神经鞘氨醇磷酸胆碱对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成影响

目的 观察神经鞘氨醇磷酸胆碱 (Sphingosylphosphorylcholine ,SPC)对原代培养人真皮成纤维细胞DNA合成的影响。方法 利用儿童包皮组织行人真皮成纤维细胞原代培养 ,采用不同浓度SPC处理培养的细胞 ,测定3H TdR掺入量。结果 SPC浓度为 2 μM时 ,3H TdR掺入量明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,5 μM时3H TdR掺入量达高峰 ,而后逐渐降低 ,2 0 μM时3H TdR掺入量为最低。结论 在一定浓度范围内SPC能明显促进原代培养人真皮成纤维细胞DNA的合成 ,在人类皮肤创伤愈合的治疗领域中 。

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞基因表达的影响

目的利用基因芯片技术分析神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞基因表达谱的影响,从基因水平探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法从经SPC处理和未处理的原代培养人皮肤成纤维细胞中抽提总RNA,制备cDNA芯片探针,与基因芯片进行杂交,扫描仪扫描芯片,扫描信号用GenPix pro3.0软件分析,利用CLASTER操作系统分析结果,TREEVIEW操作系统显示其结果,查阅SOURCE功能数据库进行每个基因的功能分析。结果基因芯片的8096个基因中有意义的信号位点为194个,按功能分为11类,表达增加1倍以上的基因为52个,表达减少50%以下的基因为49个,其中表达水平最高的基因为CTGF,其次为CYR61,IL-6等,均与创伤愈合有关。结论SPC可通过刺激成纤维细胞基因表达的变化,使成纤维细胞分泌一系列与皮肤创伤愈合有关的细胞因子,调控其增殖,从而促进创伤愈合。

神经鞘氨醇磷酸胆碱对原代培养人角质形成细胞DNA合成影响

目的观察神经鞘氨醇磷酸胆碱(Sphingosylphosphorylcholine,SPC)对原代培养的人角质形成细胞DNA合成影响,并选择最适浓度。方法原代培养人角质形成细胞,加入不同浓度的SPC,之后测定3H-TdR掺入量。结果SPC的深度为2μM时,3H-TdR掺入量最高,当SPC的浓度超过2μM时3H-TdR掺入量有下降趋势,但SPC的浓度5μM时3H-TdR掺入量仍然很高。SPC的浓度为20μM时3H-TdR掺入量降到最低点。结论SPC浓度为2μM时促进原代培养的人角质形成细胞DNA合成能力最强,但浓度超过20μM时显示有细胞毒性。SPC在促进创伤愈合的治疗中将有很好的应用前景。

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人真皮成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3和TIMP-1的影响

目的研究神经鞘氨醇磷酸胆碱(shingosylphosphorylcholine,SPC)对体外培养人真皮成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶内源性组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探索在促进皮肤创伤愈合方面SPC的作用机制。方法通过MTT的方法检测SPC在成纤维细胞增殖效率方面的作用。利用RT-PCR和Western blotting的方法检测体外培养人真皮成纤维细胞经5μmol/L SPC诱导后,表达损伤修复相关蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的情况。结果一定浓度的SPC具有促进成纤维细胞增殖的作用。5μmol/L SPC具有上调成纤维细胞表达MMP-1,MMP-3,TIMP-1 m RNA和蛋白的作用(P<0.05)。结论实验证实体外培养人真皮成纤维细胞在经SPC干预后,其表达细胞外基质调节蛋白MMP-1,MMP-3,TIMP-1的作用得到增强,提示SPC具有促进皮肤创伤愈合的作用。

神经鞘氨醇磷酸胆碱对人成纤维细胞差异表达基因的筛选

目的利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)对人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,从中克隆出差异表达基因。方法原代培养人皮肤成纤维细胞；提取经SPC处理和未处理的成纤维细胞总RNA,合成cDNA,进行2次消减杂交及2次抑制性PCR,将产物与T／A载体连接,构建SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA消减杂交文库,用RNA印迹验证阳性克隆,测序并登陆基因库寻找同源性基因。结果成功构建了SPC作用于人真皮成纤维细胞的差异表达cDNA文库；从实验组筛查的28个差异表达克隆中确定了6个差异表达基因,其中已知基因5个、新基因1个,分别为基质金属蛋白酶2,血小板反应蛋白1,催产素受体,锌指转录因子,铁传递蛋白受体等。结论神经鞘氨醇磷酸胆碱可上调人真皮成纤维细胞基质金属蛋白酶、血小板反应蛋白1、催产素受体、锌指转录因子、铁传递蛋白受体等基因表达。