C2神经酰胺对帕金森病模型鼠多巴胺能神经元的保护作用

背景:C2神经酰胺可减少Alpha突触核蛋白(Alpha-Synuclein,α-Syn)寡聚体的形成,其作为蛋白磷酸酶2A激动剂在中枢神经系统对细胞老化具有重要调节作用。目的:探究C2神经酰胺对多巴胺能神经元的保护作用机制。方法:将25只C57BL/6系小鼠随机分为对照组、模型组及C2神经酰胺低、中、高剂量组,每组5只。除对照组之外,其他各组均通过左侧纹状体注射突变型A53Tα-Syn寡聚体建立帕金森病小鼠模型,在纹状体注射第30天后,3个C2神经酰胺各剂量组小鼠一次性经胃灌注溶于生理盐水中的各剂量C2神经酰胺(1,5,10μg/g),对照组及模型组同法灌注等量生理盐水,于造模后第30-90天,连续每天给药,共60 d,期间观察各组小鼠行为学变化。在纹状体注射第90天后,在适度麻醉条件下对各组小鼠灌注取脑,以免疫组织化学染色分析小鼠中脑黑质多巴胺能神经元的变化,以ELISA法检测小鼠中脑α-Syn寡聚化和磷酸化水平,并分析影响α-Syn磷酸化的相关酶活性变化。结果与结论:①C2神经酰胺对经纹状体注射的突变型A53Tα-Syn寡聚体所导致的小鼠帕金森病样运动障碍具有改善作用,且C2神经酰胺高剂量组对帕金森病模型鼠运动障碍的改善作用更为明显(P<0.01);②突变型A53Tα-Syn寡聚体致使小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数目明显减少(P<0.01),而C2神经酰胺高剂量组黑质多巴胺能神经元数目则明显增多(P<0.01);③与模型组相比,C2神经酰胺高剂量组小鼠中脑内α-Syn寡聚体和磷酸化α-Syn水平明显降低(P<0.01),而神经酰胺的水平增高(P<0.05),蛋白磷酸酶2A活力明显上调(P<0.01);④上述数据说明,C2神经酰胺可通过改善小鼠中脑组织α-Syn的磷酸化修饰环境,缓解了由寡聚的α-Syn所诱导的神经毒性作用,保护了小鼠中脑黑质多巴胺能神经元数量的减少,从而减轻帕金森病的运动障碍程度。

慈菇消脂方对非酒精性脂肪性肝病神经酰胺C2/iNOS信号通路的调节作用

目的通过中药慈菇消脂方干预高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织神经酰胺(Ceramide)Cer2和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)信号通路的调节作用,探讨以解毒化痰法中药组方制剂的慈菇消脂方治疗NAFLD的作用机制。方法选用SPF雄性Wistar健康大鼠60只,随机分为造模组(50只)和正常对照组(10只),造模组通过高脂饮食成功建立NAFLD模型大鼠50只,随机分为模型组、慈菇消脂方高剂量组、慈菇消脂方中剂量组、慈菇消脂方低剂量组、吡格列酮西药对照组,每组10只。连续灌胃给药6周结束后,取材NAFLD大鼠肝脏和血清。检测肝组织、血浆中神经酰胺C2、肝组织游离脂肪酸(FFA)和iNOS,电镜下观察细胞器形态与结构变化。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织和血浆中神经酰胺C2、肝组织iNOS和FFA水平升高(P﹤0.01);电镜下肝组织呈中-重度脂肪变性并伴有肝细胞凋亡。与模型组比较,慈菇消脂方治疗组、吡格列酮对照组大鼠肝组织和血清神经酰胺C2,肝组织iNOS、FFA水平降低,(P﹤0.01)差异有统计学意义。结论以解毒化痰法组方的慈菇消脂方能够抑制NAFLD模型大鼠神经酰胺C2、iNOS、FFA水平,减轻肝细胞脂凋亡起到防治NAFLD的作用。

