不同金属富集能力品系福建牡蛎铜、锌耐受性分析

【背景】牡蛎具有强大的金属富集能力,被称为铜、锌超富集生物。同时,牡蛎在富集大量铜、锌后仍能正常存活,表现出超强的金属耐受能力。牡蛎对金属的富集能力存在显著的个体差异,是一种数量性状。目前已有采用富集动力学和全基因组关联分析等方法对牡蛎金属富集能力差异的机制进行解析的研究。但富集能力差异是否影响金属耐受性尚无定论。【目的】探究不同金属富集能力的福建牡蛎在不同发育阶段对铜、锌耐受性的差异。【方法】本研究利用福建牡蛎(Crassostrea angulata)高铜锌富集品系和低铜锌富集品系开展实验,测定不同品系福建牡蛎亲本的金属含量,并对两者D形幼体和6月龄成体进行铜、锌急性毒性实验,计算半致死浓度(LC_(50))。【结果】两品系间亲本的铜、锌含量均有显著差异;在D形幼体期,低富集品系幼体24 h的锌LC_(50)显著低于高富集品系幼体,24 h铜LC_(50)在两个品系中无显著差异,即高富集品系对锌的耐受性显著强于低富集品系,但两个品系对铜的耐受性无明显差异;在成体期,高富集品系成体96 h的铜、锌LC_(50)均高于低富集品系,即高富集品系对铜、锌的耐受性均显著强于低富集品系。【结论】福建牡蛎铜、锌富集能力越高,其耐受能力也越强,但受到了金属种类和生长发育阶段的影响,并且推测牡蛎在应对金属胁迫时,金属区域化隔离的解毒效率更高,也更适应环境的压力。【意义】本研究为探讨牡蛎金属富集能力与其耐受性间的联系奠定基础,并进一步为解析牡蛎金属富集和解毒机制提供参考。另外,研究牡蛎金属富集及耐受现象对保障食品安全以及利用牡蛎作为环境检测指示生物都具有重要意义。

温度与盐度对福建牡蛎与长牡蛎、熊本牡蛎、香港巨牡蛎种间杂交子代孵化及其早期生长成活的影响

本研究以野生福建牡蛎(A)为亲本一方,分别与野生长牡蛎(G)、熊本牡蛎(S)、香港巨牡蛎(H)进行杂交,除A♀×S♂、A♀×H♂两组杂交不育外,共得到AG(A♀×G♂)、GA(G♀×A♂)、SA(S♀×A♂)、HA(H♀×A♂)、AA(A♀×A♂)5个不同组合,并研究不同盐度与温度对其幼虫孵化率、早期生长及成活率的影响。结果表明,盐度25时AG、GA、SA、HA、AA五组孵化率分别达到最大值78.33%、75.00%、63.33%、55.00%、71.67%;温度低于25℃时,GA孵化率高于其他组,温度高于25℃时AG孵化率最大,其中25℃时达到最大孵化率83.33%;不同盐度条件下D型幼虫经过7 d培育,HA在盐度20时壳高达到最大值97.8μm,成活率46.67%,在盐度为35时第5天全部死亡。AG、GA、SA、AA四组在盐度为25时壳高有最大值,分别为124.7μm、121.2μm、93.7μm,111.8μm;不同温度条件下D型幼虫经过7 d培育,在温度为25℃时各组壳高和成活率均有最大值,大小排列依次为AG>GA>AA>HA>SA,各组成活率随温度升高呈现出先增大后减小的趋势,AG在25℃时成活率在所有组中最高,为88.89%;孵化后在适宜温度盐度条件下连续培养16 d,不同组之间壳高表现为:AG>GA>AA>HA>SA,AG壳高、壳高SGR及成活率始终大于其他组,而SA、HA两组壳高、壳高SGR及成活率始终小于自交组AA。研究表明,相较于福建牡蛎与熊本牡蛎、香港巨牡蛎的杂交,以及福建牡蛎的自交,福建牡蛎与长牡蛎的杂交子代表现出明显的生长及存活优势,生长潜力较好,且AG优于GA;AG组在盐度25、水温25℃条件下生长速率最大,成活率最高。研究结果可为福建牡蛎育苗行业良种选育提供参考依据。

