1-磷酸-神经鞘氨醇预防化疗大鼠卵巢功能损害的实验研究

【目的】探讨1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)导致的大鼠卵巢功能损害的保护作用及可能机制。【方法】40只雌性SD大鼠随机分为4组,即实验对照组(生理盐水组)、CTX组、S1P+NS组及S1P+CTX组,每组10只,于结束用药的第1～2周内的动情间期处死,观察卵泡数量的变化,并采用半定量RT-PCR检测卵巢组织Bcl-2及Bax的mRNA变化。【结果】S1P+CTX组的原始卵泡、初级卵泡和生长卵泡数与S1P+NS组、对照组的差别不显著(P>0.05),而CTX组的所有卵泡数均少于其余3组,其差异均有显著性意义(P<0.01)。卵巢组织中,S1P两组Bcl-2 mRNA的表达明显高于对照组及CTX组(P<0.01),Bax mRNA表达明显低于对照组及CTX组(P<0.01);而CTX组的Bcl-2 mRNA表达明显低于对照组及S1P两组(P<0.01),BaxmRNA表达明显高于对照组及及S1P两组(P<0.01)。【结论】S1P能预防CTX导致的大鼠卵巢功能损害,其抗凋亡作用可能是通过调节Bcl-2家族成员表达而实现。

外源性1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞DNA合成的影响

目的观察外源性1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞增殖的影响。方法分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,通过制备S1P脂质体使S1P转运到骨骼肌成肌细胞内或直接加入外源性S1P,采用3 H-TdR渗入法检测S1P进入细胞内和在细胞外对骨骼肌成肌细胞DNA的合成;进一步使用磷酸神经鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SphK)活性抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇(N,N-dimethyl sphingosine,DMS)和HACPT[2-(p-hydroxyanilino)-4-(p-chlorophenyl)thiazole],观察其对S1P促进DNA合成作用的影响。结果 S1P脂质体转入可明显促进骨骼肌成肌细胞DNA合成。100～1 000nmol/L剂量范围内S1P脂质体使细胞胸腺嘧啶核苷(3 H-TdR)的摄入量较对照组增加12.3%～50.7%(P<0.01),并与剂量呈正相关。该促进作用不会被SphK活性抑制剂DMS和HACPT所阻断。S1P直接加入培养液同样能促进细胞DNA合成(P<0.01),500和1 000nmol/L剂量组3 H-TdR的摄入量较对照组分别增加18.8%(P<0.05)和26.5%(P<0.05),增幅低于同剂量的S1P脂质体。该促进作用可被DMS和HACPT所阻断。结论外源性S1P可促进体外培养的大鼠骨骼肌成肌细胞增殖,其作用可能与细胞内SphK活性增加引起细胞内S1P生成增多。

1-磷酸-神经鞘氨醇干预化疗对荷瘤小鼠卵巢功能和抑瘤效果的影响

目的探讨凋亡抑制因子1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180荷瘤小鼠卵巢功能损害的干预作用及其对肿瘤化疗效果的影响。方法将52只C57BL/6雌性小鼠随机选取10只作为空白对照组,余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为3组,即荷瘤对照组、单纯化疗组、S1P+化疗组,每组14只。用药期间动态观察动情周期及肿瘤体积变化,于用药前、用药第11天左右的动情间期分批处死小鼠,分别称取体质量、卵巢质量及肿瘤质量;采用酶联免疫吸附(ELISA)法动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平的变化;卵巢组织连续病理切片,计算原始卵泡、生长卵泡数量的变化。每组剩余小鼠与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况。结果(1)血清基础性激素水平:给药前,各组血清FSH、LH、E2水平无显著性差异(P>0.05);用药第11天左右,单纯化疗组血清FSH水平明显高于其余3组、E2水平明显低于其余3组,其差异均有显著性意义(P<0.01),但血清LH水平各组间无显著性差异(P>0.05);S1P+化疗组血清FSH、LH、E2水平与两对照组均无显著性差异(P>0.05);(2)卵泡数量及卵巢质量:用药第11天左右,单纯化疗组原始卵泡数和卵巢质量明显低于其余3组(P<0.01),其生长卵泡数亦明显低于空白对照组、荷瘤对照组(P<0.01),但与S1P+化疗组的差别无显著性意义(P>0.05)。S1P+化疗组原始卵泡数、生长卵泡数及卵巢质量与空白对照组、荷瘤对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);(3)肿瘤质量和抑瘤率:给药第11天左右,与荷瘤对照组比较,单纯化疗组、S1P+化疗组的皮下肿瘤体积增长速度均受到明显抑制,两组的肿瘤质量与荷瘤对照组相比均有显著性差异(P<0.01),且两组的抑瘤率均高于60%。结论 S1P可以在不影响肿瘤化疗效果的同时,预防化疗对小鼠卵巢功能的损害。

