神经酰胺激酶抑制剂NVP-231对去势抵抗性前列腺癌细胞恶性表型效应的研究

目的探讨神经酰胺激酶(CerK)抑制剂NVP-231对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用Western blotting法检测VCaP、LNCaP两株雄激素依赖性前列腺癌细胞与C4-2B、PC3两株CRPC细胞内CerK蛋白水平。用DMSO或不同浓度(500、1000 nmol/L)NVP-231分别处理C4-2B和PC3细胞。采用CCK-8法、克隆形成实验、Hoechst染色法、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测处理48 h的细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移和侵袭能力。结果与VCaP、LNCaP两株雄激素依赖性前列腺癌细胞比较,C4-2B、PC3两株CRPC细胞中CerK蛋白水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与DMSO处理组比较,C4-2B和PC3细胞经NVP-231处理后细胞增殖能力降低,细胞克隆形成数目减少,细胞凋亡率升高,划痕愈合率降低,穿膜细胞数减少,差异均有统计学意义(P<0.05),且均具有浓度依赖性。结论CerK抑制剂NVP-231能通过抑制细胞增殖与生长,促进凋亡,降低细胞侵袭和迁移能力,进而逆转CRPC细胞的恶性表型。

神经酰胺激酶(CerK)催化反应的肿瘤生物学意义

神经酰胺激酶(ceramide kinase,CerK)是唯一已知的在哺乳动物细胞中催化神经酰胺(ceramide,Cer)磷酸化为1-磷酸神经酰胺(ceramide-1-phosphate,C1P)的脂蛋白酶。作为该酶促反应底物的Cer在神经鞘脂代谢和信号转导途径中起着中心介质的作用,调节许多基础的细胞反应;而C1P作为该酶促反应产物,同样是与细胞功能和命运密切相关的生物活性脂质。现有研究表明,CerK、Cer及C1P均参与调控肿瘤细胞增殖、存活、凋亡与迁移/转移,与肿瘤发生和发展密切相关,是抗肿瘤治疗的潜在靶点。

木犀草素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠SPH/SPHK1/S1P1通路及神经元凋亡的影响

目的探讨木犀草素(Luteolin)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠神经酰胺-鞘氨醇(Sphingosine, SPH)/鞘氨醇激酶1(Sphingosine kinase 1,SPHK1)/1-磷酸鞘氨醇受体1(Sphingosine-1-phosphate 1,S1P1)通路蛋白表达水平及神经元凋亡的影响。方法取雌性Wistar大鼠,采用注射豚鼠脊髓免疫抗原法建立EAE模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型(EAE)组,Luteolin低(5mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组(61.7 mg/kg),每组各10只;另取10只雌性Wistar大鼠,注射等量生理盐水,作为空白对照(Control)组;各组于造模15 d后开始给药,Luteolin低、中、高剂量组经腹腔注射相应剂量Luteolin药物,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组灌胃给予相应剂量的FTY720,EAE组和Control组灌胃和腹腔注射等量生理盐水,各组连续给药14 d, 2次/d;各组大鼠于末次给药12 h后对大鼠EAE临床症状进行评分;取脊髓组织,用苏木精-伊红染色(Hematoxylin eosin, HE)及固蓝(Luxol fast blue, LFB)染色法检测大鼠髓鞘组织病理表现及脱髓鞘面积;原位缺口末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling, TUNEL)法检测髓鞘组织中神经元的凋亡情况并计算凋亡率;以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测髓鞘组织中通路蛋白SPHK,SPH,S1P1及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Cystein-asparate protease-12,Caspase-12)蛋白相对表达水平。结果与Control组比较,EAE组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均升高(P<0.05);与EAE组比较,Luteolin低、中、高剂量组及芬戈莫德(FTY720)阳性对照组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均降低(P<0.05),且Luteolin各剂量组上述指标水平呈剂量依赖性;Luteolin高剂量组与芬戈莫德(FTY720)阳性对照组的上述指标水平均无明显差异(P>0.05)。结论 Luteolin可能通过抑制EAE模型大鼠髓鞘组织SPHK,SPH,S1P1蛋白表达来抑制EAE大鼠脱髓鞘病变及神经元凋亡。