孕期酒精暴露诱导神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马苔藓细胞凋亡

目的探讨神经酰胺对孕期酒精暴露所诱导的小鼠神经细胞凋亡的影响。方法建立神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS2-/-)小鼠和野生型(WT)小鼠的孕期酒精暴露模型,将出生后的不同基因型仔鼠(共360只)分为对照组和酒精组。用酶学法检测生后0 d(P0)仔鼠血清神经鞘磷脂(SM)含量,利用免疫荧光染色法观察对照组与模型组各年龄点仔鼠齿状回苔藓细胞凋亡数量的变化,免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织Caspase-8、Caspase-3激活蛋白的相对表达量。结果酒精暴露后仔鼠血清SM水平降低,且具有剂量依赖性(F=41.08,P<0.05);SMS2-/-仔鼠血清SM水平低于同组WT仔鼠(F=53.34,P<0.01)。酒精诱导WT和SMS2-/-仔鼠苔藓细胞凋亡(F=15.61,P<0.05),有剂量依赖性和长时程效应,与同年龄、相同处理条件的WT仔鼠相比,SMS2-/-仔鼠苔藓细胞凋亡数量较多(F=11.72,P<0.05)。Western blotting检测结果与免疫荧光结果一致。结论 SMS2基因缺失使血清SM水平降低,可引起神经酰胺在体内蓄积;神经酰胺促进酒精暴露诱导神经细胞凋亡的过程;孕期酒精暴露主要通过死亡受体途径诱导神经细胞凋亡的发生。

鞘磷脂合成酶2通过Wnt/β-catenin通路调控卵巢癌TOV-21G细胞的恶性生物学行为

目的:探讨鞘磷脂合成酶2(SMS2)是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌(OC)TOV-21G细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及其机制。方法:收集武汉市第三医院2022年7月至2023年5月间确诊的21例OC患者的癌及癌旁组织标本,免疫组化法检测OC组织SMS2表达水平。体外培养TOV-21G细胞,将细胞分为对照组、shRNA慢病毒阴性对照组(sh-NC组)、SMS2 shRNA慢病毒组(sh-SMS2组)、Wnt/β-catenin通路激活剂组LiCl(LiCl组)和sh-SMS2+LiCl组。Edu染色法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力及凋亡水平,WB法检测细胞中SMS2、Ki67、cyclin D1、BAX、c-caspase3、Bcl-2及Wnt/β-catenin通路蛋白(β-catenin、c-Myc、MMP-9)的表达。构建TOV-21G细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低SMS2对移植瘤生长和SMS2、β-catenin表达的影响。结果:与癌旁组织比较,OC组织中SMS2呈高表达(P<0.01)。转染sh-SMS2后,TOV-21G细胞中SMS2表达水平显著降低(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力及Bcl-2、β-catenin、c-Myc、MMP-9蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、BAX、c-caspase3蛋白表达均显著升高(均P<0.05);LiCl处理能逆转敲低SMS2对TOV-21G细胞增殖、迁移和侵袭及Wnt/β-catenin通路的抑制作用(均P<0.05)。体内成瘤实验显示,敲低SMS2抑制裸鼠移植瘤的生长及SMS2、β-catenin蛋白的表达(均P<0.05)。结论:敲低SMS2表达通过Wnt/β-catenin信号通路抑制OC TOV-21G细胞的增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡,同时LiCl处理则能逆转敲低SMS2对TOV-21G细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除对小鼠血清高密度脂蛋白3功能的影响

背景和目的已有报道显示，神经鞘磷脂合成酶2基因缺失（sphingomyelinsynthase2knockout，SMS2。一）有抗动脉粥样硬化及抗炎作用。本文以SMS2I／一小鼠为研究对象，旨在探讨神经鞘磷脂（sphingomyelin，sM）代谢与血清高密度脂蛋白（high—den—sitylipoprotein，HDL）抗氧化、抗炎症、保护内皮能力之间的关系。方法雄性28周龄SMS2-/-小鼠16只为实验组，同性别同周龄C57BL／6J（wild—type，wT）小鼠16只为对照组。禁食12h后眼球取血，酶学方法检测血脂，超速离心法提取血清HDL3，测定HDl3抗铜离子诱导脂蛋白氧化的能力（以生成TBARS含量表示）、