1-磷酸神经鞘氨醇对大鼠骨骼肌成肌细胞分化的影响

【目的】观察1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)对大鼠骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,含不同浓度S1P的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜和共焦显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法分别检测成肌细胞分化的早期特异性标志—肌球蛋白和生肌素表达的改变。使用磷酸神经鞘氨醇激酶(SphK)活性抑制剂DMS和HACPT后观察S1P对骨骼肌成肌细胞的生肌素表达的作用。【结果】S1P能明显促进骨骼肌成肌细胞细胞形成肌小管,诱导2～3 d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到6～7 d达高峰;同对照组相比随S1P浓度增高,细胞核生肌素阳性率逐渐增高(P<0.01);SphK活性抑制剂抑制S1P促进骨骼肌成肌细胞生肌素阳性率的增高(P<0.01)。【结论】体外S1P可能通过提高SphK活性调节成肌细胞向成熟肌细胞分化。

1-磷酸神经鞘氨醇对心血管系统的作用

1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)是一种有生物活性的脂质代谢产物,具有调节细胞增殖、再生、迁移及细胞内钙离子移动、黏附分子表达和激活单核细胞黏附内皮细胞等生物功效,在血管生理性再生及动脉粥样硬化斑块发生发展中起着重要作用。本文综述S1P在心血管系统中的生理病理作用。

1-磷酸-神经鞘氨醇对荷卵巢癌小鼠的抗肿瘤血管生成作用

目的探讨1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对荷卵巢癌小鼠的抗肿瘤血管生成作用。方法 BALB/c裸小鼠30只建立荷卵巢癌模型,随机分成三组,生理盐水组(NS组)、DDP组、DDP+S1P组,给药剂量为DDP组40mg/kg,DDP+S1P组5mg/kg,NS组给予等体积量生理盐水;测定抑瘤率、血清性激素、脾细胞T淋巴细胞亚群情况,并进行VEGF表达的免疫组化分析。结果给药后DDP+S1P组抑瘤率明显高于DDP组(P<0.05);DDP组给药后的血清FSH和LH显著高于给药前及NS组(P<0.05),DDP+S1P组给药前后的血清FSH与LH对比差异无统计学意义(P>0.05),与NS组差异也无统计学意义(P>0.05)。给药后,DDP组FSH及LH均明显高于DDP+S1P组及NS组(P<0.05),其余组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。给药后DDP+S1P组、DDP组与NS组CD4+/CD8+差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF染色均定位于细胞核,给药后DDP+S1P组、DDP组的VEGF阳性率均明显高于NS组(P<0.05)。结论 S1P在荷卵巢癌小鼠的应用能抑制VEGF的表达,对化疗小鼠卵巢的生殖内分泌功能起保护作用,促进T淋巴细胞细胞亚群恢复正常,从而有效发挥抑瘤效果。

血浆1-磷酸神经鞘氨醇和鞘磷脂在缺血性心肌病收缩性心力衰竭的预测价值

目的探讨血浆1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)和鞘磷脂(SM)的浓度与缺血性心肌病患者收缩性心力衰竭的关系。方法选择缺血性心肌病的患者76例,根据左心射血分数(LVEF)是否≤40%分为观察组(LVEF≤40%)和对照组(LVEF> 40%),其中观察组36例,对照组40例,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血浆中S1P和SM的水平,记录所有患者的NYHA分级和左心射血分数LVEF,比较不同NYHA分级患者的S1P和SM水平,采用ROC曲线评估S1P和SM在缺血性心肌病合并收缩性心力衰竭的预测价值。结果观察组患者中位血浆S1P水平和SM水平均显著低于对照组(P <0. 05),NYHA分级为Ⅰ和Ⅱ级的血浆S1P水平和SM水平均显著高于Ⅲ和Ⅳ级,差异有统计学意义(P <0. 01);缺血性心肌病患者的血浆S1P和SM水平呈显著的正相关(r=0. 44,P <0. 001),血浆S1P和SM水平对患者LVEF≤40%的预测价值中,S1P的灵敏度为77. 5%,特异度为72. 2%; SM的灵敏度62. 5%,特异度为69. 4%。结论血浆S1P和SM在缺血性心肌病合并收缩性心力衰竭患者中表达显著下降,且与心力衰竭分级相关,血浆S1P和SM对缺血性心肌病合并收缩性心力衰竭具有良好的临床预测价值。

