敲低神经靶酯酶引起斑马鱼发育缺陷

神经靶酯酶是Patatin样磷脂酶家族的成员,在神经发育中发挥重要作用。某些有机磷通过抑制神经靶标酯酶,导致人类和鸡有机磷酸酯诱导的迟发性神经病。神经靶标酯酶突变还会导致遗传性痉挛性截瘫等运动神经元疾病。Neuropthy target esterase功能的重要性已经得到一些了解,但是对于NTE在动物发育过程中的具体功能以及其导致运动神经元疾病的具体机制尚不清楚。本次实验对nte在斑马鱼发育过程中表达情况进行了分析,在此基础上使用吗啉反义寡核苷酸敲低nte基因,研究nte在斑马鱼胚胎中的具体功能及其作用机制。结果表明,nte出现在胚胎发育早期,并且斑马鱼Nte在其胚胎发育整个过程中表达。nte敲低后的斑马鱼表现出一系列的发育缺陷,包括尾部卷曲、轴突截断和分叉。nte敲低的斑马鱼胚胎细胞凋亡增加,神经元中出现胞内空泡、异常膜结构积累、内质网和线粒体结构异常以及自噬增加。总之,NTE在动物发育过程中以及其导致的运动神经元疾病中发挥重要作用。本研究为NTE的功能及其在神经变性中的作用机制提供了依据。

TOCP对鸡淋巴细胞神经病靶酯酶抑制的研究

对磷酸三邻甲苯酯(TOCP)染毒母鸡进行淋巴细胞神经病靶醋酶(NTE)活性测定,发现所有染毒组动物在染毒后24～48小时发生NTE活性抑制。其中NTE活性抑制≥69.5%的鸡,在染毒后8～17天全部出现迟发性神经病症状。提示淋巴细胞NTE活性测定对早期判断有机磷迟发性神经病的发生有参考价值。

神经病靶酯酶的表达调控和生物功能

神经病靶酯酶(neuropathy target esterase,NTE)能在有机磷酸酯类化合物的作用下发生“老化反应”,导致有机磷酸酯诱导的迟发性神经病(organophosphate induced delayed polyneuropathy,OPIDP)的产生。NTE由PNPLA6(patatin-like phospholipase domain containing 6)基因编码,在神经元分化的早期也起着至关重要的作用,PNPLA6基因沉默将抑制神经元的正常分化。除此之外,NTE还能够水解磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)维持细胞膜的稳定性,并随着细胞周期的进程中而发生规律性的变化。NTE氨基末端的调节域具有环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的结合位点,近年来cAMP/PKA/CREB通路被证实能够显著调控NTE的表达,其他参与调控的通路及分子也逐渐被人们所发现。文章就NTE的表达调控和生物功能展开综述。

生物标志物用于有机磷农药的迟发性神经毒性研究

[目的]通过3种有机磷农药三唑磷（Triazophos，Tri）、丙硫磷（Prothiophos，Pro）和三甲基苯基磷酸酯（Triortho cresyl phosphate，TOCP）对莱亨种系海兰母鸡的作用来探讨有机磷农药的迟发性神经毒性效应及其对生物标志物的影响。[方法]试验设计Tri（4mg／kg体重）组、Pro（200mg／kg体重）组、TOCP（750mg／kg体重t）组以及阴性对照（植物油）组，各组神经毒性症状观察动物数均为8只。被试鸡在给药前10min皮下注射硫酸阿托品（10mg／kg）以防止急性中毒死亡，然后用咽颊部滴注自然吞咽方法1次染毒，观察其在21d内的运动状态神经毒性症状、体重及摄食变化。到期取脑、脊髓、坐骨神经进行髓鞘磷脂的组织化学检查（Pal—Weigert法髓鞘染色）。神经毒性症状程度按Hollingshaus（1981）的标准分类。各组生化指标测定动物数均为15只（染毒方法同前），在试验的第1、3、7、14、21天取血测定全血胆碱酯酶活性变化，取脑组织测定神经病靶酯酶（NTEo[结果]Tri、Pro组各有1只鸡死亡。Tri、Pro组的神经毒性症状积分与对照组相比差异均无显著性，TOCP组与对照组相比差异有非常显著性。Tri、Pro组的体重与阴性对照组相比差异均无显著性，TOCP组的体重在第1-2周与阴性对照组相比差异有显著性，第3周与时差异有非常显著性。Tri、Pro、TOCP组的全血胆碱酯酶（BChE）活性下降，在第1，7天与对照组相比差异有非常显著性；在第14天Tri、Pro组与对照组相比差异非常显著，TOCP组与对照组相比差异有显著性。Tri、Pro组的NTE活性下降，在第3天与对照组相比差异有显著性（P〈0．05），抑制率〈40％；TOCP组的NTE活性下降。在第l。14天与阴性对照组相比差异均有非常显著性（P〈0．01），抑制率在第1-3天达到70％以上，与对照组相比差异有非常显著性（P〈0．01）。3种OPs对生物标志物的影响均非常明显，BChE和NTE的最大抑制均发生在第3天；Tri和Pro对NTE的抑制率均〈40％，TOCP则〉70％，最高达到86％。病理组织学的脑、脊髓、坐骨神经检查。Tri、Pro组未见脱髓鞘，TOCP组见脱髓鞘病变。[结论]Tri和Pro未见迟发性神经毒性效应，TOCP有迟发性神经毒性作用。BChE可作为有机磷的接触生物标志物，NTE可作为有机磷的效应生物标志物。

