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猪源2型链球菌福建株cps2j基因PCR检测及序列分析 被引量:1
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作者 俞伏松 郭长明 +2 位作者 车勇良 林天龙 陈少莺 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第17期10-14,共5页
设计并合成一对扩增2型猪链球菌cps基因的特异性引物,以猪2型链球菌福建株(SS2PFJ07)DNA为模板,筛选最佳反应条件,建立检测cps2j基因的PCR方法,并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下:应用该方法对猪2型链球菌福建株... 设计并合成一对扩增2型猪链球菌cps基因的特异性引物,以猪2型链球菌福建株(SS2PFJ07)DNA为模板,筛选最佳反应条件,建立检测cps2j基因的PCR方法,并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下:应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增,均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段,而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA;SS2PFJ07cps2j基因部分核苷酸及其推导的氨基酸序列与猪链球菌2型不同菌株的同源性分别达98.7%~100%和97.8%~100%。上述结果表明建立并优化的猪2型链球菌cps2j基因的PCR检测方法敏感性好、特异性高,能用于2型猪链球菌的分子流行病学调查和快速检测;序列分析表明猪2型链球菌福建株与国内外8株标准株之间同源性高、亲缘关系密切。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 福建株 cps2j基因 PCR
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马来丝虫福建株成虫与幼虫氨基酸组成及含量的测定分析 被引量:1
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作者 玉莹 李杰 +1 位作者 崔昱 商振华 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期63-64,共2页
关键词 马来丝虫 福建株 成虫 幼虫 氨基酸
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猪圆环病毒2型福建株的全基因组克隆与序列分析 被引量:1
3
作者 陈琼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期194-198,共5页
根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型全基因序列设计一对扩增PCV-2全基因的引物,建立扩增PCV-2全序列的PCR方法,并应用此方法从福建省不同地区采集的疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的仔猪肺组织病料中扩增出PCV-2全基因组(1 767 bp)... 根据GenBank上公布的猪圆环病毒2型全基因序列设计一对扩增PCV-2全基因的引物,建立扩增PCV-2全序列的PCR方法,并应用此方法从福建省不同地区采集的疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的仔猪肺组织病料中扩增出PCV-2全基因组(1 767 bp),将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-PCV-2,并对其进行序列测定,然后对全基因组进行同源性和遗传进化分析。结果表明,福建省不同地区采集的猪肺组织扩增出的PCV-2全序列与GenBank上公布的的全基因组同源性介于94.9%-99.8%之间,ORF1的同源性介于97.2%-99.9%,ORF2的同源性也很高,介于97.7%-99.8%之间。其中福州株、福清株和漳州株与中国农大报道的12株、郑州株5株、杭州4株、武汉株3株、上海株2株、扬州2株、南京1株和兰州1株共30株在一个进化分支上,同源性也高达99.3%。本研究有助于监测PCV-2的疫源和进化关系,为进一步深入研究福建省生猪猪圆环病毒来源奠定一定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 基因组 克隆 序列分析 福建株
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新分离的无乳鼠神经毒力的登革2型病毒福建株基因组结构特征的研究
4
作者 于曼 赵月峨 +9 位作者 胡志君 苑锡同 耿丽卿 赵卫 范宝昌 王鹏程 陈水平 段鸿元 杨佩英 秦鄂德 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期422-426,共5页