SphK1-S1P-S1PRs信号通路在肝癌中的作用和机制

神经鞘氨醇激酶1(SphK1)在激素、生长因子及细胞因子的作用下活化,活化的SphK1促进具有生物活性的脂质信号分子1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)的产生,通过激活一种或几种特定的1-磷酸神经鞘氨醇受体(S1PR),从而参与多种生物学行为。SphK1、S1P以及S1PRs在肝癌、胰腺癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌及白血病等中异常表达,并在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。笔者就SphK1-S1P-S1PRs信号通路在肝癌中的作用和机制以及相关研究进展进行综述。

S1P对缺氧/复氧诱导的共培养心肌细胞和成肌细胞损伤的影响

目的探讨1-磷酸神经鞘氨醇（sphingosine 1-phosphate,S1P）对联合培养的大鼠骨骼肌成肌细胞及新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧所致细胞损伤的影响。方法体外分离与培养新生大鼠心肌细胞,并与大鼠骨骼肌成肌细胞共同培养,构建缺氧/复氧损伤模型,于复氧期开始给予S1P干预。利用2,4二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性,硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛（maleic dialdehyde,MDA）含量,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡,并比较各组间差异,从而观察S1P对共同培养新生大鼠心肌细胞和大鼠骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧诱导细胞损伤的影响。结果①新生大鼠心肌细胞在培养24h后开始贴壁生长,培养6d内细胞数量未见明显变化,培养2d后倒置显微镜下见散在的具有搏动能力的心肌细胞,第3天可见散在的心肌细胞相互间连接成合胞且可见细胞搏动,4~5d呈同一节律的搏动。②100、500、1 000nmol/L S1P均可减少共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧损伤后LDH活性和MDA含量,即可减轻复氧所诱导的细胞损伤。③S1P可抑制共培养心肌细胞和骨骼肌成肌细胞缺氧/复氧损伤后的细胞凋亡。结论 S1P可减少因复氧所诱导的共同培养细胞损伤,抑制细胞凋亡。

LDB2在肺癌组织中的表达及与S1PR1的相关性分析

目的探讨LIM域结合蛋白2(LDB2)在肺癌组织中的表达及其与1-磷酸神经鞘氨醇受体1(S1PR1)的相关性。方法选取2010年4月至2011年5月南通市肿瘤医院就诊的52例肺癌患者的癌组织作为实验组,相应的癌旁组织作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组LDB2及S1PR1基因的表达水平;通过Oncomine数据库对LDB2的表达结果进行验证,并分析其与临床病理参数之间的关系;绘制ROC曲线,评价其对肺癌的诊断价值;利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析其与肺癌预后的关系;同时检测其与S1PR1的相关性。结果LDB2基因在肺癌组织中的表达量为0.158(0.062,0.383),癌旁组织中表达量为0.403(0.261,0.711),两组间差异具有统计学意义(U=700.0,P<0.01)。Oncomine数据库共检索出9项符合筛选条件的研究,其LDB2基因均呈低表达(P<0.01)。肺癌组织中LDB2基因的表达与性别、年龄、吸烟情况、病理类型、肿瘤大小、TNM分期及是否淋巴结转移均无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果表明,当ROC曲线下面积(AUC ROC)为0.741(95%CI:0.643~0.839),cut-off值取0.247时,LDB2筛查肺癌的敏感性为80.8%,特异性为61.5%。Kaplan-Meier生存分析发现,低表达LDB2患者的5年总生存期显著低于高表达患者(P<0.01)。S1PR1基因在肺癌组织中表达量为0.710(0.337,1.523),在癌旁组织中的表达量为1.582(0.913,3.533),两组间差异具有统计学意义(U=780.0,P<0.01),且肺癌组织中LDB2与S1PR1的表达水平呈正相关(r=0.827,P<0.01)。结论LDB2及S1PR1在肺癌中均低表达且呈强相关性,两者在肺癌的发生、发展中具有重要的作用。