神经病靶酯酶与妊娠期高血压疾病发病的相关性研究

目的探讨正常妊娠妇女和妊娠期高血压疾病患者胎盘中神经病靶酯酶(NTE)的表达模式,以及NTE的表达与妊娠期高血压疾病患者的孕产儿体质量的关系。方法收集2017年1月1日-2018年12月31日在嘉兴学院附属妇儿医院定期产检并分娩的重度子痫前期30例、轻度子痫前期10例、妊娠期高血压疾病30例、妊娠合并慢性高血压疾病10例以及随机选择同期住院分娩无其他妊娠合并症的正常妊娠妇女(对照组) 30例为研究对象,比较各组基本资料差异情况。采用定量PCR和Western蛋白定量检测正常妊娠妇女和妊娠期高血压疾病患者胎盘的NTE表达水平。结果重度子痫前期较其余4组分娩孕周小,差异有统计学意义(P<0. 05);轻度子痫前期、妊娠期高血压疾病患者与对照组和妊娠合并慢性高血压疾病患者比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。重度子痫前期、轻度子痫前期的孕期体质指数(BMI)与妊娠期高血压疾病、对照组及妊娠合并慢性高血压疾病患者比较,差异有统计学意义(P<0. 05);新儿体质量在重度和轻度子痫前期与妊娠期高血压疾病、对照组及妊娠合并慢性高血压疾病比较,差异有统计学意义(P<0. 05);重度子痫前期患者胎盘中NTE mRNA和蛋白表达水平均显著低于正常对照组、妊娠期高血压疾病患者、轻度子痫前期患者以及妊娠合并慢性高血压疾病患者。轻度子痫前期胎盘中NTE mRNA和蛋白表达水平显著低于正常对照组、妊娠期高血压疾病组以及妊娠合并慢性高血压组。妊娠期高血压组患者胎盘中NTE mRNA和蛋白表达水平显著低于正常对照组以及妊娠合并慢性高血压组。妊娠期高血压疾病患者胎盘中NTE mRNA和蛋白表达水平与胎儿体质量呈现正相关。结论胎盘中NTE可能参与子痫前期的发生和发展以及预后。未来需要进一步的基础研究来证实。

神经病靶酯酶在子痫前期的表达变化及对胎盘滋养层细胞的影响

目的探讨神经病靶酯酶在子痫前期的表达变化及对胎盘滋养层细胞的影响。方法选取2017年6月-2018年10月本院收治的子痫前期孕妇30例为研究对象,设为PE组,另选30例健康孕妇设为对照组:采用定量PCR和Western blot检测2组孕妇胎盘NTE表达水平,采用转染法研究NTE表达水平变化对滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭的影响。结果PE组相比于对照组,NTE在胚胎组织中表达量均显著下降(P<0.05);相比于Blank组,NTE Over组NTE表达量显著上升(P<0.05),NTE shRNA组NTE表达量明显降低(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验结果表明,相比于Blank组,NTE Over组细胞迁移面积、侵袭数均显著增加(P<0.05),NTE shRNA组细胞迁移面积、侵袭数均降低明显(P<0.05);细胞增殖方面各组无明显差异(P>0.05)。结论子痫前期胎盘中NTE mRNA和蛋白表达均显著下降。NTE表达水平降低可抑制滋养层细胞的迁移和侵袭,促进PE的发生发展。

