋化性再生作用。

高危型孕妇血清sFkn、CXCL12水平与妊娠糖尿病、围生结局的关系

目的探讨高危型孕妇血清神经趋化蛋白(sFkn)、CXC趋化因子配体12(CXCL12)水平与妊娠糖尿病(GDM)、围生结局的关系。方法将2019年6月至2022年6月于该院孕检及生产的235例高危型孕妇纳入研究作为研究组,随访并记录纳入研究者是否发生GDM及其围生结局。另外,选取同期于该院体检的230例无高危因素的健康孕妇作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测纳入研究者血清sFkn、CXCL12水平。采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清sFkn、CXCL12水平对高危型孕妇围生结局的预测价值。采用单因素分析和多因素Logistic回归分析高危型孕妇围生结局的影响因素。结果研究组血清sFkn、CXCL12水平高于对照组(P<0.05)。235例高危型孕妇在妊娠期发生GDM 49例(20.85%),出现不良围生结局34例(14.47%)。GDM组血清sFkn、CXCL12水平高于单纯高危组(P<0.05)。不良围生结局组血清sFkn、CXCL12水平高于正常围生结局组(P<0.05)。血清sFkn、CXCL12预测高危型孕妇患者围生结局的曲线下面积(AUC)分别为0.761(0.716~0.814)、0.839(0.796~0.889),两者联合预测的AUC为0.905(0.855~0.948)。不良围生结局组孕前体重指数(BMI)、孕次、产次及有糖尿病家族史、高血压家族史、GDM者比例高于正常围生结局组(P<0.05),孕期饮食调整者比例低于正常围生结局组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示:孕前BMI≥28.0 kg/m^(2)(OR=3.604,95%CI:1.561~8.322)、GDM(OR=4.384,95%CI:1.668~11.522)、sFkn≥5.63 ng/mL(OR=4.707,95%CI:1.809~12.249)、CXCL12≥12.67 ng/mL(OR=5.217,95%CI:2.061~13.211)是高危型孕妇围生结局的影响因素(P<0.05)。结论高危型孕妇血清sFkn、CXCL12水平与GDM密切相关,并且对高危型孕妇者围生结局具有一定预测价值。

导管修复神经损伤的运用及进展

修复神经损伤的传统方法是神经端端吻合或神经移植，但是神经恢复效果有限，而且存在着供区功能障碍等缺陷，自从Lundborg等利用神经再生室模型证实神经趋化特异性，神经导管神经损伤的优势逐渐为人们所认识和接受。同时许多年来，神经导管一直是人们研究的热点，所实验的材料包括自体材料和人工合成材料，其中人工合成的可吸收材料，代表了今后发展的方向。此外人们也一直在研究改变导管内的生物环境，包括基质，细胞，神经营养因子以促进神经的再生，以及构建组织工程化人工神经。这些研究的目的是改进导管修复周围神经中还存在的一些不足，以提高周围神经损伤修复的疗效。

大鼠膈神经异化支配迷走神经的Y管实验研究

目的探讨大鼠膈神经经Y形管长入迷走神经的异化再生特征及神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对其再生的影响。方法 SD大鼠20只,颈部建立膈神经-迷走神经"Y形再生室"异化神经模型(硅胶Y管近端接膈神经近端,远端接迷走神经和膈神经远端),随机分成2组,A组(对照组)10只,术后腹腔注射生理盐水,B组(NGF组)10只,术后腹腔注射NGF,连续2周。术后12周电刺激检测大鼠的心脏功能,对再生神经进行组织学观察。结果电刺激再生异化神经后,B组大鼠动脉血压及心率的下降幅度均大于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组再生异化神经和膈神经有髓纤维数目、通过率、髓鞘厚度和轴突直径均大于A组,差异有统计学意义(P<0.05);同组两侧比较,再生有髓神经数目和通过率为异化神经侧多,髓鞘厚度和轴突直径为膈神经侧大,差异有统计学意义(P<0.05)。结论异化神经具有成熟髓鞘结构及靶器官支配功能,在性质上属于躯体运动神经;NGF能够促进异化神经生长并提高其支配效能;再生神经无明显解剖部位趋化性,长入远端神经干粗大侧(迷走神经)有数量优势,长入躯体运动神经侧(膈神经)有质量优势。