三阴型乳腺癌中S1PR1、S1PR4的表达及其临床意义

目的探讨1-磷酸神经鞘氨醇受体1(sphingosine-1 phosphate receptor 1,S1PR1)和1-磷酸神经鞘氨醇受体4(sphingosine-1 phosphate receptor 4,S1PR4)在三阴型乳腺癌(triple-negative breast carcinoma,TNBC)中的表达,分析两者与TNBC临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法和图像分析软件检测72例TNBC中S1PR1、S1PR4和CD68的表达,分析S1PR1、S1PR4与TNBC临床病理特征的相关性。结果 S1PR1高、中、低表达组的Ki-67增殖指数分别为48.89%、36.11%和26.48%,三组差异有统计学意义(P<0.001)。S1PR4高、中、低表达组的Ki-67增殖指数分别为42.83%、31.43%和28.93%,三组差异有统计学意义(P=0.007)。S1PR1高、中、低表达组的淋巴结转移率分别为31.4%、48.6%和20.0%,差异有统计学意义(P=0.012)。S1PR4高、中、低表达组的淋巴结转移率分别为54.3%、40.0%和5.7%,差异有统计学意义(P=0.010)。S1PR1高、中和低表达组的CD68阳性率分别为47.22%、42.59%和31.48%,差异有统计学意义(P=0.036)。不同S1PR1表达组间和不同S1PR4表达组间的TNBC生存率差异均无统计学意义(P=0.209,P=0.593)。结论 S1PR1、S1PR4高表达的TNBC具有高增殖活性和淋巴结转移率,且肿瘤间质巨噬细胞数量增加,S1PR1、S1PR4表达与TNBC的生存无关。

碱性神经酰胺酶生化特性、生物学功能及在肝癌中的作用

碱性神经酰胺酶(alkaline ceramidase,ACER)是神经酰胺酶(ceramidases,CDase)的一种,现已发现3种,分别是ACER1、ACER2、ACER3.碱性神经酰胺酶能催化水解神经酰胺(ceramide,Cer)生成神经鞘氨醇(sphingosine,SPH),SPH进一步磷酸化生成1-磷酸神经鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P).Cer、SPH和S1P是具有生物活性的最重要的神经鞘脂代谢产物之一,ACERs通过催化SPH的产生、调控Cer和S1P的平衡,从而调控细胞的增殖、分化、存活、凋亡,并影响相关疾病的发生发展.本文就ACER的生化特性、生物学功能及其在细胞行为、相关疾病尤其是在肝癌中的作用进行探讨.

化疗及放疗对卵巢的影响及预防

随治疗方法不断完善及新技术应用,肿瘤患者的生存率明显提高。但如何保持放化疗后各重要器官的生理功能,尤其是年轻患者的卵巢功能这个临床新问题日益引起临床医生的重视。详细综述有关放化疗后卵巢的损害及预防的最新研究动态。

要闻速递

欧盟批准多发性硬化症治疗药物芬戈莫德上市 近日，欧盟委员会批准诺华公司芬戈莫德（fingolimod，Gilenya）口服制剂上市，用于多发性硬化症复发患者的一线治疗。本品是神经鞘氨醇1－磷酸受体调节剂的首个获批产品。

治疗多发性硬化症新药——盐酸奥扎莫德(ozanimod hydrochloride)

多发性硬化症(MS)是一种受免疫系统攻击、发生中枢神经系统白质脱髓鞘病变、使信号通道在大脑和身体之间传导受阻的自身免疫性疾病。常累及大脑、脊髓白质、皮质下结构、脑干、小脑和视神经等。随着病情进展,该病最终可导致患者肌肉协调性丧失,视力减弱、功能丧失。奥扎莫德(ozanimod)最初由加州美国斯克利普斯研究所(The Scripps Research Institute,TSRI)研发,2009年4月,TSRI与美国Receptos生物制药公司签订独家许可协议,后者获得新型1-磷酸神经鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)及S1P1和S1P5双重受体调节药专利权。协议规定,若Receptos公司不能合理使用和尽力开发奥扎莫德并使之商业化,TSRI有权终止许可协议。2015年8月,Receptos公司被美国Celgene细胞基因公司收购。Celgene公司将奥扎莫德开发用于治疗复发型多发性硬化症、溃疡性结肠炎和克罗恩病(Crohn's)等自身免疫性疾病。2018年2月,Celgene公司曾向美国食品药品管理局(FDA)提交奥扎莫德胶囊治疗MS新药上市申请(NDA),因未充分说明临床前和临床试验药理研究存在活性代谢物CC112273的性质,被FDA拒绝接受NDA。2019年11月,Celgene公司被美国百时美施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb,BMS)收购。Celgene公司补充奥扎莫德动物实验长期毒性等一系列资料及2项Ⅲ期临床试验完整数据,于2019年3月13日再度提交NDA,FDA于2020年3月25日批准盐酸奥扎莫德胶囊上市,用于治疗成人复发型MS,包括临床孤立综合征(CIS)、复发缓解型多发性硬化症(RRMS)及继发进展型多发性硬化症(SPMS)。该药商品名为Zeposia^®。该文对盐酸奥扎莫德胶囊非临床和临床药理毒理学、临床研究、不良反应、适应证、剂量与用法、用药注意事项及知识产权状态和国内外研究进展等进行介绍。

