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不止是沉默——神经元限制性沉默因子及其作用元件的研究进展 被引量:2
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作者 刘庆斌 李艳华 裴雪涛 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期239-241,共3页
神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称repressor element silencing transcription factor,REST)是一种锌指(zincfinger)蛋白,它能与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer ... 神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF;又称repressor element silencing transcription factor,REST)是一种锌指(zincfinger)蛋白,它能与某些基因中相应的神经元限制性沉默元件(neuron-restrictive silencer element,NRSE;又称repressor element-1,RE-1)相结合,使序列中的组蛋白发生去乙酰化,从而对某些神经性基因的表达发挥阻遏作用。随着研究的深入,人们发现NRSF-NRSE在神经发育过程中有着复杂的调控功能,这主要是由于NRSF/NRST蛋白及REST辅助蛋白(CoREST)介导的甲基化作用,NRSF蛋白转录后形成的一系列剪切体也可能参与其中。另外,NRSF及其不同的剪切体还与一些神经系统疾病和肿瘤的发生密切相关。深入研究NRSF的调控机制对于进一步了解一些神经系统疾病的发生有着重要意义。 展开更多
关键词 神经限制性沉默因子 神经限制性沉默元件 去乙酰化 甲基化 神经特异性基因
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神经元限制性沉默因子对人胰岛素基因转录调控作用的研究 被引量:5
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作者 刘庆斌 李艳华 +11 位作者 杨印祥 袁红丰 张锐 秦立蓬 吕洋 张赛男 孙迪金 陈琳 白慈贤 南雪 王韫芳 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期952-959,共8页
为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相... 为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相似的序列,提示,它可能受NRSF调控.构建了含NRSF基因的慢病毒载体,将其稳定转染于INS-1细胞.构建了3种荧光素酶报告载体:含有人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体,pGL3-Basic载体和含有2拷贝NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体.利用稳定转染及瞬时转染实验观察NRSF对报告载体中荧光素酶活性的影响.利用电泳迁移率变动分析实验观察NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况,并通过竞争结合实验、引入特异性抗体实验证实探针与蛋白质结合的特异性.RT-PCR检测证实,感染空病毒的INS-1细胞不表达NRSF,感染含目的基因慢病毒的INS-1细胞能表达NRSF.将含有hInsP-LUC的慢病毒载体稳定转染于上述2种细胞,荧光素酶活性分析结果显示,NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性.瞬时转染hInsP-LUC报告系统于上述2种细胞,结果也显示NRSF能明显抑制胰岛素启动子-荧光素酶的活性.将含有NRSE-LUC的报告载体瞬时转染于上述2种细胞,结果表明过表达NRSF的INS-1细胞组的荧光素酶相对值比对照组有明显下降.电泳迁移率变动分析实验进一步证实,此NRSE样序列可以与NRSF蛋白特异结合,这种特异结合可以被标准的NRSE序列所竞争.结果表明,人胰岛素启动子中含有NRSE样序列,该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性.这一研究工作有助于进一步了解NRSF在胰岛细胞中的调控作用. 展开更多
关键词 神经限制性沉默因子(NRSF) 神经限制性沉默元件(NRSE) 胰岛素 启动子
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NRSE/RE-1序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系
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作者 张涛 顾文佳 +1 位作者 刘晓玉 庞希宁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期412-415,共4页
目的探索神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系。方法应用序贯诱导法定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,基因芯片筛选出的11种含NRSE/RE-1序列的神经相关基因,实时定量PCR测定其在分化过程中... 目的探索神经限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列与小鼠胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的关系。方法应用序贯诱导法定向诱导鼠胚胎干细胞分化为神经细胞,基因芯片筛选出的11种含NRSE/RE-1序列的神经相关基因,实时定量PCR测定其在分化过程中的表达。结果诱导分化后的胚胎干细胞表达多种成熟神经元标志,11种含NRSE/RE-1序列基因随诱导分化的进程表达量升高。结论鼠胚胎干细胞可通过序贯诱导分化为神经细胞,NRSE/RE-1序列可能是胚胎干细胞向神经元诱导分化的主要调控位点。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 神经 细胞分化 神经限制性沉默元件
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NRSF慢病毒干涉载体的构建及功能初步检测 被引量:2
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作者 杨印祥 李艳华 +6 位作者 刘庆斌 张赛男 陈琳 吕洋 白慈贤 南雪 裴雪涛 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第2期151-158,共8页
