福建金线兰多倍体的诱导和倍性鉴定

[目的]对福建金线兰多倍体进行诱导和倍性鉴定。[方法]以福建金线兰为材料,以秋水仙素为诱变剂,分别用浸泡法和涂抹法处理福建金线兰试管苗不定芽,进行多倍体诱导,并在显微镜下观察鉴定其染色体的倍性。[结果]以浓度0.05%秋水仙素为诱变剂,用涂抹法处理72 h的效果较佳,加倍率为35%;对多倍体材料进行染色体鉴定发现,二倍体染色体为2n=40条,四倍体为4n=80条。[结论]该方法可以培育福建金线兰多倍体,能提高其移栽成活率和亩产量。

福建产金线莲中黄酮苷成分的研究

目的对兰科开唇兰属植物福建产金线莲Ancecotoch ilus roxburgh ii提取物中的正丁醇萃取部分进行分离纯化和结构鉴定。方法利用硅胶柱色谱、凝胶LH-20和反相高效液相制备等方法进行分离纯化,使用快原子轰击质谱、核磁共振等现代波谱技术确定其结构。结果从福建产金线莲95%乙醇渗漉提取物正丁醇部分得到5个黄酮苷类化合物,其结构为:槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅰ)、槲皮素-3-O-β-D-芸香糖苷(Ⅱ)、异鼠李素-3,4-′O-β-D-二葡萄糖苷(Ⅲ)、异鼠李素-3,7-O-β-D-二葡萄糖苷(Ⅳ)、异鼠李素-7-O-β-D-二葡萄糖苷(Ⅴ)。结论5种化合物均为首次从该植物中分得,除化合物Ⅲ外均为首次从兰科植物中分离得到。从福建产金线莲中得到大量黄酮类化合物,推测黄酮为该植物中主要活性成分。

福建金线莲的化学成分研究Ⅲ

从福建金线莲(Anoectochilusroxburghii)乙醇提取物的己烷萃取部分分得3个化合物和一甾体混合物,三个化合物结构分别鉴定为Sorghumol(1),木栓酮(2)和棕榈酸(3),甾体混合物经EIMS、ESIMS/MS技术确定含有24异丙烯基胆甾醇、开唇兰甾醇、β谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇。所有化合物均为该植物首次报道,其中化合物1为首次从兰科植物中分得,并首次对其光谱数据进行了详细的分析,化合物2为从该属植物中首次分得。

鼎湖山金线兰人工栽培技术研究

[目的]对鼎湖山金线兰的人工栽培技术进行研究。[方法]以组培幼苗为材料,比较自然栽种条件下5种基质处理对植株生长的影响,研究鼎湖山金线兰人工种植的适生条件。[结果]泥炭土-珍珠岩(4∶1,V/V)或泥炭土-沙子-木屑(3∶1∶1,V/V/V)混合基质适宜于金线兰的生长,幼苗成活率达到97.6%～94.3%,植株高度、单株叶片数和叶质量状况良好。结合试验地小环境自然气候变化情况,初步得出鼎湖山金线兰栽培适温为23～28℃,相对湿度在90%左右,适生pH约为4.75,栽培时设置遮阳网,基质不宜过湿。[结论]该试验对鼎湖山金线兰的人工栽培技术进行研究,为鼎湖山金线兰的进一步开发利用提供了依据。

GC-MS法对金线兰挥发油化学成分的分析

利用索氏提取法和超声辅助提取法,分别通过非极性溶剂(石油醚)、极性溶剂(乙醇)来提取金线兰[Anoectochilus raxburghii(Wall.)Lindl]挥发油,并采用气相色谱-质谱联用法测定化合物组成。结果表明,石油醚索氏提取法效果最佳,共检出34种成分,鉴定出26种化合物,占挥发油总量的86.3%,主要成分为叶绿醇32.823%,油酸28.759%,植物醇5.271%,油酸酰胺4.797%,反式角鲨烯3.484%,植酮2.787%,2-单棕榈酸甘油1.789%。该结果将为金线兰的进一步开发提供基础数据。

外源ABA对金线兰抗氧化酶活性及其同工酶的影响

以金线兰组培苗为试材,采用提取粗酶液的方法,研究外源脱落酸(ABA)对金线兰超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化氢酶(CAT)4种抗氧化酶活性及其同工酶的影响。结果表明:高浓度ABA的长时间处理对提高SOD和POD活性较为显著;低浓度ABA处理下APX活性变化幅度较大,其中高浓度ABA处理24h时APX活达到最大值;不同浓度ABA处理下CAT活性均呈"M"型的变化趋势。同工酶电泳分析发现,不同浓度的ABA处理,在一定时间范围内均可诱导产生新的POD和APX酶带,而不诱导新的SOD和CAT酶带的表达。