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠的饲养繁殖和鉴定

目的:繁殖和鉴定神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因敲除(-/-)小鼠。方法:将引进的SMS2杂合子(+/-)小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,一旦获得雄性和雌性SMS2纯合子(-/-)小鼠,便按照同样方法进行繁殖;用酚氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型做出鉴定;将SMS2野生型(+/+)小鼠的产仔数作为正常对照组,与SMS2(+/-)和SMS2(-/-)小鼠的产仔数进行比较,用单因素方差分析、Dunnett检验处理数据。结果:SMS2(-/-)小鼠的饲养繁殖鉴定获得成功,单因素方差分析SMS2(+/+)小鼠、SMS2(+/-)小鼠以及SMS2(-/-)小鼠三组产仔数比较无显著性差异(P>0.05),Dunnett检验SMS2(+/-)小鼠与正常组比较产仔数无显著性差异(P>0.05),SMS2(-/-)小鼠与正常组比较产仔数无显著性差异(P>0.05)。结论:用正确的繁殖方法和鉴定方法可以成功获得SMS2(-/-)小鼠。

神经鞘磷脂合成酶2基因敲除小鼠海马神经细胞自噬现象

目的利用神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因敲除小鼠探讨神经酰胺对海马神经细胞自噬现象的影响。方法将SMS2杂合子(SMS2+/-)小鼠采用杂交、回交、互交的方法进行繁殖,用酚-氯仿提取法提取小鼠基因组DNA,PCR扩增目的基因,琼脂糖凝胶电泳对小鼠基因型作出鉴定,建立纯合子(SMS2-/-)小鼠模型;采用透射电子显微镜、免疫荧光染色及Western blotting技术观察生后第7天(P7)、P14和P30 SMS2-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬的发生(每种方法每个时间点8只小鼠)。结果 1.SMS2-/-小鼠海马CA1区神经细胞自噬现象:电子显微镜下,模型组海马神经元内出现较多自噬体或自噬溶酶体样结构。光镜下,模型组P7、P14和P30 CA1区神经元自噬细胞数较对照组高(P<0.01);2.自噬相关蛋白Beclin-1对于自噬的调节作用:Beclin-1在模型组与对照组间的表达规律与微管相关蛋白1轻链3(MAPLC3)基本一致,P7、P14、P30模型组Beclin-1阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)。Beclin-1与MAPLC3两者在同一细胞中基本呈重叠表达;3.Western blotting检测各组海马CA1区神经细胞MAPLC3蛋白的相对表达量与上述结果一致。结论 SMS2-/-小鼠海马神经细胞内神经酰胺增高,神经酰胺不仅促进细胞凋亡,同时促进自噬,造成小鼠海马神经细胞自噬现象增强。

神经鞘磷脂合成酶2基因沉默对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因沉默对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响以及机制分析。方法体外培养MCF-7细胞,分别转染siRNA control(SiR-Con)和SMS2 siRNA(SiR2),用MTT法筛选肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导MCF-7细胞凋亡的剂量(IC50)、采用薄层层析法(TLC)检测SMS2基因沉默后MCF-7细胞内SMS酶活性水平并用Hoechst 33258/PI染色法检测细胞凋亡情况。采用qRT-PCR和Western blot检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。结果随着TNF-α(50～800 ng/mL)浓度的增加,对MCF-7细胞增殖抑制率也逐渐增加,IC50为205.7 ng/mL。经TNF-α作用后,TNF-α组、SiR-Con组和SiR2组MCF-7细胞内SMS酶活性灰度值明显低于CTL组,且细胞凋亡率和坏死率均高于CTL组;以SiR2组细胞SMS酶活性为最低,凋亡率和坏死率为最高(P <0.05)。SiR2组细胞Bcl-2表达量低于其他3组,而Bax和caspase-3基因表达则高于其他3组(P <0.05)。结论 SMS2基因沉默可降低MCF-7细胞内SMS酶活性,通过抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,同时上调促凋亡基因Bax和caspase-3的表达,提高TNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