病毒性脑炎儿童脑脊液及血清sFkn、sICAM-1及IL-6水平表达及意义

目的探讨病毒性脑炎(VE)儿童脑脊液及血清神经趋化蛋白(sFkn)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平表达及意义。方法选取2019年1月至2020年12月在本院诊治的88例VE患儿为观察组,另外选取同期在本院行腰麻外科手术的非病毒性脑膜炎患儿44例为对照组。根据观察组病情严重程度分为轻症组(52例)与重症组(36例),分别检测观察组与对照组脑脊液和血清sFkn、sICAM-1及IL-6水平,采用Pearson相关性分析sFkn、sICAM-1及IL-6水平与病情程度的关系,电话随访半年记录观察组后遗症发生情况,采用受试者工作特征曲线(ROC)评价sFkn、sICAM-1及IL-6水平对后遗症发生的预测价值。结果观察组血清和脑脊液中sFkn、sICAM-1及IL-6水平均显著高于对照组(P<0.05),且重症组显著高于轻症组(P<0.05),Spearman相关性分析显示血清和脑脊液sFkn、sICAM-1及IL-6水平与VE的病情程度均呈正相关(P<0.05);后遗症组血清和脑脊液中sFkn、sICAM-1及IL-6水平均显著高于无后遗症组(P<0.05);ROC曲线分析,sFkn、sICAM-1及IL-6曲线下面积AUC分别为0.794、0.806、0.787(血清),0.825、0.729、0.804(脑脊液)(P<0.05)。结论VE患儿血清及脑脊液sFkn、sICAM-1及IL-6水平与病情严重程度呈正相关,且对后遗症的发生有较好的预测价值。

神经端侧缝合后趋化性的神经元逆行示踪研究

目的应用神经元荧光逆行示踪技术探讨外周神经端侧缝合后神经再生的趋化性问题。方法选用雌性SD大鼠40只，随机分为4组，端侧缝合肌皮神经主干标记组、正常肌皮神经主干标记组、端侧缝合肌皮神经肌支标记组和正常肌皮神经肌支标记组，每组10只。端侧缝合的两组切断肌皮神经，尺神经后内侧方外膜开窗，将肌皮神经和开窗的尺神经外膜做端侧缝合．正常对照两组仅显露肌皮神经和尺神经。5个月后采用Fluoro-Gold荧光逆行示踪技术，标记第一、二组肌皮神经主干和第三、四组肌皮神经肌支，精确计数各组大鼠脊髓C5～T1前角和背根神经节神经元。结果在肌皮神经主干标记两组中，端侧组脊髓前角神经元数目占正常组的30．0％（P〈0．01）；背根神经节感觉神经元数目占正常组的28．1％（P〈0．01），运动神经元比例为0．36±0．09，与正常组差异无统计学意义（P〉0．05）。在肌皮神经肌支标记两组中，端侧组脊髓前角神经元数目占正常组的38．1％（P〈0．01），背根神经节感觉神经元数目占正常组的70．2％（P〉0．05），运动神经元比例为0．40±0．14，与正常组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论外周神经端侧缝合后神经侧方出芽对特定靶器官的趋化性不明显。

神经生长因子和再生室收集液对培养神经组织的趋化作用

目的 探讨神经营养因子 (NGF)和再生室收集液体 (RCF)对神经组织的趋化作用。方法 建立毛细管神经组织生长趋化性模型 ,利用毛细管的毛细和缓释作用并造成活性成分的浓度梯度。实验分NGF组、RCF组和空白对照组 ,每组观察 8枚神经节 ,毛细管分别吸取 10 μlNGF、RCF及单纯培养液 ,与鸡胚神经节共同培养 ,观察神经组织的生长方向。结果 组织培养 72h后 ,神经节组织明显向高NGF及RCF浓度方向生长。结论 NGF和RCF对神经组织生长具有趋化作用。