目的 测定对乳鼠不致病登革 2型病毒福建株 (DEN2 FJ11)全基因组序列 ,探讨其基因组结构与功能关系。方法 采用RT PCR和 5′、3′端RACE方法测定病毒基因组的全序列 ,并运用DNASTAR软件的Clustal法将该毒株的序列与其它 6株登革 2型... 目的 测定对乳鼠不致病登革 2型病毒福建株 (DEN2 FJ11)全基因组序列 ,探讨其基因组结构与功能关系。方法 采用RT PCR和 5′、3′端RACE方法测定病毒基因组的全序列 ,并运用DNASTAR软件的Clustal法将该毒株的序列与其它 6株登革 2型病毒进行比较 ,分析其进化关系。结果 DEN2 FJ11株基因组全长 10 72 3个核苷酸 ,含有 1个单一的读码框架 ,编码 3391个氨基酸。 5′、3′端非编码区 (NCR)长度分别为 96和 45 4个核苷酸。DEN2 FJ11与同时分离的对乳鼠致病的FJ10株之间共有 32个核苷酸不同及 13个氨基酸的变化 ,其中 8个氨基酸是其极性或电荷的改变。 3′端非编码区 134位的单个核苷酸变化导致其二级结构改变。DEN2 FJ11与FJ10株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为 99.7%和 99.6 %,这 2株病毒与印度尼西亚株亲缘关系最近 ,同为Ⅳ基因型。结论 DEN2 FJ11株基因组与FJ10株及其它登革 2型病毒株类似。位于病毒编码区的 8个氨基酸差异及 3′端非编码区 134位的核苷酸可能与病毒的乳鼠神经毒力有关。 展开更多
关键词 登革2型病毒福建株 全基因组 序列分析 登革热
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猪链球菌2型福建分离株的主要毒力基因分析 被引量:12
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作者 方勤美 黄绍谦 +2 位作者 俞伏松 朱继昌 林天龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期65-68,共4页
目的为了解福建地区猪链球菌2型菌株毒力因子分布情况。方法选取谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)及毒力相关序列orf2等7个猪链球菌2型主要毒力... 目的为了解福建地区猪链球菌2型菌株毒力因子分布情况。方法选取谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)及毒力相关序列orf2等7个猪链球菌2型主要毒力基因,分别设计了7对引物,采用PCR方法,对本室分离保存的猪链球菌2型福建分离株的毒力基因进行分析。结果从屠宰生猪体内分离的4个猪链球菌2型菌株和SS2PFJ07株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef-/sly-/fb-ps+/orf2+,另1株从生猪体内分离的分离菌株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef+/sly+/fbps+/orf2+。结论福建地区生猪中猪链球菌2型至少有两种毒力基因型。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 福建分离 毒力基因
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猪流感福建流行毒株的分离、鉴定 被引量:7
6
作者 魏宏 张德明 +4 位作者 庄向生 周伦江 王隆柏 陈少莺 刘玉涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期119-121,共3页
疑似猪流感(SIV)病猪的鼻拭子尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,72 h后致死鸡胚.取尿囊液进行血凝试验,分离物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集;取尿囊液接种鸭胚、鹅胚,48 h后即致死鸭胚、鹅胚;取尿囊液接种鸡、鸭、鹅胚等成纤维原代细胞... 疑似猪流感(SIV)病猪的鼻拭子尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,72 h后致死鸡胚.取尿囊液进行血凝试验,分离物能使多种禽类和哺乳动物红细胞发生凝集;取尿囊液接种鸭胚、鹅胚,48 h后即致死鸭胚、鹅胚;取尿囊液接种鸡、鸭、鹅胚等成纤维原代细胞和Vero、PK、BHK、MA-104等传代细胞,发现病毒能使成纤维细胞、Vero出现变圆、皱缩、脱落等病变;尽管PK、BHK21、MA-104等细胞接种后不出现病变,但培养上清能凝集鸡红细胞;亚型鉴定该株病毒属猪流感病毒H1N1.进行病毒对BALB/C小鼠、信鸽、8周龄仔猪的回归试验,发现该株流感病毒能使信鸽和8周龄仔猪发病;BALB/C小鼠接种病毒后临床上不表现症状,但体内产生针对该病毒的抗体. 展开更多
关键词 猪流感 福建分离毒 分离 鉴定
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猪繁殖和呼吸综合征病毒福建毒株ORF5的序列分析及原核表达 被引量:2
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作者 郭川 吴国平 +2 位作者 郑忠辉 苏文金 曹敏杰 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期141-145,共5页
根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(p1/p2),用RT-PCR扩增PRRSV福建毒株FJ-1的全长糖基化囊膜蛋白基因(ORF5),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性重组质粒进行序列测定与... 根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(p1/p2),用RT-PCR扩增PRRSV福建毒株FJ-1的全长糖基化囊膜蛋白基因(ORF5),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性重组质粒进行序列测定与分析.再设计另一条引物(p3)与p2从重组载体pUCm-T-ORF5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入表达载体pGEX-4T-3后在大肠杆菌中表达.结果表明,FJ-1毒株ORF5基因为603 bp,编码200个氨基酸,与北美型参考毒株VR-2332、CH-1a及欧洲型参考毒株LV的氨基酸同源性分别为87%、89%和53%,推定福建毒株FJ-1属于北美型毒株.原核表达产物经过SDS-PAGE及Western Blot分析,证实为GP5与谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白.分子量为41 kDa.表达量约占菌体蛋白的15%,主要以包涵体形式存在. 展开更多