连江黄岐湾三倍体福建牡蛎湾内、 外养殖群体的形态差异分析

为研究海湾内外三倍体福建牡蛎(Crassostrea angulata)的养殖效果,随机采集了连江黄岐湾湾内和湾外同批延绳平挂养殖的9月龄三倍体福建牡蛎各85个。应用单因素方差分析、多元回归分析、通径分析对壳长(X_(L))、壳宽(X_(W))、壳高(X_(H))、全重(TW)和肉重(MW)形态指标进行分析。结果表明:除壳高外,湾外牡蛎其余指标均显著大于湾内牡蛎,湾外牡蛎外形更圆,肥满度更高。通过多元回归分析建立了壳形态对全重的最优回归方程。通径分析表明,湾内和湾外牡蛎壳长、壳宽和壳高均可对全重产生直接正向效应,效应大小依次为壳长>壳宽>壳高;湾内和湾外牡蛎壳长对全重的决定系数均最大,分别为0.226和0.236。全重的相关系数R 2约为0.842,略小于0.850,基本上可以确定壳长、壳宽和壳高是决定全重的主要因素,但其也受壳质量和肥满度等其他因素的影响。

不同贝龄“金蛎1号”福建牡蛎数量性状的相关性和通径分析

随机选取1~4龄的"金蛎1号"福建牡蛎(Crassostrea angulata)个体各50个,分别测量壳长、壳高、壳宽、体质量和肉质量(即软体部质量)5个数量性状.采用相关性分析和通径分析的方法分别计算了不同贝龄群体的体质量和肉质量的通径系数和决定系数.相关性分析结果显示,除3龄群体中壳高和体质量相关系数最大外,其他贝龄群体均是体质量和肉质量的相关系数最大(p<0.05).根据多元回归分析结果,对体质量和肉质量分别建立了不同贝龄群体的4个多元回归方程.通径分析结果表明:1~2龄群体中影响体质量的主要因素为壳宽,3~4龄群体中则为壳高;各贝龄群体中影响肉质量的主要因素均为壳宽和体质量.决定系数分析结果与通径分析结果一致.上述结果为福建牡蛎人工选育工作的开展提供了基础资料.

2个壳色福建牡蛎群体的营养成分差异分析

对福建牡蛎(Crassostrea angulata)黄壳色选育群体和普通群体的常规营养成分、矿物元素、氨基酸组成和脂肪酸组成进行了比较分析.结果显示:黄壳色群体的水分和糖原质量分数(以干质量计)显著高于普通群体,蛋白质质量分数(以湿质量计)显著低于普通群体;黄壳色群体中Zn、Fe、Mn质量分数显著高于普通群体,而Ca质量分数显著低于普通群体;两者的氨基酸组分基本一致,但脂肪酸组分存在差异.上述结果表明在选育过程中两者在营养成分方面已表现出分化.

福建牡蛎选育群体的遗传多样性

利用8个微卫星标记对福建牡蛎(Crassostrea angulata)基础群体、‘金蛎1号’选育系F6和野生群体进行遗传多样性分析。结果表明,每个位点在各群体的等位基因数为7~24个,各群体在所有位点的平均等位基因数为10.3~17.6个,平均等位基因丰度为9.8~16.8。平均观测杂合度和平均期望杂合度分别为0.655~0.662和0.788~0.872。经邦弗朗尼校正,哈迪–温伯格平衡检验结果显示,在24个群体–位点组合中18个群体–位点组合显著偏离平衡(P<0.01)。群体内近交系数F_(is)值介于0.0095~0.2874,平均值为0.1992,遗传分化系数F_(st)介于0.0224~0.1627,平均值为0.0767,暗示选育群体中存在较低水平的非随机交配现象,属于中度偏低分化。研究表明,连续的选育对群体的遗传分化产生了一定的影响,但是,选育群体仍然具有较高水平的遗传多样性。