C_2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化

目的探讨外源性C2-神经酰胺所致HT-29细胞凋亡中线粒体的变化。方法C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞,采用透射电镜观察细胞线粒体超微结构的变化;采用Mitochondrial Apoptosis Detection Kit和流式细胞仪检测细胞凋亡时线粒体损伤及其膜电位的变化。结果C2-神经酰胺作用HT-29细胞24h,线粒体发生空泡化、变性、嵴肿胀或消失等形态学改变;此时荧光显微镜下可观察到线粒体聚集,发出红色荧光,而正常细胞线粒体发出绿色荧光。C2-神经酰胺作用细胞6h,线粒体膜电位即开始降低,呈时间-剂量-效应关系;结论线粒体参与C2-神经酰胺诱导HT-29细胞凋亡作用。

丝裂霉素C与C_(2-)神经酰胺协同抑制人膀胱癌细胞生长及其机制的研究(英文)

目的评价丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用对人膀胱癌细胞的作用效果, 并探讨其机制。方法不同浓度丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合作用于人膀胱癌 BIU- 87 细胞后, 应用噻唑蓝( MTT) 法检测药物细胞毒性, 通过计算合用指数( CI) 分析协同作用, 流式细胞术( FCM) 检测 BIU- 87 细胞凋亡率, 吖啶橙( AO) 荧光染色观察凋亡形态学变化, Western blot 检测细胞色素 C 在细胞内分布变化, 并检测半胱天冬氨酸蛋白酶 3 ( Caspase- 3) 活性改变。结果单独应用时丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺的中效浓度分别是 159μmol/L 和 28 μmol/L, 联合用药时下降为 55 μmol/L 和 11 μmol/L, CI=0.74。丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用均可导致 BIU- 87 细胞出现凋亡的形态学变化。两种药物联合应用时的凋亡率高于各自单用( P <0.05) 。线粒体细胞色素 C 含量在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组减少, 联合用药时减少最为明显, 细胞浆内细胞色素 C 含量在联合用药时增加也最为明显( P <0.05) 。Caspase- 3 活性在丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺单独及联合应用时均较对照组升高, 联合用药时升高最为明显( P <0.05) 。结论丝裂霉素 C 与 C2- 神经酰胺联合应用可以通过共同诱导细胞凋亡, 协同抑制膀胱癌细胞生长。线粒体细胞色素 C释放和 Caspase- 3 活性变化可能发挥重要作用。

C_2-神经酰胺对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的:研究C2-神经酰胺(C2-cer)对小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入刀豆蛋白A(ConA)或佛波醇酯(PMA)和离子霉素(Ion)进行刺激,以不同终浓度的C2-cer与T细胞共培养。流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModF it软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为25、50和75μmol/L的C2-cer可以显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的(60.13±1.18)%,分别降低为(54.56±1.14)%、(48.73±1.26)%和(27.09±1.07)%(P<0.01);CFDA-SE染色结果显示,各浓度C2-cer对ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用,增殖指数(PI)由ConA组的(1.81±0.25),分别降低为(1.46±0.01)、(1.25±0.04)和(1.18±0.03)(P<0.05);各浓度C2-cer均可明显抑制PMA+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)由PMA+Ion组的(1.47±0.01),分别降低为(1.27±0.01)、(1.11±0.01)和(1.05±0.01)(P<0.05)。结论:C2-cer能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。

C2-神经酰胺诱导大鼠脑胶质瘤细胞C6的早期凋亡作用

目的 :研究外源性C2 神经酰胺对大鼠脑胶质瘤细胞C6活力的抑制作用以及早期凋亡诱导作用。方法 :采用MTT法测定C2 神经酰胺对C6细胞活力的影响 ;倒置荧光显微系统观察细胞形态变化 ;An nexinⅤ PI双染色流式细胞术对细胞早期凋亡进行定量分析。结果 :C2 神经酰胺可显著抑制C6细胞的活力 ,IC50 为 2 .2× 10 -5mol·L-1;荧光染色可见核浓染等细胞凋亡特征形态改变 ;流式细胞术分析表明C2 神经酰胺可诱导C6细胞发生早期凋亡作用 ,且凋亡百分率呈时间及浓度依赖性 ,C2 神经酰胺 2× 10 -5mol·L-1处理 2 4h后平均早期凋亡率高达4 9 .3%。结论 :C2 神经酰胺主要通过诱导早期细胞凋亡对大鼠脑胶质瘤C6细胞发挥细胞毒作用 ,提高神经酰胺水平有望成为肿瘤化疗的新途径。