关键词 PRRSV 福建 ORF5 序列分析 原核表达
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PRRSV福建流行毒株结构蛋白基因之克隆分析
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作者 吴国平 苏文金 曹敏杰 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第3期215-220,共6页
对福建省流行的PRRS病毒FJ-1的结构蛋白基因进行了克隆、测序.FJ-1结构蛋白基因序列长3188个核苷酸,包含7个开放阅读框(ORF).将FJ-1结构蛋白基因与国内外已发表的18个报道全长结构蛋白基因的PRRSV毒株进行核苷酸序列和推定的氨基... 对福建省流行的PRRS病毒FJ-1的结构蛋白基因进行了克隆、测序.FJ-1结构蛋白基因序列长3188个核苷酸,包含7个开放阅读框(ORF).将FJ-1结构蛋白基因与国内外已发表的18个报道全长结构蛋白基因的PRRSV毒株进行核苷酸序列和推定的氨基酸序列比较,发现:其与17个美洲型毒株核苷酸同源性达到89.7%~92.4%,推定各个ORF编码氨基酸的同源性在85.6%~98.6%之间;而与欧洲型毒株Lelystad核苷酸同源性为54.9%,推定各个ORF编码氨基酸同源性为53.2%~78.2%.遗传进化树分析表明FJ-1与美洲型毒株进化距离近,而与欧洲型毒株进化距离远.从分子水平上证明了福建省流行的PRRS病毒属于美洲型毒株. 展开更多
关键词 猪繁殖和呼吸综合征病毒 福建流行 结构蛋白基因 序列分析
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鸡痘病毒FJ01株的分离鉴定 被引量:1
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作者 高映雪 林敏 +5 位作者 胡换仪 刘小兰 刘昌锦 万文忠 罗锋 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第2期575-582,共8页
为调查福建规模化养鸡场病鸡的死亡原因,试验以福建省送检的鸡冠及头部皮肤有大量结节状痘痂的病鸡病料为研究对象进行了PCR鉴定。初步鉴定为鸡痘病毒(FWPV)株后,通过接种鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)分离病毒;用原代鸡胚成纤维细胞(CEF)和传代... 为调查福建规模化养鸡场病鸡的死亡原因,试验以福建省送检的鸡冠及头部皮肤有大量结节状痘痂的病鸡病料为研究对象进行了PCR鉴定。初步鉴定为鸡痘病毒(FWPV)株后,通过接种鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)分离病毒;用原代鸡胚成纤维细胞(CEF)和传代细胞DF-1细胞对病毒进行传代,观察该分离毒株在两种细胞上培养特性的异同;对被感染的CEF进行超薄切片观察病毒的分布及病毒粒子的形态;并针对该分离株的TK基因和FPV175基因序列进行同源性分析。结果显示,接种经抗生素处理后的病料匀浆液上清的CAM出现大面积单个白色隆起的痘斑,匀浆痘斑后同时接种CEF和DF-1细胞,两种细胞均能产生稳定可持续传代的细胞病变,但病变出现的时间及病变程度不同;透射电镜下观察到典型的FWPV粒子密集分布在CEF的胞浆中,清晰可见卵圆形外膜包裹着的两侧凹陷的核心。对其中23个病毒粒子进行统计测得病毒粒子的大小为(258~344)nm×(153~238)nm;针对FWPV TK基因和FPV175基因的PCR检测及测序结果与GenBank收录的FWPV(登录号:NC_002188.1)核苷酸序列同源性分别高达100%和99.8%。以上结果表明该分离毒株为FWPV,命名为FWPV-FJ01,为国内FWPV的防治提供了参考依据。 展开更多
关键词 鸡痘病毒(FWPV) 分离鉴定 病毒粒子 福建分离FJ01
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猪繁殖和呼吸综合征病毒ORF7基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 吴国平 刘冰心 +2 位作者 郭川 曹敏杰 苏文金 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第3期217-222,共6页
根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定... 根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了1对特异性引物P1/P2,用RT-PCR扩增了PRRSV福建毒株FJ-1和FJ-2的全长核衣壳蛋白基因(ORF7),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,提取阳性重组质粒进行序列测定与分析.结果表明:FJ-1和FJ-2毒株ORF7基因均为372 bp,编码123个氨基酸,与美洲型参考毒株VR-2332及欧洲型参考毒株LV的核苷酸同源性分别为95.16%,94.35%和61.40%,60.65%,其推导的氨基酸同源性分别为95.93%,95.12%和56.49%,55.73%.研究表明,福建流行的FJ-1和FJ-2属于美洲型PRRSV毒株. 展开更多
关键词 PRRSV 福建 ORF7 序列分析
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1999年福建省暴发不明热病毒病原的分离与鉴定 被引量:2