金线莲组培快繁与移栽试验研究

金线莲[Anoectochilus roxburghii（wall）lind]是兰科开唇兰属花叶开唇兰又名金线兰、金线草，具有显著的清热解毒、祛风除湿、凉血平肝、固肾的功效，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。金线莲叶呈黑紫色，有光泽，墨绿色中有金黄色网纹，背面淡紫色，奇特美丽，还是一种极具观赏价值的室内观叶植物珍品。是福建和台湾等地极其珍贵、稀少的中药材，金线莲为典型的阴性药用植物，常生长在阴敝的阔叶林下的肥沃腐叶土中，对林中空气、温度、光照、积温等生态条件要求严格。近年来金线莲主产地的森林植被，水土遭受不同程度破坏，金线莲赖以生存的自然环境发生变化，野生资源锐减，再加上自然繁殖率低，生长缓慢且虫、鸟等动物喜食，自然资源稀少，现已濒绝，1990年被福建省人民政府列入“福建省重点保护野生药材物种”，因为金线莲在临床中广泛应用，而且疗效极好，具有极高的经济效益和社会效益。

基于代谢组学和网络药理学分析福建金线莲叶和台湾银线兰叶治疗肝纤维化作用差异

目的 初步分析福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)和台湾银线兰(Anoectochilus formosanus)的叶片在治疗肝纤维化疾病的作用机制差异,为分析两者的临床疗效差异及其资源的精准利用提供参考信息。方法 利用代谢组学技术分析福建金线莲叶(the leaves of A. roxburghii,Arl)和台湾银线兰叶(the leaves of A. formosanus,Afl)的差异代谢物;并结合网络药理学方法分析其差异代谢物治疗肝纤维化疾病的作用差异。结果 利用代谢组学的方法分析初步得到Arl和Afl的46个差异代谢物,主要为黄酮类、糖苷类和甘油磷脂类等,其中有23种差异化合物具有潜在药用活性。基于网络药理学的方法,预测了23种差异化合物的759个相关靶点,与肝纤维化疾病的相关靶点进行映射,得到交集靶点249个,其中AKT1、STAT3、VEGFA等48个关键靶点被预测为治疗肝纤维化的主要差异靶点;作用靶点较多的关键差异化合物为Arl相比Afl含量较高的化合物,预示Arl中富含更多可以用于治疗肝纤维化的有效化合物。GO富集功能和KEGG富集分析表明,福建金线莲与台湾银线兰的差异成分参与治疗肝纤维化疾病的信号通路有所不同,VEGF信号通路为Arl相比Afl含量较高的差异化合物的主要差异信号通路,磷脂酰肌酶3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路为Arl相比Afl含量较低的差异化合物治疗肝纤维化疾病的主要差异信号通路。分子对接结果表明各差异成分与其对应的关键靶点均有较好的结合活性。结论 本研究表明福建金线莲与台湾银线兰叶片中存在一些差异代谢物,预测了其治疗肝纤维化疾病作用机制差异,并初步验证了其作用靶点,为金线莲资源的精准利用具有指导性意义。

金线兰黄酮相关基因的克隆与生物信息学分析

为了对金线兰查尔酮合成酶CHS和黄酮醇合成酶FLS进行基因的克隆和生物学信息分析,本研究参照测序得到的金线兰CHS与FLS基因的序列,设计特异性引物进行扩增。利用软件,对金线兰CHS和FLS蛋白的生物信息进行预测分析。结果显示,金线兰CHS基因的CDS总长度1 185 bp,编码394个氨基酸,金线兰FLS基因的CDS总长度1 035 bp,编码344个氨基酸。金线兰CHS蛋白与FLS蛋白皆是酸性、亲水性、无信号肽、非分泌、非跨膜蛋白,亚细胞定位在其他细胞器上,丝氨酸磷酸化位点具有调控二者构象变化的重要作用。在Blast上进行序列比对,发现金线兰CHS序列和FLS蛋白序列与一些兰科植物的相似度很高,前者序列同源性均高达85%以上,后者同源性高达82%和81%,构建的进化树显示了他们较近的亲缘关系。推测得到的CHS序列即为金线兰查尔酮合成酶的编码序列,FLS蛋白序列即为金线兰黄酮醇合成酶的编码序列。本研究为进一步研究金线兰中黄酮相关基因及其调控提供一定参考。

金线兰根茎叶内参基因的筛选

为了筛选金线兰根茎叶最合适的内参基因,本研究使用实时荧光定量PCR技术,以不同发育阶段的金线兰的根、茎、叶为材料,使用GeNorm、NormFinder和RefFinder软件分析5个备选基因(26SrRNA,ACT-1, ACT-2, UBQ, EF-1α)的稳定性和差异表达情况,筛选合适的内参基因。结果显示,不同营养器官和生长时期的内参基因表达稳定性有一定差别:(1)在营养器官组织中,叶的最合适内参基因为EF-1α,根的为UBQ与EF-1α,茎的为ACT-1;(2)在不同生长发育阶段中,2个月样品的最合适内参基因为26SrRNA,4个月为UBQ与EF-1α。综合以上结果表明在分析金线兰基因差异表达时,适合的内参基因是EF-1α,内参基因组合则可选择EF-1α与26SrRNA。本研究为金线兰后续相关研究提供参考。