丝裂霉素C联合C_2-神经酰胺对人膀胱癌T_(24)细胞生长的抑制作用

目的探讨丝裂霉素C(mitomycinC,MMC)与C2-神经酰胺(C2-ceramide,C2-cer)联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazole-2yl)-2,5-diphenylte-trazoliumbromid,MTT]比色法测定MMC和C2-cer单独或联合应用对人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用,并应用Chou-Tala-lay联合指数法定量分析药物之间相互作用的效果。结果MMC、C2-cer单独应用时,随药物浓度增加对T24细胞生长的抑制作用也增加,中效浓度分别为153.426、27.797μmol/L。MMC与C2-cer联合应用时,相互作用的效果表现为在低浓度(0<fa<43%)时呈协同作用(CI<1),高浓度(43%<fa<100%)时呈拮抗作用(CI>1),中效浓度为89.536μmol/L(其中MMC74.048μmol/L,C2-cer15.488μmol/L)。结论MMC和C2-cer相互作用的效果与药物浓度相关,低浓度时呈协同作用,高浓度时呈拮抗作用。

C_2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放影响研究

目的探讨外源性C2-神经酰胺对线粒体膜间隙蛋白释放的影响。方法12.5、25和50μmol/L C2-神经酰胺作用人结肠癌HT-29细胞24 h,采用Mitochondrial/Cytosol Fractionation试剂盒分离细胞线粒体和细胞液,应用Western Blotting方法检测线粒体和细胞液中Cyt c、Smac和HtrA2蛋白表达水平。结果C2-神经酰胺作用细胞后,Cyt c、Smac和HtrA2总蛋白的表达水平未见明显改变,但随着C2-神经酰胺浓度增加,Cyt c、Smac和HtrA2从线粒体释放入细胞液中的水平逐渐增加,具有剂量-效应关系。Caspases抑制剂存在下,50μmol/L C2-神经酰胺仍能使Cyt c和HtrA2从线粒体释放入胞液中,但Smac却不能释放。结论C2-神经酰胺能通过Caspases依赖和非依赖的方式促进线粒体膜间隙蛋白的释放入细胞液,诱导细胞凋亡作用。

C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:观察C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影响及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性的变化。方法:取第二代牛LECs,经不同浓度(25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L)C2-神经酰胺作用12h,行TUNEL染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,计算凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测牛LECs中Caspase-3活性的变化。结果:随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LECs凋亡率也随之升高(P<0.05),呈剂量依赖关系。随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LEC中Caspase-3活性的表达也随之增强(P<0.05)。结论:C2-神经酰胺可以诱导牛LECs发生凋亡;在此过程中,存在Caspase-3活性表达。

神经酰胺以Caspase依赖和非依赖方式诱导线粒体凋亡蛋白释放

本研究探讨了外源性C2-神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡中,线粒体膜间隙凋亡蛋白的释放机制.不同浓度C2-神经酰胺作用HT-29细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm),线粒体/细胞液分离试剂盒分离亚细胞成分,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞色素C(Cytc)、高温必需蛋白A2(HtrA2)、线粒体源性半胱天冬氨酸蛋白酶第二活化因子(Smac)、凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平.实验结果显示25和50μmol/LC2-神经酰胺作用细胞6h,△Ψm即开始下降(P<0.05),且环孢霉素能通过调节线粒体膜通透性转换孔抑制△Ψm的下降.C2-神经酰胺对Cytc,HtrA2和Smac总蛋白表达没有明显影响,但能诱导Cytc,HtrA2和Smac从线粒体释放入细胞液中,并下调XIAP蛋白的表达及活化Caspase-3.在Caspase抑制剂存在下,C2-神经酰胺仍能诱导Cytc和HtrA2从线粒体释放,但不能诱导Smac释放.因此认为C2-神经酰胺能通过线粒体凋亡通路诱导HT-29细胞凋亡,C2-神经酰胺诱导Cytc和HtrA2从线粒体的释放是Caspase非依赖性的,而Smac释放是Caspase依赖性的.