神经鞘磷脂合成酶2缺乏对小鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨神经鞘磷脂合成酶2缺乏对小鼠学习记忆能力的影响,方法:实验采用雄性的野生型小鼠(WT)和神经鞘磷脂酶合成酶2缺乏小鼠(KO),每组10只,采用Morris水迷宫实验进行7 d的定位航行试验检测,之后进行空间探索试验,以检测小鼠的学习记忆能力。结果:定位航行试验检测结果显示,两组小鼠找到平台的潜伏期、游泳距离均无显著性差异(P>0.05);空间探索试验检测结果显示,两组小鼠的目标象限滞留时间占总时间的百分比和小鼠穿越平台区的次数也无显著性差异(P>0.05);但野生型小鼠的搜索策略优于神经鞘磷脂合成酶2缺乏小鼠(P<0.05)。结论:神经鞘磷脂合成酶2缺乏影响小鼠的搜索策略,但不影响小鼠的空间学习记忆能力。

神经鞘磷脂合成酶2与阿霉素致乳腺癌细胞线粒体损伤的相关性

目的:探讨神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)的表达与阿霉素(ADR)致乳腺癌细胞线粒体损伤的相关性.方法:采用过表达慢病毒感染法构建并筛选SMS2过表达的乳腺癌MCF-7细胞.CCK-8实验检测细胞对ADR的IC50值,选择适当浓度的ADR药物作用条件处理细胞后,使用MitoSOX试剂染色检测线粒体ROS水平,检测细胞内ATP水平以评估线粒体功能;电镜观察线粒体超微结构的异同;Western blot检测线粒体细胞色素C的释放水平和细胞凋亡相关蛋白Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase 3、Bcl-2、Bax表达水平.结果:SMS2过表达的MCF-7细胞对ADR的IC50值为(2.42±0.073)μmol/L,而对照组细胞IC50值为(0.62±0.036)μmol/L(P<0.01).2μmol/L ADR处理细胞24 h后,SMS2过表达的MCF-7细胞内线粒体ROS水平降低(P<0.05);细胞内ATP水平增加(P<0.05);电镜观察示线粒体结构性损伤减轻;线粒体细胞色素C的释放水平降低(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加,促凋亡蛋白Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase 3、Bax的表达减少(P<0.05).结论:SMS2过表达可能通过减轻ADR对乳腺癌MCF-7细胞线粒体的损伤作用,进而抑制细胞凋亡.

siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响

目的研究鞘磷脂合酶2(sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响。方法 SMS2特异性siRNA转染至Caco-2细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2-特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco-2细胞中P-gp及MRP2功能的影响。结果应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱。结论SMS2基因表达下调对Caco-2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。

鞘磷脂酶A2及鞘磷脂合成酶双功能抑制剂研究

本文针对潜在抗动脉粥样硬化靶标-磷脂酶A2及鞘磷脂合成酶,设计系列小分子双功能抑制剂,最终经合成得到3个目标化合物,本文旨在共同借鉴学习,希望能对各位同行有所帮助。

苯丙胺通过抑制蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β/脑衰蛋白反应介导蛋白2信号通路损伤多巴胺神经细胞

目的探讨苯丙胺损伤多巴胺神经细胞的信号通路机制。方法通过腹腔注射苯丙胺建立小鼠多巴胺细胞损伤模型,将小鼠随机分为正常组、生理盐水组、苯丙胺1 d组、7 d组、14 d组和28 d组,每组10只。在PC12细胞中加入苯丙胺建立细胞损伤模型。通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察小鼠纹状体多巴胺神经纤维和PC12细胞的变化,通过免疫印迹法检测纹状体和PC12细胞蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/脑衰蛋白反应介导蛋白2(CRMP-2)通路蛋白的变化。结果苯丙胺损伤小鼠纹状体多巴胺神经纤维和PC12细胞的突起,并引起磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)表达减少,磷酸化CRMP-2(p-CRMP-2)表达增多。给予Akt上游的激活剂神经生长因子和GSK-3β的抑制剂SB216763,则增加p-Akt和p-GSK-3β的表达,抑制p-CRMP-2的表达,并且对PC12细胞的突起有保护作用。结论抑制Akt/GSK-3β/CRMP-2信号通路是苯丙胺损伤多巴胺神经细胞的机制之一。

