枢经推拿对脊髓神经结扎大鼠模型炎症反应及SOCS1、TLR4蛋白表达的影响

目的本研究旨在探讨枢经推拿对神经病理性疼痛(NP)的抑炎镇痛机制。方法30只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、推拿组、假推拿组、假手术组,每组6只。除了正常组不进行处理,假手术组暴露L5神经外,其余3组大鼠采用脊神经结扎(SNL)法建立NP大鼠模型。造模后第1天开始,推拿组给予枢经推拿治疗,假推拿组给予抚摸,持续干预7 d,在造模前1 d及造模后1 d、3 d、7 d检测各组大鼠热痛缩足反应潜伏期(PWL)和机械性刺激缩足反应阈值(PWT)。干预7 d后,采用Western blot检测大鼠脊髓背角中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)表达水平,采用ELISA检测脊髓背角组织白细胞介素6(IL-6)水平。结果造模前1 d,各组大鼠的PWT、PWL没有显著差异(P>0.05);造模后1 d、3 d、7 d,与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的PWT、PWL均降低(P<0.05),且造模后3 d和7 d,与模型组、假推拿组相比,推拿组大鼠的PWT、PWL均升高(P<0.05)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的SOCS1蛋白水平均明显升高(P<0.05);推拿组大鼠与模型组、假推拿组相比,SOCS1水平升高(P<0.05)。与正常组、假手术组相比,假推拿组、推拿组、模型组大鼠的脊髓背角TLR4、NF-κB、IL-6水平明显增加(P<0.05);与模型组相比,推拿组大鼠的TLR4、NF-κB、IL-6水平明显降低(P<0.05)。结论枢经推拿可以改善由SNL诱导的NP,其机制可能与通过上调脊髓背角中SOCS1蛋白表达,负反馈下调TLR4及NF-κB蛋白表达,降低促炎因子IL-6产生有关。

法舒地尔通过抑制NogoA/NgR信号通路减轻H_(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞凋亡并增强突触可塑性

目的探讨法舒地尔(Fasudil)对H(2)O_(2)诱导的SY5Y人神经母细胞瘤细胞凋亡和突触可塑性的影响及其机制。方法细胞分为PBS对照组、250μmol/L H(2)O_(2)处理组和250μmol/L H(2)O_(2)联合15μg/mL Fasudil处理组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,免疫荧光细胞化学染色检测神经突生长抑制因子A(NogoA)、NogoA受体(NgR)和突触小泡蛋白(Syn)的表达,Western blot法检测NogoA、NgR、p75神经营养因子受体(p75NTR)和含富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白结构域的Nogo相互作用蛋白1(LINGO-1)、Syn和突触后致密区蛋白95(PSD-95)的表达。结果与PBS组比较,H(2)O_(2)组细胞活性降低,细胞凋亡率升高,Fasudil处理可显著提高细胞活性,降低细胞凋亡率。与H(2)O_(2)模型组比较,Fasudil处理能使Syn和PSD-95的表达增加。与PBS组比较,H(2)O_(2)组NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达明显增加,而Fasudil处理可以抑制NogoA及其受体复合物NgR/p75NTR/LINGO-1的表达。结论Fasudil可能通过抑制NogoA/NgR信号通路的激活,从而减轻H(2)O_(2)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡以及增强突触的可塑性。

脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-66受体NgR表达的影响

背景:研究发现,脊髓损伤后髓鞘相关抑制分子的产生是影响轴突再生微环境的重要原因。中医药具有多因素、多靶点的优点,正逐步成为改善神经再生微环境的研究热点。目的:探索中药脊髓康对脊髓损伤后Nogo-66受体Ng R表达的影响。方法:144只大鼠随机等分为6组,假手术组、模型组、强的松组、脊髓康高、中、低剂量组,每组24只。后5组以改良Allen’s法建立脊髓损伤动物模型。强的松组大鼠每天给予0.06 g/kg醋酸泼尼松灌胃,1次/d。脊髓康低中高剂量组大鼠每天给予12.5,25,50 g/kg脊髓康灌胃,1次/d。假手术组和模型组大鼠每天给予20 m L生理盐水灌胃,1次/d。各组动物均连续给药至动物处死。结果与结论:与模型组相比,强的松组及脊髓康低中剂量组大鼠脊髓组织中Ng R蛋白及m RNA表达水平均显著降低。提示脊髓康可促进大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复,可有效抑制脊髓损伤区Ng R蛋白的表达,从而抑制不利于神经再生的因素,进一步改善神经再生的微环境。

神经轴突生长抑制因子Nogo家族的研究进展

Nogo家族是一类神经轴突生长抑制因子家族,目前成员包括Nogo-A,Nogo-B,Nogo-C三个亚型。Nogo家族成员因C末端具有保守的RHD结构域而归属于RTNs家族,表明它们的分布和功能与内质网密切相关。Nogo家族C末端还具有一个进化保守的66氨基酸的功能段称为Nogo-66,体外表达的Nogo-66片段具有抑制神经突生长的作用。Nogo家族成员结构上的区别主要表现在不同剪切长短的N末端序列。Nogo-A主要在中枢和外周神经系统中广泛分布,Nogo-C主要分布在骨骼肌,而Nogo-B则几乎遍布于各种组织与细胞之中。目前,发现可介导Nogo胞内信号转导通路的受体主要是膜外糖蛋白偶联的NgR和跨膜受体p75NTR组成的共受体,但NgR与Nogo-A在胚胎发育中时空表达并不同步提示可能还有其它受体存在。虽然Nogo家族作为神经轴突生长抑制因子被发现,但越来越多的研究表明其可能在胚胎发育、细胞凋亡或神经退行性变等重大事件中扮演重要角色。本文拟就Nogo家族迄今为止突出的研究进展作一综述,旨在为下一步的功能研究工作提供理论参考和依据。

配对免疫球蛋白样受体B与神经再生

成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)损伤后难以恢复,主要是由于中枢微环境中髓磷脂相关抑制因子介导的神经生长抑制作用引起的。配对免疫球蛋白样受体B(Pir B)作为其主要受体之一,在CNS损伤后高表达,参与神经生长抑制信号的传递。敲除或阻断Pir B,能促进脊髓损伤动物神经再生,缓解β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病的病理影响,显著诱导缺氧缺血损伤后皮层神经元轴突再生,恢复中枢炎性神经病模型动物的神经功能,视神经损伤后的视觉重塑功能加强。

术后认知功能障碍老年小鼠海马内NogoA-NgR1通路的变化

目的观察术后认知功能障碍老年小鼠海马内神经生长抑制因子NogoA及其受体NgR1表达的变化,并探讨其可能机制。方法采用异氟醚麻醉+腹腔探查术建立POCD模型。老年雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为四组:O_2+Saline组(OS组)、O_2+NEP1-40组(ON组)、异氟醚麻醉+腹腔探查术+Saline组(SS组)及异氟醚麻醉+腹腔探查术+NEP1-40组(SN组),每组10只。麻醉前7d行右侧脑室置管;麻醉前2h至行为学测试前2h每天侧脑室注射NEP1-40(20μg/2μl)或等容的无菌生理盐水,连续注射8d。术后第5天行旷场实验,第6、7天分别行场景性和条件性恐惧实验训练和测试。行为学测试后2h,取小鼠海马组织,采用Western blot法检测NogoA、NgR1、RhoA、ROCK2和GAP43含量变化;Golgi染色检测海马CA1区神经元树突棘数量改变。结果与OS和ON组比较,SS组在场景性恐惧实验测试中僵直反应百分比明显降低,海马内NogoA、NgR1、RhoA和ROCK2含量明显升高,GAP43含量和总的、新生的和成熟的树突棘数量明显减少(P<0.05);与SS组比较,SN组在场景性恐惧实验测试中僵直反应百分比明显升高,海马内RhoA和ROCK2含量明显降低,GAP43含量和总的、新生的和成熟的树突棘数量明显增多(P<0.05)。结论麻醉手术致老年小鼠认知功能损害与其海马内NogoA-NgR1通路过度激活有关。