三邻甲苯基磷酸酯毒性作用研究进展

三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)属有机磷酸酯类化合物,剧毒,具有多器官毒性,主要表现在神经系统、睾丸、肝脏和免疫系统;其中以神经系统为主要靶组织,以产生迟发性神经毒性(OPIDN)为特征,造成机体永久性损伤。TOCP中毒没有特效药治疗,禁用和限量为主要预防措施。全面了解TOCP毒性作用,有助于对机制的进一步研究,为临床治疗TOCP中毒患者提供参考,对其他有机磷毒物研究有重要借鉴意义。

TOCP对作业工人淋巴细胞NTE活性的影响

测定60例TOCP作业工人的淋巴细胞NTE活性,结果表明,该酶活性的降低可在一定程度上反映近期TOCP接触水平,因而可以做为有机磷作业工人的一项监测指标;但对岗位多变或已经脱离TOCP接触的迟发性神经病患者,淋巴细胞NTE活性测定无显著意义。

来亨鸡迟发性神经毒性模型的建立及对95%嘧啶氧磷原药迟发性神经毒性的评价

目的建立鸡迟发性神经毒性模型,并对95%嘧啶氧磷原药的迟发性神经毒性进行评价。方法研究利用来亨鸡进行试验,试验设三邻甲苯磷酸酯(Tri-o-cresyl phosphate,TOCP)组(500mg/kg·BW)、溶剂对照组、95%嘧啶氧磷原药低、中、高剂量组(53.8mg/kg·BW、107.5mg/kg·BW、215.0mg/kg·BW),每组15只,一次给药后观察临床症状及组织病理学改变,并进行生化指标神经病靶酯酶(neuropathy target esterase,NTE)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholin esterase,ACHE)的测定。结果TOCP组于给药第10d起相继出现明显迟发性神经毒性反应。病理组织学检查可见脱髓鞘病变。TOCP染毒24h和48h对脑和腰部脊髓中NTE抑制率>70%,ACHE活力低于溶剂对照组(P<0.01),NTE活力48h后与24h后活力无明显差异;48h后ACHE活力比24h后活力降低。1周后NTE和AChE活力均呈现恢复趋势。溶剂对照组及95%嘧啶氧磷原药各剂量组均未见明显相关反应。结论NTE可作为迟发性神经毒早期诊断的指标,ACHE活力随时间的变化趋势也可以做为早期预测和诊断OPIDN发生的重要指标。95%嘧啶氧磷原药未见迟发性神经毒性。

大鼠脑挫伤后NTE与COX-2表达随时间的变化

目的观察大鼠脑挫伤后脑组织NTE和COX-2的表达变化,并评价其法医学的意义。方法健康SD大鼠48只,随机分成正常对照组、手术对照组、挫伤组(按挫伤后处死时间再分为1h、12h、1d、3d、7d、14d共6个组)每组6只。以自由落体撞击法制作脑挫裂伤模型;应用免疫组化方法检测COX-2和NTE在脑组织中的表达情况;用SPSS 13.0软件分析COX-2和NTE的表达情况与脑挫伤后存活时间的相关性。结果正常对照组和假手术组NTE和COX-2均呈低水平表达,脑挫伤组伤后NTE和COX-2表达逐渐增强,均于1d达到高峰,至14d时COX-2表达降至正常对照组水平,而NTE仍高于正常对照组水平;挫伤各组与正常对照组比较,除1h组灰度值无统计学差异(P>0.05)外,其余各组均有明显差异(P<0.01)。结论脑挫伤后脑组织NTE和COX-2的表达均呈现先增强后下降的趋势,其表达规律有望为脑挫伤诊断及损伤时间推断提供参考。