长期酒精暴露对SMS2^-/-小鼠肝脑的损伤及机制

目的观察长期酒精暴露引起的肝脑损伤与氧化应激的关系,探讨酒精引起多系统损伤的机制,神经酰胺在酒精暴露诱导海马应激损伤中的调节作用。方法建立C57BL6J野生小鼠和神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(SMS-/-2)小鼠酒精暴露模型,利用HE和Masson染色观察肝脏细胞和结构变化,透射电子显微镜观察肝脏超微结构变化,免疫荧光染色法观察对照组与模型组小鼠海马CA1区氧化应激引起的阳性细胞数量变化,免疫印迹技术检测海马组织c-Fos、核因子-κB(NF-κB)激活蛋白的相对表达量。结果酒精暴露导致野生型和SMS-/-2小鼠肝细胞脂肪变性和肝纤维化,并有Mallory小体形成和炎症细胞浸润。免疫组织化学染色显示,酒精暴露后野生型和SMS-/-2小鼠海马c-Fos、NF-κB阳性细胞表达增多(P<0.01)且具有剂量依赖性;与相同处理条件的野生型小鼠相比,SMS-/-2小鼠海马c-Fos、NF-κB阳性细胞表达较多(P<0.05)。免疫印迹技术检测各组间小鼠海马组织cFos、NF-κB蛋白相对表达量与上述结果一致。结论长期酒精暴露引起肝脏和神经系统损伤的病理基础是氧化应激和炎症反应;神经酰胺参与酒精暴露诱导与促进肝脑细胞损伤的过程;酒精、胰岛素抵抗和神经酰胺相互作用造成肝脑损伤。

GSK3/Nrf2调控的生物节律在机体衰老中的规律

背景:生物节律(昼夜节律)紊乱是一个典型的与衰老有关的问题,维持生物节律的正常运作可能是一种很有前景的抗衰老策略。核转录因子NF-E2相关因子2的表达具有生物节律;糖原合成酶激酶3系统代表了一个“调节阀”,它控制核转录因子NF-E2相关因子2水平的细微振荡。抗氧化基因转录水平的昼夜变化可以影响生物体对氧化应激的反应,但是糖原合成酶激酶3/NF-E2相关因子2在调节机体衰老中的具体分子机制仍令人困惑。目的:拟通过对该领域文献的回顾,寻找糖原合成酶激酶3/核转录因子NF-E2相关因子2调控的生物节律在机体衰老中的一般规律。方法:文献资料法通过对有关“糖原合成酶激酶3、核转录因子NF-E2相关因子2、生物节律以及衰老”等相关文献进行检索、查阅和筛选,为全文的分析奠定理论基础。对比分析法通过对所得到文献进行阅读分析,比较文献之间的异同点,为论点提供合理的理论支撑。通过对文献的进一步对比分析,理清相关指标间的关系,为全文的分析明确思路。结果与结论:①糖原合成酶激酶3可通过对节律基因的调节间接调控核转录因子NF-E2相关因子2的表达;②糖原合成酶激酶3和核转录因子NF-E2相关因子2是抗衰老程序的组成部分,且与生物节律相关;③并且糖原合成酶激酶3/核转录因子NF-E2相关因子2参与多种代谢途径,包括与衰老相关疾病(2型糖尿病和癌症)和神经退行性疾病相关的代谢途径。