电针及天麻素降低脑缺血大鼠杏仁中央核Nago-A及其受体的免疫组织化学表达

目的观察电针及天麻素对脑缺血大鼠杏仁中央核(central nucleus of amygdale,CeA)神经轴突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor-A,Nogo-A)及其受体(Nogo-A receptor,NgR)水平的影响,了解Nago-A及其受体是否参与针药结合治疗脑缺血作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、天麻素组和电针+天麻素组。除正常组,其余组采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型。待造模成功大鼠清醒后,模型组不予治疗,电针组电针(频率2Hz)刺激左侧"曲池""合谷"穴,天麻素组腹腔注射天麻素注射液,电针+天麻素组给予电针和天麻素联合治疗;均为每天1次,共治疗14d。采用免疫组织化学方法检测CeA内Nogo-A、NgR蛋白的水平。结果模型组Nogo-A、NgR免疫组织化学表达较正常组明显增强,电针组、天麻素组和电针+天麻素组Nogo-A和NgR表达性较模型组明显减弱,电针+天麻素组Nogo-A、NgR表达较电针组或天麻素组减弱。结论电针及天麻素均可抑制脑缺血后CeA内Nogo-A、NgR水平的升高,二者结合具有协同作用。

REST/NRSF和NMDAR1在脑胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨抑制元素-1沉默转录因子（repressor ehmem silencing transcription factor,REST）/神经元限制性沉默因子（neuron-restrictive silencer factor,NRSF）和N-甲基-D-天冬氨酸受体-1（NMDAR1）在人脑胶质瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法检测54例人脑胶质瘤组织标本中REST/NRSF和NMDAR1的表达.结果 54例人脑胶质瘤标本中可以观察到REST/NRSF和NMDARl的阳性表达,而且随着胶质瘤病理级别的提高阳性表达逐渐增强.在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ级胶质瘤中NRSF/REST阳性表达百分数分别为 2.9%,6.1%,16.2%和20.6%,NMDAR1阳性表达百分数分别为 6.2%,11.3%,19.1%和22.7%.方差分析显示,两者组间差异均具有显著性（REST/NRSF F=1 278.93,NMDAR1 F=516.69,两者均P〈0.05）.两者的表达相关性分析呈正相关（r=0.961,P〈0.05）.结论 REST/NRSF和NMDAR1可能在人脑胶质瘤的发生发展过程中起比较重要的作用,而且对于判断胶质瘤的恶性程度和预后具有一定的参考意义.

Nogo蛋白及其受体促进轴突生长的研究进展

现已研究证明,中枢神经损伤后不能再生,除了瘢痕的阻碍和促进神经生长因子的缺乏外,主要是由于轴突生长抑制因子的存在.Nogo蛋白、髓磷脂相关蛋白（MAG）和少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白（OMGP）及它们的共同受体Nogo蛋白受体（NgR）通过一种糖基磷脂酰肌醇（GPI）发挥抑制轴突生长的作用[1].