福建牡蛎软体的化学成份研究

目的 对福建牡蛎 ( Ostres rivularis Gould)所含之无机元素 ,有毒物质及氨基酸等 ,进行研究检测。方法 用原子吸收分光光度法、等离子光谱法及氨基酸分析仪进行分析。 结果 本品分别含有 17种游离氨基酸与复合氨基酸 ;并含有铁、镁等宏量元素与锌、锰及铜等微量元素 ,砷、铅含量小于 2 ppm而汞则小于 1ppb。 结论

福建牡蛎新基因SMRP1的功能分析

通过对福建牡蛎幼体不同发育时期的转录组文库比对分析,结果显示牡蛎附着变态相关蛋白1(settlement and metamorphosis related protein1,SMRP1)基因在幼体附着变态时期高表达,利用定量即时聚合酶连锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术确认了SMRP1基因在幼体附着变态时期高表达,且进一步发现SMRP1集中表达在牡蛎鳃和外套膜组织中,具有明显的组织特异性。利用组织和整体原位杂交技术检测SMRP1基因在不同时期幼体以及成体的外套膜和鳃组织中的表达定位情况,发现SMRP1基因集中表达在幼体壳顶时期到眼点幼虫的时期,在成体鳃和外套膜组织集中表达在组织的外层上皮细胞中。结合牡蛎幼体在附着变态时期鳃丝的快速生长发育及其在成体外套膜中的功能作用分析表明SMRP1基因对牡蛎幼体鳃和外套膜的形成和生长发育具有重要的作用。该研究为解析胰岛素相关多肽受体信号通路的功能提供数据支持。

潮间带和潮下带养殖的福建牡蛎生长、营养及呈味成分的差异分析

作为一种重要的经济贝类,福建牡蛎(Crassostrea angulata)的养殖模式已从早期的单一潮间带养殖发展到如今的潮间带与潮下带养殖并举.通过测定潮间带与潮下带不同养殖模式下福建牡蛎的生长指标及其一般营养成分、矿物元素、游离氨基酸与呈味核苷酸的含量,比较分析两种养殖模式对牡蛎生长、营养与呈味成分的影响.结果显示:相同养殖周期中,潮下带牡蛎的软体湿质量比潮间带牡蛎的高26.44%,且糖原含量(3.77%)也显著高于潮间带牡蛎(3.15%);所测的10种矿物元素在潮间带牡蛎中的含量均高于潮下带牡蛎,其中Ca、Fe、Mn、Pb含量差异显著;潮间带牡蛎鲜样的味精当量比潮下带牡蛎的高1.49%.综上可见,潮下带养殖模式较利于牡蛎生长和累积糖原,而潮间带养殖模式下牡蛎的矿物元素更丰富且鲜味更佳.

福建牡蛎17β-HSD基因的克隆及其生殖周期表达

17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-Hydroxysteroid dehydrogenase,17β-HSD)能够还原17-酮类固醇或者氧化17β-羟基类固醇,可以催化雄烯二醇和睾酮、雌酮和雌二醇、雄烯二酮和二氢睾酮之间的相互转化。本实验基于分子克隆的方法获得了福建牡蛎(Crassostrea angulata)类固醇激素合成相关酶基因17β-HSD的全长序列(全长1149bp),可编码307个氨基酸。通过实时定量PCR(qRT-PCR)技术研究了该基因在福建牡蛎中的时空表达特征,该基因在牡蛎大多数组织中(性腺、闭壳肌、外套膜、鳃和内脏团)均有表达,其中在性腺中表达量最高(p<0.05),且在生殖周期的排放期出现较高的表达量。原位杂交结果显示该基因在卵巢滤泡细胞中表达。讨论了其在牡蛎性类固醇激素合成过程中的作用,为阐明牡蛎具有内源性类固醇激素的合成能力奠定基础,为进一步研究牡蛎生殖内分泌机理提供参考。