长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗及视网膜微血管损伤:神经鞘磷脂的可能作用

目的探讨长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对小鼠血视网膜屏障的损伤以及神经鞘磷脂(SM)可能的作用。方法选取神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因敲除(SMS2-/-)和野生型(WT)小鼠76只,酒精暴露建立动物模型。用血糖仪测定血糖浓度,酶联免疫法(ELISA)测定血胰岛素浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),利用免疫荧光染色、HE和电子显微镜观察血视网膜屏障的损伤。结果长期酒精暴露引起小鼠胰岛素抵抗(P<0.05),并出现血视网膜屏障的损伤,如无细胞毛细血管数增多(P<0.05),星形胶质细胞数量减少(P<0.05),内皮细胞和周细胞线粒体肿胀,嵴消失,基底膜欠清晰,呈剂量依赖性。和WT小鼠相比,SMS2-/-小鼠胰岛素抵抗指数较小和血视网膜屏障损伤程度较轻(P<0.05),提示SMS2-/-小鼠有延缓胰岛素抵抗形成和减少血视网膜屏障损伤的作用。结论长期酒精暴露可以诱导胰岛素抵抗,并造成血视网膜屏障损伤,具有剂量依赖性;SMS2基因的缺失有延缓胰岛素抵抗的产生和减少血视网膜屏障损伤的作用。

人参皂苷Rg1通过调节GSK-3β/PP2A活性减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的探讨人参皂苷Rg1是否通过调节GSK-3β/PP2A活性而减轻凝聚态Aβ25～35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用孕期(18±2)d的SD大鼠,分离纯化胎鼠皮层神经元。实验分为阴性对照组、模型组、LiCl处理组、Rg1预处理组。阴性对照组不加任何处理因素;模型组用20μmol/LAβ25～35作用于皮层神经元12h;LiCl处理组用10mmol/LLiCl和20μmol/LAβ25～35共同作用于皮层神经元12h;Rg1预处理组分别用5、10、20、40、80μmol/LRg1预处理皮层神经元24h,再加入20μmol/LAβ25～35作用12h。通过免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测皮层神经元Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK-3β)表达水平,通过非放射性免疫法检测皮层神经元蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性。结果模型组Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均增加,但PP2A的活性不受影响;LiCl处理组和Rg1预处理组,Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。在Rg1预处理组中,以20μmol/LRg1预处理后Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的表达水平下降最为明显,而且PP2A的活性明显增强(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可通过上调PP2A活性和下调GSK-3β活性从而减轻凝聚态Aβ25～35所诱导的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。

糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经PERK-Nrf2信号通路的影响

目的:观察糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经中PERKNrf2信号通路的影响。方法:将雄性SD大鼠采用STZ法造模,成功后随机分为模型对照组,弥可保组,糖痹康高、中、低剂量组,另选正常SD大鼠为正常对照组。弥可保组腹腔注射弥可保0.026 8g/(kg·d);糖痹康高、中、低剂量组依次灌胃糖痹康16.700,8.350,4.175 g/(kg·d)。所有药物均以9 g/L生理盐水配制,给药量为0.01 m L/g体质量。模型对照组和正常对照组均予等量的生理盐水灌胃,1 d 1次,连续16周。剖取大鼠坐骨神经,Western blot检测坐骨神经中磷酸化的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2);Real-time PCR检测坐骨神经中血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)mRNA表达。结果:与正常对照组对比,模型对照组大鼠坐骨神经PERK、Nrf2蛋白表达显著降低,HO-1、γ-GCS mRNA表达显著降低,差别有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组对比,弥可保组和糖痹康高、中、低剂量组大鼠坐骨神经PERK、Nrf2蛋白表达显著升高,HO-1、γ-GCS mRNA表达显著升高,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:糖痹康通过上调PERK-Nrf2信号通路表达,发挥抗氧化作用,延缓糖尿病周围神经病变进展。