人脑胶质瘤中NRSF/REST和NMDAR1表达的差异及其与胶质瘤病理级别的关系

目的通过观察不同病理级别人脑胶质瘤中NRSF/REST和NMDAR1表达的差异,探讨其与胶质瘤病理级别的关系。方法 40例标本来自手术切除并经病理证实为胶质瘤。根据2000年WHO中枢神经系统肿瘤分类和分级标准,其中Ⅰ级10例,Ⅱ级10例,Ⅲ级10例,Ⅳ级10例。标本经石蜡包埋后经S-P免疫组织化学法染色,镜下分别观察NRSF/REST和NMDAR1在不同级别人脑胶质瘤标本中的表达。结果在胶质瘤标本中可以观察到NRSF/REST和NMDAR1的表达。NRSF/REST在Ⅰ级胶质瘤标本中的阳性表达率为3.5%,在Ⅱ级胶质瘤标本中的阳性表达率为6.4%,在Ⅲ级胶质瘤标本中的阳性表达率为14.8%,在Ⅳ级胶质瘤标本中的阳性表达率为19.5%。NMDAR1在Ⅰ级胶质瘤标本中的阳性表达率为6.3%,在Ⅱ级胶质瘤标本中的阳性表达率为10.8%,在Ⅲ级胶质瘤标本中的阳性表达率为18.2%,在Ⅳ级胶质瘤标本中的阳性表达率为22.2%,两者的表达呈正相关(P<0.05)。结论胶质瘤标本中可以观察到NRSF/REST和NMDAR1的表达,而且随着病理级别的升高,NRSF/REST和NMDAR1表达逐渐增强,不同病理级别的胶质瘤标本中REST/NRSF和NMDAR1的阳性表达率差异均有统计学意义,提示NRSF/REST和NMDAR1在胶质瘤的生长和侵袭过程中可能起一定的作用。

蒙成药额日敦-乌日勒水提取物对OGD诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的蒙成药额日敦-乌日勒水提取物对氧糖剥夺(OGD)诱导人神经母细胞瘤系(SH-SY5Y)细胞氧化损伤的保护作用。方法建立OGD诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测每组细胞的存活率,确定最佳药物浓度及给药时间。确定最佳药物浓度及给药时间后,利用乳酸脱氢酶(LDH)检测最佳药物浓度和给药时间后各组细胞的损伤抑制率,利用Real-Time PCR和Western印迹法检测每组细胞的神经轴突生长抑制因子受体(NgR)1、Ras同源基因家族成员(Rho)A mRNA和蛋白的表达变化。结果与OGD模型组相比,额日敦-乌日勒10μg/ml组24、48 h和15μg/ml组12、24、48 h的细胞存活率明显提高(P<0.01)。LDH检测结果:与对照组相比,OGD模型组LDH释放显著增高(P<0.01);与OGD模型组相比,实验组LDH释放显著降低(P<0.01)。与对照组相比,OGD模型组和实验组细胞NgR1和RhoA mRNA及蛋白表达均显著增加(P<0.01);与模型组相比,实验组细胞NgR1和RhoA mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论蒙成药额日敦-乌日勒对OGD诱导SH-SY5YS细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能是通过抑制细胞内氧化应激,下调抗凋亡蛋白NgR1、RhoA的高表达,从而减少神经细胞凋亡。

NgBR在肿瘤中潜在机制的研究进展

神经轴突生长抑制因子-B受体(neurite outgrowth inhibitor B receptor,NgBR)是神经轴突生长抑制因子-B(neurite outgrowth inhibitor B,Nogo-B)氨基末端特异性的受体,可以和Nogo-B特异性结合从而产生生物学效应,NgBR主要表达于肺、乳腺、平滑肌和血管中并在肝脏中广泛分布。本文综述了已发表的文献中关于NgBR在肿瘤中潜在机制领域的相关研究并进行了系统综述和展望。