失功能高密度脂蛋白与心血管疾病研究进展

高密度脂蛋白胆固醇被认为是心血管疾病的重要保护因素,它在血清中的水平与心血管疾病风险呈负相关。然而在心血管疾病中,高密度脂蛋白的蛋白质、脂质或microRNAs等发生变化,使其转变为失功能高密度脂蛋白,失功能高密度脂蛋白具有促进动脉粥样硬化、促氧化、促炎等特性。本文对失功能高密度脂蛋白的结构和功能改变进行概括。

抗氧化剂改善卵巢功能的研究进展

氧化应激导致女性卵巢内卵泡的损伤和凋亡,加速始基卵泡的活化和丢失,从而加速女性卵巢功能的衰竭。抗氧化剂作为辅助治疗可以有效改善卵巢功能,本研究将分别阐述目前在研究上取得明显进展的抗氧化剂有褪黑素、1-磷酸神经鞘氨醇(S1P)、三氯合碲酸铵(AS101)、辅酶Q10和其他抗氧化剂等的作用机制和研究进展。

木犀草素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠SPH/SPHK1/S1P1通路及神经元凋亡的影响

目的探讨木犀草素(Luteolin)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)大鼠神经酰胺-鞘氨醇(Sphingosine, SPH)/鞘氨醇激酶1(Sphingosine kinase 1,SPHK1)/1-磷酸鞘氨醇受体1(Sphingosine-1-phosphate 1,S1P1)通路蛋白表达水平及神经元凋亡的影响。方法取雌性Wistar大鼠,采用注射豚鼠脊髓免疫抗原法建立EAE模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型(EAE)组,Luteolin低(5mg/kg)、中(25 mg/kg)、高(50 mg/kg)剂量组,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组(61.7 mg/kg),每组各10只;另取10只雌性Wistar大鼠,注射等量生理盐水,作为空白对照(Control)组;各组于造模15 d后开始给药,Luteolin低、中、高剂量组经腹腔注射相应剂量Luteolin药物,芬戈莫德(FTY720)阳性对照组灌胃给予相应剂量的FTY720,EAE组和Control组灌胃和腹腔注射等量生理盐水,各组连续给药14 d, 2次/d;各组大鼠于末次给药12 h后对大鼠EAE临床症状进行评分;取脊髓组织,用苏木精-伊红染色(Hematoxylin eosin, HE)及固蓝(Luxol fast blue, LFB)染色法检测大鼠髓鞘组织病理表现及脱髓鞘面积;原位缺口末端转移酶标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling, TUNEL)法检测髓鞘组织中神经元的凋亡情况并计算凋亡率;以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测髓鞘组织中通路蛋白SPHK,SPH,S1P1及凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12(Cystein-asparate protease-12,Caspase-12)蛋白相对表达水平。结果与Control组比较,EAE组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均升高(P<0.05);与EAE组比较,Luteolin低、中、高剂量组及芬戈莫德(FTY720)阳性对照组大鼠EAE临床症状评分、脊髓组织炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度、神经元凋亡率、髓鞘组织中SPH,SPHK1,S1P1及Caspase-12蛋白表达水平均降低(P<0.05),且Luteolin各剂量组上述指标水平呈剂量依赖性;Luteolin高剂量组与芬戈莫德(FTY720)阳性对照组的上述指标水平均无明显差异(P>0.05)。结论 Luteolin可能通过抑制EAE模型大鼠髓鞘组织SPHK,SPH,S1P1蛋白表达来抑制EAE大鼠脱髓鞘病变及神经元凋亡。