当归多糖通过Akt/GSK-3β通路增强Nrf2信号传导对高糖诱导视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用及其可能机制。方法:采用不同浓度当归多糖干预视网膜神经节细胞RGC-5,MTT法检测细胞存活情况并筛选合适浓度。培养RGC-5细胞并添加50 mmol/L葡萄糖建立高糖损伤模型后,分为高糖组、当归多糖组和当归多糖+Nrf2信号通路抑制剂(ML385)组,另设对照组。当归多糖组使用100μmol/L的当归多糖处理,当归多糖+ML385组使用100μmol/L的当归多糖联合20μmol/L的ML385处理,高糖组使用50 mmol/L葡萄糖处理,对照组加入等量完全培养基。CCK-8法检测细胞存活情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA法检测各组细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;实时定量PCR法检测细胞中蛋白激酶B(Akt)mRNA、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)mRNA和核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达情况;Western blotting检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达情况。结果:当归多糖组细胞活力、GSH-Px含量、SOD含量、Nrf2 mRNA相对表达量、Bcl-2蛋白相对表达量均高于高糖组,细胞凋亡率、MDA含量、Akt mRNA相对表达量、GSK-3βmRNA相对表达量、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量、Caspase-9蛋白相对表达量均低于高糖组(P<0.05)。当归多糖+ML385组细胞活力、GSH-Px含量、SOD含量、Nrf2 mRNA相对表达量、Bcl-2蛋白相对表达量均低于当归多糖组,细胞凋亡率、MDA含量、Akt mRNA相对表达量、GSK-3βmRNA相对表达量、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量、Caspase-9蛋白相对表达量均高于当归多糖组(P<0.05)。结论:当归多糖能抑制高糖诱导的RGC-5细胞凋亡,降低细胞内氧化应激水平,可能机制为通过阻滞Akt/GSK-3β通路,提高细胞内抗氧化Nrf2表达水平。

神经鞘磷脂合成酶2基因的缺失有抗动脉粥样硬化及抗炎作用

本文以神经鞘磷脂合成酶2基因敲除(sphingomyelin synthase 2 knockout,SMS2-/-)小鼠为研究对象,旨在探讨神经鞘磷脂(sphingomyelin,SM)代谢与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生之间的关系。雄性3月龄SMS2-/-小鼠为实验组,同性别同月龄C57BL/6J(wild-type,WT)小鼠为对照组。用高脂高胆固醇饮食喂养两组小鼠,并给予胆盐以促进AS斑块的形成。喂养3个月后解剖观察小鼠主动脉弓,剖开胸腹主动脉进行油红染色以观察AS斑块发生情况;同时收集小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖刺激后,提取核蛋白用Western blot方法检测核因子κB(nuclear factor-κB,NFκB)p65含量;高脂饮食喂养前后,小鼠断尾取血,酶法测定血清SM水平,用血脂检测试剂盒检测血脂水平。结果显示,高脂饮食喂养3个月后,SMS2-/-小鼠的主动脉弓和胸腹主动脉很少形成AS斑块,而WT小鼠则产生了较多AS斑块;高脂饮食喂养前后,SMS2-/-小鼠血清SM水平均明显低于WT小鼠(P<0.05),而血脂水平并无显著性差异(P>0.05);高脂饮食喂养后,SMS2-/-小鼠腹腔巨噬细胞经过脂多糖刺激产生的NFκBp65含量明显低于WT小鼠。以上结果提示,SMS2基因的缺失有抗AS及抗炎作用,因而可能成为临床治疗的新策略。

选择性环氧合酶-2抑制剂与神经母细胞瘤

环氧合酶（cyclooxgenase，COX）又称前列腺素合成酶（prostaglandin synthetase），是花生四烯酸（arachidonic acid）代谢的限速酶。神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是小儿时期最常见的恶性实体肿瘤之一，其恶性程度高，临床表现各异，早期诊断困难，而且较早发生多部位转移，因而病死率一直居高不下，严重威胁广大儿童的生命健康。

GCS通过MEK/ERK通路调控白血病多药耐药细胞凋亡相关基因bcl-2的表达

目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)是否通过MEK/ERK信号通路调控凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导人白血病K562/A02细胞多药耐药。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰K562/A02细胞中GCS的表达,real-time PCR、Western blotting检测Bcl-2、磷酸化及总ERK水平;用MEK特异性化学抑制剂U0126抑制MEK/ERK信号通路的活化,real-time PCR与Western blotting技术分别检测Bcl-2 mRNA与蛋白水平;CCK-8试剂盒检测细胞存活情况。结果:与阴性对照组比较,GCS siRNA明显抑制K562/A02细胞GCS和Bcl-2的表达,并抑制MEK/ERK信号通路的活化;U0126使Bcl-2 mRNA及蛋白水平呈浓度依赖性下降,并使K562/A02细胞ADM敏感性增加。结论:GCS通过MEK/ERK信号通路调控K562/A02细胞株中凋亡相关基因bcl-2的表达,从而诱导白血病细胞多药耐药。