11
作者 于曼 秦鄂德 +3 位作者 王鹏程 耿丽卿 黄祥瑞 杨佩英 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2000年第3期170-172,176,共4页
目的 :对 1999年 8月福建省福州市暴发的不明热的病毒病原进行分离与鉴定。方法 :首先采用传代蚊细胞的微量培养方法进行病毒分离 ,并通过脑内接种途径观察对乳小鼠的致病性。然后经间接免疫荧光法和RT PCR技术对毒株进行型别鉴定。结... 目的 :对 1999年 8月福建省福州市暴发的不明热的病毒病原进行分离与鉴定。方法 :首先采用传代蚊细胞的微量培养方法进行病毒分离 ,并通过脑内接种途径观察对乳小鼠的致病性。然后经间接免疫荧光法和RT PCR技术对毒株进行型别鉴定。结果 :患者恢复期血清标本中存在登革 2型病毒特异抗体。从急性期血清标本中分离出 11株病毒 ,在传代蚊细胞中可产生稳定的细胞病变并对乳小鼠致病。其基因组为登革 2型病毒特异的RNA分子。结论 :福建省福州市流行的不明热疾病是由登革 2型病毒感染所致。 展开更多
关键词 登革病毒福建株 病毒 分离 鉴定 不明热疾病
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Epidemiological and etiological investigation of dengue fever in the Fujian province of China during 2004–2014 被引量:11
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作者 Jinzhang Wang Hongbing Chen +5 位作者 Meng Huang Yongjun Zhang Jianfeng Xie Yansheng Yan Kuicheng Zheng Yuwei Weng 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2017年第1期72-80,共9页
Dengue fever(DF) is a vector-borne disease and a tremendous socioeconomic burden on tropical and subtropical countries worldwide. To explore the characteristics of DF epidemic in the Fujian province, information of DF... Dengue fever(DF) is a vector-borne disease and a tremendous socioeconomic burden on tropical and subtropical countries worldwide. To explore the characteristics of DF epidemic in the Fujian province, information of DF cases in Fujian during 2004–2014 was collected and analyzed. The complete E genes of 48 viral isolates were amplified and sequenced for phylogenetic analysis. A total of 733 cases was reported, of which 612(83.5%) occurred during the peak period from August to October. Additionally, 76%(190/250) of imported cases originated from Southeast Asia countries, by the epidemiological investigation. Phylogenetic analysis of the 48 viral isolates revealed that three genotypes(I, IV, V) of DENV1, and one genotype each of DENV2(cosmopolitan) and DENV3(I) circulated in Fujian during 2004–2014. Similar to the results of the epidemiological investigations, the source of most of the viral isolates, including imported and indigenous cases, may be Southeast Asia countries; however, importation from adjacent provinces was also observed in recent years. Overall, DF is considered an imported epidemic disease in Fujian. Increasing diversity of the viral source and geographic expansion of the area affected by DF in recent years highlights the necessity for strengthening surveillance of the DF epidemic and developing strategies for DF prevention and control in Fujian. 展开更多
关键词 dengue virus E gene phylogenetic tree EPIDEMIOLOGY ETIOLOGY
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