三种简易方法提取福建牡蛎多糖的效果对比

目的以得率和纯度为指标,对比三种不同的简易方法提取福建牡蛎多糖的效果,以确定较适合采用的福建牡蛎多糖的制备方法。方法选用水提醇沉法、酶解提取法、热碱提取法分别提取福建牡蛎多糖,经干燥称重获得多糖粗品,以牡蛎湿重计算粗得率,经苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算纯度。结果采用水提醇沉法提取制备福建牡蛎多糖操作简便,粗得率较高;采用酶提法的粗得率较低,但纯度最高。结论本研究结果可为有效开发利用福建牡蛎多糖提供数据参考,也为福建牡蛎精深加工产业发展给予一定助力。

3β-HSD基因在福建牡蛎性类固醇激素合成机制中的表达研究

3β-羟化类固醇脱氢酶(3β-HSD)能够催化生成不同类型的类固醇激素,而关于贝类中类固醇激素合成相关酶的基因信息十分有限。本实验利用分子克隆的方法获得了福建牡蛎(Crassostrea angulata)性类固醇激素合成相关酶基因3β-HSD的全长序列,总长为1 444 bp,编码356个氨基酸。利用qRT-PCR和原位杂交技术检测了该基因在福建牡蛎中的时空表达特征,该基因在牡蛎大多数组织(外套膜、鳃、性腺、闭壳肌和内脏团)中均有表达,但在性腺中表达量最高(P<0.05)。原位杂交结果显示该基因表达在卵巢里富有分泌作用的滤泡细胞中。本文讨论了3β-HSD在牡蛎性类固醇激素合成过程中的作用,为阐明牡蛎具有内源性类固醇激素的合成能力奠定基础,为进一步研究牡蛎生殖内分泌机理提供参考。

三倍体福建牡蛎生长、育肥与海洋环境因子的关系

为探究影响三倍体福建牡蛎生长、育肥的关键海洋环境因子,对黄岐湾三倍体福建牡蛎养殖区开展为期10个月的调查,获得湾外和湾内养殖区牡蛎生长指标和海洋环境因子数据,并采用冗余分析(Redundancy analysis,RDA)等方法进行数据分析。结果表明:牡蛎壳长、壳宽、全重、软组织湿重、出肉率等生长指标湾内外组间差异显著,均为湾外显著大于湾内,壳高则湾内外差异不显著;湾外海水中硝酸氮、叶绿素a质量浓度、浮游植物细胞密度显著高于湾内,其余指标湾内外无显著差异。RDA分析结果显示,影响牡蛎生长指标的主要因子是水温、硝酸氮、浮游植物细胞密度和化学需氧量,浮游植物细胞密度和叶绿素a质量浓度对牡蛎出肉率影响作用最大。综合分析认为,水温、浮游植物生物量、营养盐是影响三倍体牡蛎生长、育肥的关键海洋环境因子,春季至初夏至少有1个月时间海区平均叶绿素a质量浓度在6μg/L有利于牡蛎育肥。本研究可为三倍体牡蛎健康养殖、品质提升和养殖海区的选择提供科学依据。

体外原代培养牡蛎鳃细胞对锌离子的耐受性研究

本文以福建牡蛎为实验材料,探索体外原代细胞培养方法,测试体外培养细胞对锌离子的耐受特性。结果表明,以pH7.25、渗透压摩尔浓度为1000mosm、10%透析胎牛血清的L-15优化培养基,能顺利的在体外培养牡蛎鳃细胞且细胞活力在80%以上;原代牡蛎腮细胞对锌离子暴露的耐受特征与牡蛎对锌离子的耐受特征高度相似,24、48、72、96小时的半致死浓度分别为239.47、72.60、12.13和8.19mg·L^(-1),表明体外培养的牡蛎鳃原代细胞维持了原有的锌耐受特性。