不同年龄大鼠神经再生趋化性差异的研究

目的比较不同年龄大鼠坐骨神经切断后,其神经再生趋化性在组织特异性和解剖特异性水平上的差异。方法大鼠按年龄分幼年和成年组各40只,分别建立组织特异性(幼、成年组各20只)和解剖特异性(幼、成年组各20只)模型,术后3、6周分别采用神经电图、组织学检测神经再生。结果术后3、6周,幼年组在神经传导速度恢复率、神经纤维再生准确率、胫腓神经传导速度比值和波幅比值、远端胫神经侧与腓总神经侧有髓轴索数的比值方面均低于成年组;但复合肌肉动作电位波幅恢复率两组无显著差异。结论幼年大鼠周围神经再生趋化性的组织和解剖特异性较成年差,提示幼年大鼠较易发生主动肌与拮抗肌同步收缩的主要原因在于周围神经的错向生长。

大鼠股神经再生趋化性效果评价

[目的]评价股神经损伤后神经功能的恢复效果,进一步探讨股神经趋化性再生的评价方法。[方法]雄性Wistar大鼠30只,分为对照组、电生理检测组、标记组,每组10只,于右侧股神经分叉上4 mm处行断端吻合术。术后8周,行电生理和组织学检查,并分别用F488和DiI逆行示踪标隐神经和股神经肌支,观测脊髓前角中示踪剂的分布及数目。[结果]实验动物术侧活动受限;术侧运动诱发电位潜伏期:2.16 ms±0.44 ms,波幅:2.01 mv±0.70 mv,与正常侧相比,其潜伏期延长(P<0.05),波幅降低(P<0.05);NF-200染色显示神经断端吻合口连续性良好;标记组脊髓前角中被标记的神经元颜色和数目分别为绿色:80.2±9.6、红色:200.6±17.9、橙色:26.9±4.4,而对照组中仅为红色:726.7±119.0(P<0.05)。[结论]在进行周围神经损伤再生评价时,除了行为学、电生理和组织形态学常规检测外,采用逆行示踪标记神经元计数的方法可以作为趋化性再生效果评价的一个选择。

尿液Fractalkine水平与轻度认知功能障碍相关性研究

目的:探讨轻度认知功能障碍(MCI)患者尿液神经趋化蛋白Fractalkine(Fkn,也称CX3CL1)水平与认知功能的关系,探讨尿液Fkn水平对MCI的诊断价值,为临床MCI提供新的诊断和疾病监测标志物。方法:受试者分MCI组(25例)和年龄与性别匹配的认知功能正常组(对照组,26例),使用酶联免疫吸附法(ELISA)测定MCI患者和对照者尿液Fkn浓度。尿液Fkn水平使用尿液Fkn浓度和尿液肌酐(creatinine,Cr)浓度的比值表示。采用简易精神状态量表(MMSE)、日常生活活动能力量表(ADL)、临床痴呆评定量表(CDR)等量表进行认知功能评分,并分析尿液Fkn水平与认知功能评分的相关性。受试者工作特征曲线(ROC)曲线评价尿液Fkn水平诊断MCI的敏感性和特异性。结果:MCI组患者尿液Fkn平均水平明显低于对照组(0.87±0.59ng Fkn/mg Crvs1.96±1.27ng Fkn/mg Cr,P<0.01)。尿液Fkn水平与MMSE评分(r=0.429,p<0.01)、ADL评分(r=-0.471,p<0.01)和CDR评分(r=-0.450,p<0.01)具有相关性。ROC曲线分析显示尿液Fkn水平诊断MCI的敏感性为57.7%,特异性为88.0%。结论:尿液Fkn水平在MCI患者中表达下降,尿液Fkn与认知功能损害具有相关性。尿液Fkn可以作为检测MCI病情程度和疾病进展的无创性参考指标之一。