为研究神经元限制性沉默因子(NRSF)负调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,拟通过RNAi的方法降低NRSF表达以进一步观察其调控的下游基因的表达情况.构建含人胰岛素启动子-荧光素酶(HIP-LUC)的pcDNA3.1报告载体.通过RNAi序列设... 为研究神经元限制性沉默因子(NRSF)负调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,拟通过RNAi的方法降低NRSF表达以进一步观察其调控的下游基因的表达情况.构建含人胰岛素启动子-荧光素酶(HIP-LUC)的pcDNA3.1报告载体.通过RNAi序列设计软件进行NRSF干涉片段及脱靶对照片段的设计,然后构建慢病毒干涉载体.包装产生慢病毒干涉毒液,用其感染HeLa细胞获得稳定干涉NRSF的细胞株,利用RT-PCR、实时定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色等方法检测NRSF的干涉效果及其下游基因的表达情况,观察干涉NRSF后胰岛素启动子报告载体荧光素酶活性的变化.构建具有NRSF干涉效果的慢病毒干涉载体成功,并获得了稳定干涉NRSF及脱靶对照的HeLa细胞株,RT-PCR及实时定量PCR检测结果表明,NRSF干涉片段的干涉效率为56%(n=6,P<0.01),蛋白质免疫印迹、免疫荧光染色方法检测证实干涉后NRSF蛋白表达水平明显降低.RT-PCR实验表明干涉NRSF后下游基因开始表达,荧光素酶活性分析表明,干涉NRSF后胰岛素启动子活性增强了2.4倍(n=3,P<0.01).上述结果表明,成功构建NRSF的慢病毒干涉载体并获得稳定干涉NRSF的HeLa细胞株,干涉NRSF后,其下游基因特别是胰岛素基因开始表达.这一研究工作有助于我们进一步了解NRSF在胰岛细胞发育分化中的调控作用. 展开更多
关键词 神经限制性沉默因子 神经限制性沉默元件 RNA干涉 胰岛素
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Epigenetics and neural stem cell commitment 被引量:1
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作者 汤海亮 朱剑虹 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2007年第4期241-248,共8页
Neural stem cell is presently the research hotspot in neuroscience. Recent progress indicates that epigenetic modulation is closely related to the self-renewal and differentiation of neural stem cell. Epigenetics refe... Neural stem cell is presently the research hotspot in neuroscience. Recent progress indicates that epigenetic modulation is closely related to the self-renewal and differentiation of neural stem cell. Epigenetics refer to the study of mitotical/meiotical heritage changes in gene function that cannot be explained by changes in the DNA sequence. Major epigenetic mechanisms include DNA methylation, histone modification, chromatin remodeling, genomic imprinting, and non-coding RNA. In this review, we focus on the new insights into the epigenetic mechanism for neural stem cells fate. 展开更多
关键词 stem cells EPIGENESIS neuron restrictive silencer element genomic imprinting H19 non-coding RNA
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内含子序列对CART基因转录调控作用的初步研究 被引量:6
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作者 张静 王思涵 +7 位作者 杨印祥 姚海雷 陈琳 吕洋 南雪 岳文 李艳华 裴雪涛 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期272-277,共6页
目的研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因转录水平的调控作用。方法分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内... 目的研究内含子序列对可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)基因转录水平的调控作用。方法分别以HeLa细胞和人源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的基因组DNA为模板,PCR扩增CART内含子Ⅰ(Intron)、CART截短内含子Ⅰ(去除NRSE基序,NRSEnonIntron)序列,克隆入载体pGL3-Basic-CART32,构建pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron荧光素酶报告载体。经质粒酶切和DNA测序进行鉴定。将报告载体瞬时转染入NT2/CloneD1细胞系,进行荧光素酶活性的分析。取1×107NT2/CloneD1细胞,采用抗NRSF和抗IgG抗体进行染色质免疫共沉淀,分析NRSF与CART内含子区NRSE的体内结合情况。结果构建的pGL3-Basic-CART32-Intron、pGL3-Basic-CART32-NRSEnonIntron报告载体经酶切和测序鉴定正确。pGL3-Basic-CART32-Intron荧光素酶活性相对pGL3-Basic-CART32下调57.9%(P<0.05),pGL3-Basic-CART32-NRSEnon Intron相对pGL3-Basic-CART32-Intron上调53.8%(P<0.05)。在NT2/CloneD1细胞中,CART内含子区NRSE调控元件能与NRSF蛋白结合。结论研究结果表明,CART内含子序列对CART基因转录发挥负调控作用,内含子中的NRSE序列参与介导了其对CART基因的转录负调控作用。 展开更多
关键词 可卡因-苯丙胺调节转录肽 内含子 转录调控 神经限制性沉默因子 神经限制性沉默元件
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