NgBR对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运的影响

目的通过转染小干扰RNA(siRNA)沉默RAW264.7细胞源性泡沫细胞神经轴突生长抑制因子B受体(Ng BR)表达,研究Ng BR对泡沫细胞胆固醇逆转运(RCT)的影响,探索从RCT途径抗动脉粥样硬化(As)的新方法,为冠心病的临床防治提供新思路。方法利用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞,油红O染色进行鉴定。将泡沫细胞分为四组:空白对照组、siRNA阴性对照组、Ng BR-siRNA1转染组(si Ng BR-1组)、Ng BR-siRNA2转染组(si Ng BR-2组)。利用siRNA沉默泡沫细胞Ng BR基因表达,并利用real-time PCR和Western blot对其进行干扰效率鉴定。随后采用real-time PCR检测各组细胞肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)mRNA表达,Western blot检测各组细胞相应蛋白含量,液闪计数仪检测胆固醇流出率。结果 ox-LDL成功诱导泡沫细胞形成;si Ng BR-1组和si Ng BR-2组Ng BR mRNA及其蛋白明显下调(P<0.05);si Ng BR-1组和si Ng BR-2组LXRα、ABCA1和ABCG1的mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05),胆固醇流出显著减少(P<0.05)。结论 Ng BR可以增加巨噬细胞源性泡沫细胞RCT的调控基因LXRα及其下游基因ABCA1、ABCG1的表达,从而减弱或者避免As的发生和发展,为冠心病的临床防治提供理论依据。

粉尘螨滴剂联合丙酸氟替卡松吸入气雾剂治疗小儿哮喘急性发作合并过敏性鼻炎的疗效

目的:探讨粉尘螨滴剂联合丙酸氟替卡松吸入气雾剂(辅舒酮)治疗小儿哮喘急性发作合并过敏性鼻炎的疗效及其对血清金属蛋白酶组织抑制因子⁃1(TIMP⁃1),痰液神经生长因子(NGF)、Toll样受体2(TLR2)的影响。方法:选取2018年3月至2020年11月我院收治的哮喘急性发作合并过敏性鼻炎患儿123例,按随机数表法分为观察组61例和对照组62例,对照组在常规治疗基础上给予舌下含服粉尘螨滴剂,观察组在常规治疗基础上给予舌下含服粉尘螨滴剂及丙酸氟替卡松吸入气雾剂吸入治疗,于治疗前及治疗12周对过敏性鼻炎及哮喘严重程度进行评分。采用免疫比浊法检测治疗前和治疗12周后免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、血清C⁃反应蛋白(CRP)水平;采用流式细胞仪检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+),计算CD4^(+)/CD8^(+);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清白细胞介素⁃8(IL⁃8)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、TIMP⁃1、TLR2、NGF水平;肺功能仪检测第一秒用力呼气容积(FEV1)、呼气峰流速(PEF)、用力呼气25%流速(PEF25)、用力呼气50%流速(PEF50)、用力呼气75%流速(PEF75)。观察两组患儿治疗期间不良反应发生情况。结果:治疗12周后,观察组过敏性鼻炎及哮喘严重程度评分均低于对照组(P<0.05)。治疗12周后,观察组IgM、IgG、IgA、CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)水平均高于对照组(P<0.05),CD8^(+)水平低于对照组(P<0.05)。治疗12周后,观察组CRP、IL⁃8、TNF⁃α水平均低于对照组(P<0.05),FEV1、PEF、PEF25、PEF50、PEF75水平均高于对照组(P<0.05)。观察组治疗12周后血清TIMP⁃1水平低于对照组(P<0.05),痰液中TLR2水平高于对照组,NGF水平低于对照组(P<0.05)。两组患儿不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ^(2)=1.03,P>0.05)。结论:粉尘螨滴剂联合丙酸氟替卡松吸入气雾剂较单一应用粉尘螨滴剂治疗可有效提高小儿哮喘急性发作合并过敏性鼻炎的疗效,提高患儿免疫功能,抑制炎症反应,改善肺功能,降低TIMP⁃1、NGF水平,抑制气道重塑,提高TLR2水平,调节炎性及神经源性因子,且不会增加不良反应发生率,安全性较高。

NgR靶向治疗胶质瘤的分子生物学机制

神经轴突生长抑制因子受体（NgR）是髓鞘相关抑制因子Nogo-A、髓鞘相关糖蛋白（MAG）和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（OMgp）的共同作用途径。NgR在胶质瘤细胞黏附迁移、凋亡、神经干细胞分化及血管再生重塑等方面发挥着重要作用，有望成为针对神经胶质瘤进行分子靶向治疗的关键分子。